在食品微生物检验工作开展过程中,菌种的利用具有关键性作用和意义,一旦对其保存环境及条件的选择不符合相关规定和要求,会直接影响检验数据的准确性。
1.菌种保藏的实际目的以及原理分析
1.1食品微生物检验菌种保藏的实际目的
菌种的保藏实际目的是让菌种的死亡率得到降低,同时减少其出现变异以及污染的情况发生。通过合理的保藏可以让菌种维持原有的活力,并保持自身具备的特性,让食品微生物检验工作得到顺利开展,保证实验结果的准确性及可靠性。
1.2菌种保藏的主要原理
食品微生物检验用菌种保藏的主要原理如下:1,需要对优质的菌种进行选择,保证其在利用过程中的稳定性及安全性;2,实验人员应该对菌种具备的生理以及生化特性做好深入分析,使其在实际存储过程中具备相对较低的代谢速度,进而达到让其放慢繁殖速度或者终止繁殖的目的,菌种的最佳保藏状态为休眠状态,从而拥有更长的保藏时间。
1.3菌种保藏的注意事项
工作人员除了要保证优质菌种的选择外,还应该在维持菌种的基本特性基础上,帮助其保持活力。工作人员需要对保藏方式的经济性进行考虑,同时要求操作流程简单,进而实现对保藏成本的有效控制,需要菌种对保存环境的要求较低,并且实际实验过程中具备相对广泛的适用性。
2.常用菌种保藏方法的实际应用分析
2.1斜面低温保藏法的原理及应用效果
对于斜面低温保藏方法的实际应用而言,在工作用菌种的保存方面较为常用。实际的操作流程如下:选择合适的斜面培养基,针对多数菌种来说,通常选择营养琼脂作为主要的培养基,工作人员需要完成菌种在培养基上的接种工作,等菌种得到充分的生长之后,需要工作人员将其转移到环境温度为2—8℃的空间内进行保存。针对部分对温度要求特殊的菌种而言,如铜绿假单胞菌以及副溶性弧菌等,如果保存环境温度过低,容易引发其发生死亡,所以对于此类菌种的保存,需要保证环境温度为25℃。斜面低温保藏方式具有操作流程简单以及对设备要求低的优势,同时采用此种保藏手段,菌种的成活率相对要高,对多数菌种来说,此种方式较为适合进行短期保存。然而此种方式存在一定的缺陷,对于需要长期保存的菌种,缺少一定的适用性,在此种环境中,菌种一般会继续进行代谢,导致菌种活性降低,容易引发污染以及变异,影响检验结果。
2.2液体石蜡保藏法的原理及应用效果
液体石蜡保藏法与斜面低温保藏法进行比较分析,此种方式具备更强的应用优势。此种方式的具体原理是将液体石蜡加入到固体斜面或者半固体高层培养基上,通过石蜡的覆盖作用,形成一层阻隔,防止氧气进入其中,对于需氧菌而言,由于缺少氧气的供给,无法保持继续生长,同时避免培养基内的水分出现蒸发,使得菌种的保藏时间得到适当延长。具体操作流程如下:对经过灭菌操作的无水液体石蜡进行利用,在半固体高层培养基或者斜面管中加入无水液体石蜡,与菌种表面相比,石蜡需要高出1cm,进而获得良好的氧气隔绝效果,同时使试管始终保持直立姿势,放置在温度不高于4℃的环境中进行保存,同样针对存在特殊要求的菌种而言,需要保证其环境温度为25℃,此种方式的储存期限为1—2年及以上。液体石蜡保藏法不仅可以延长实际的存储时间,还能解决斜面低温保藏法存在的应用难题。但是此种方式仅适用于不能分解石蜡的菌种,并且由于试管需要始终维持直立,对空间的需求较大,对于正常的携带来说,存在不利影响。
2.3磁珠管保藏法的原理及应用效果
磁珠管保藏法的具体原理是将新鲜纯培养物从培养平板上取出,前提是保证培养平板处于良好的生长状态,将取出的培养物接种到菌株培养管内,开展对应的配制工作,从而得到3—4麦氏比浊度的菌悬液,如果使用的是苛养菌,需要接入的量稍微多一点。工作人员应该将保存管拧紧,为了达到让细菌乳化的目的,需要来回颠倒数次,应该注意不能采用旋摇的方式。工作人员可以对无菌移液器进行利用,吸干净管内的液体,同时将保存管拧紧,以最快的速度将其放到-20℃或者-80℃的冰箱内进行保存。磁珠管保藏法具备的应用优势是操作方便快捷,能够保存较长的时间,并且无需占用较大的空间,适合需要进行长期保存的菌种使用。
2.4甘油冷冻管保藏法的原理及应用效果
甘油冷冻管保藏方式的操作流程是在优质的培养平板上将新鲜纯培养物取出,之后将其放到液体培养基中,当培养标准达到菌密度OD600为1.0—1.5时,需要将等体积的无菌甘油加入到菌悬液当中,无菌甘油的浓度需要保证在20%,通过轻轻的振动,使混合液体变得更加均匀和充分,并在多个无菌试管中进行分装,并鱼-80℃的环境中进行储存,可以保存的实际年限约为2—4年,同时也可以将得到的混合液体放置到-20℃的环境中进行保存,对于多数菌种的保藏而言,通常情况是温度越低,可以保存的时间越长。甘油冷冻管保藏方式的应用优势是适用范围广泛,并且能够得到显著的保存效果,同时保存的菌种不容易出现变异情况,尤其针对苛性菌而言,如弧菌以及链球菌等,存在良好的保存效果,此种方式对需要长期保存的菌种较为适用。
结语:对于食品微生物检验工作的顺利开展来说,菌种的合理保藏十分关键。科学的保藏方式选择可以让食品微生物检验工作的结果更加精确,在进行保存方式选择时,工作人员需要对有保藏需求的菌种特性做好深入分析,同时结合其对保存环境的要求,明确菌种适宜的环境温度,需要选择两种以上的方式进行有机结合,进而让菌种的活动得到维持,促使食品微生物检验的各项工作顺利开展。
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