ICC患者血浆ctDNA突变检测数字PCR平台的建立及临床应用价值 下载：93 浏览：497

戴谦1 黄斐1 王宇鹏2 黄傲2 成剑文2 潘柏申1 郭玮1 周俭2 樊嘉2 杨欣荣 2王蓓丽1 《国际检验医学》 2020年12期

摘要: 目的建立KRAS G12D、TP53 C242S、IDH1 R132C突变数字聚合酶链反应(dPCR)检测平台，并初步评估其检测性能及临床应用价值。方法选取行切除手术的肝内胆管细胞癌(ICC)患者22例，设计KRAS G12D、TP53 C242S、IDH1 R132C突变位点的引物及探针，建立dPCR突变检测平台。并采用不同浓度的自配标准品质粒验证该平台的准确性、精密度、空白限、功能灵敏度及线性范围。将外周血dPCR检测结果与外周血Oseq-ctDNA及组织Oseq-T靶向测序结果进行比较。ICC患者行切除术后，每6个月采集1次外周血并跟踪随访，评估该突变检测平台对ICC患者术后疗效监测的作用。结果 dPCR平台的准确性良好[3种突变(KRAS G12D、TP53 C242S和IDH1 R132C)3个丰度的检测结果与理论值的偏差均<±15%]，批内和批间精密度[变异系数(CV)]均<20%，空白限为4拷贝，功能灵敏度为0.1%，且在0.1%～10.0%范围内线性良好。ROC曲线分析结果显示，ctDNA突变谱诊断ICC的曲线下面积(AUC)为0.659，敏感性为31.8%，特异性为100%；与糖类抗原19-9(CA19-9)联合检测诊断ICC的AUC为0.841，敏感性为68.2%，特异性为100%。dPCR平台的检测结果与Oseq-ctDNA测序结果有较高的一致性(kappa=0.792，P=0.007)。随访结果显示，有1例ICC患者术后18个月KRAS G12D突变升高，与影像学检查确认的复发时间一致。结论建立了检测KRAS G12D、TP53C242S、IDH1 R132C突变的dPCR平台，可用于ICC患者的辅助诊断、疗效评估及术后动态监测。