结肠癌是危害人类健康的三大癌症之一。近年来，由于人口老化，结肠癌的发生率及死亡率逐年升高。由于其恶性程度高，预后极差，多数患者在被诊断为中或中晚期时才被发现。由此可见开展相应的预防和控制措施是非常必要的意义。早期诊断和早期干预是减少结肠癌患者死亡的重要方法。结肠癌检查方法主要有肠镜检查，但是这种方法是有创的，会有一定的副作用，因此，不适合作为高危的结直肠癌筛查[1]。基于多靶点的粪便 DNA分析技术是一种新兴的结肠癌早期筛选技术。该方法操作简便，无创，敏感性高，特异性强，有望成为结肠癌的早期筛查方法。为探索多靶标粪便 DNA对结肠癌的早期筛查意义，本研究选取结肠癌术后患者为研究对象，分析术后早期复发预防价值，报道如下。
1.资料与方法
1.1一般资料
本次研究者为60例II-III期结肠癌术后患者，时间为2022.1-2024.3。纳入标准：接受结肠癌手术，且治疗无禁忌症。排除标准：伴有多种脏器功能衰竭者。男20例，女40例，年龄45-75岁，平均60.31±1.32岁。
1.2方法
依照多靶点粪便 DNA试剂盒取样指南中所述方法收集粪便标本。该仪器是杭州诺辉生物技术股份有限公司生产，样品采集后请专家对样品进行测试，并发出测试结果。如果试验呈阴性，则进一步做肠镜和组织病理学检查，以明确疾病的诊断。如果患者有痔疮出血、拉肚子不成形或者月经期间不能采样。粪便样本收集完毕后，置于-80度低温冷藏。将粪便 DNA提取，在1.8-2.0范围内对粪便 DNA进行提取。采用实时荧光定量 PCR方法，按照人 Kras基因的7种变异测定工具的说明进行扩增，该引物为杭州诺辉生物技术股份有限公司人工合成，阳性患者需要做肠镜病理确诊，复核阳性。
1.3观察指标
本次研究指标：诊断符合率。
1.4统计学方法
应用 SPSS22.0软件对粪便DNA诊断数据结合分析，以 n、%为诊断符合率；用卡方分析，对比为P＜0.05，表明有统计学意义。
2.结果
粪便DNA检验阳性3例，最终复发3例，诊断符合率差异小（P＞0.05），比对情况数据见表1。
表1粪便DNA检验诊断符合率结果比较（n,%）
3. 讨论
相关研究显示，对于肠癌的早期筛查其灵活性和便利性显得尤其重要，越早诊断，越可以提高患者的预后。已有研究表明，早期精准诊断结肠癌患者，及早给予合理的干预可以减少结肠癌患者的病死率，减轻患者的心理负担，改善患者的生存质量。结肠癌的确诊依据是肠镜和病理检查。肠镜是一种有创的检查方式，是一种常见的筛查方式，术前需要进行肠道准备。粪隐血实验是一种非侵入式的结肠癌早期筛选技术。然而，由于其灵敏度和特异性不高，不能很好地解决结肠癌的早期诊断问题[2]。对结肠癌患者粪便 DNA检查可作为一种无创的辅助检查手段。这项测试基本上是在患者的粪便中进行多个 DNA测试。通过对患者进行检测，可以有效地改善结肠癌的筛查灵敏度和特异性，随着结肠癌的发展，其体内的突变的核酸材料和潜隐血红蛋白都会从肠道中被释放出来。通过对粪便标本进行分析，可以更直观地反映出结肠癌患者的 DNA甲基化水平，从而为结肠癌的早期筛查奠定基础。研究发现，结肠癌术后患者粪便中除有大肠上皮细胞外，还有许多肿瘤细胞及游离肿瘤 DNA。另外，从排泄物中提炼出来的 DNA品质较高，这对 DNA的储存是有益的。粪便DNA甲基化测定是一种灵敏度高、特异性强的无创检查手段。已有研究表明，结肠癌的发生发展与 DNA甲基化水平的改变密切相关。结肠癌的早期存在 DNA甲基化的改变，而BMP3,NDRG4β- actin等基因的过甲基化修饰是其关键的生物学标志。结肠癌是一个复杂的多个基因，所以用多靶标的粪便 DNA分析方法较单纯的粪便 DNA更为灵敏。已有研究显示，多种 DNA标志物的组合对结肠癌的诊断敏感性可达70%-90%，对晚期结肠癌的敏感性可达40%-80%。粪便 DNA检查结肠癌和进展期结肠癌的敏感性较高。在本项目的基础上，多靶点的粪便 DNA分析方法已被 FDA通过，并被美国医疗保险系统纳入临床试验，并被国际上多个国家的专家委员会认可[3]。基于目前国内多目标物的粪便 DNA联用分析，该方法具有更高的诊断效率。2018年，中国癌症学会结直肠癌专业委员会在《中国结直肠癌肿瘤早诊策略筛查专家共识》中首次将多靶点的粪便 DNA联合测定方法列入了建议的筛选标准。通过对多目标粪便 DNA的测定，未发现结肠癌和进展期肿瘤组织。经肠镜和组织学分析发现，应用多靶点技术对结肠癌和发展期肿瘤进行筛查。
本文发现，粪便DNA检验阳性率与最终复发率对比，对比无意义（P＞0.05）。因此，结肠癌术后早期复发预测中粪便DNA具备较高的诊断价值。结肠癌发病率居世界第三，死亡率第二，发达国家发病率是发展中国家的3倍。我国结肠癌的发病率呈逐年上升趋势，表现为年轻化的发展，对人们生活质量及身体健康造成极大的危害。结肠癌是一种以“腺瘤-腺癌”为特征的结肠癌，由腺瘤发展为癌症，一般需5-10年，患者在初期常没有任何临床表现，直至末期才确诊。结肠癌被划分为 I- Ⅳ期，其五年存活率不足10%，I期则高达90%。早诊断、早干预是提高。结肠癌疗效的关键。肠镜结肠癌的“金标准”，但其费用昂贵且有创，不适合用于大样本的调查。粪隐血检测是一-种简单方便的非侵入性筛选手段，但存在灵敏度低、特异性差、易受到膳食、病变部位及其它出血性病变等因素影响等问题，很难达到临床的检测需求。发展新型高效的无创结肠癌筛查新技术具有重要意义。近年来，大量研究发现，结肠癌早期诊断中，粪便 DNA是一种有效的非侵入性检测手段。
肿瘤发展是一个多环节研究课题。表观遗传是一种不引起 DNA序列发生永久变化的可遗传变异，在多种肿瘤发生发展过程中扮演重要角色。在结肠癌患者中，表观遗传学改变较基因改变更为常见。微卫星不稳定性，组蛋白修饰， DNA甲基化等都是其中重要的因素。DNA甲基化是一种最为常见的调控方式，其主要特点是由 DNA甲基转移酶将甲基引入到胞密啶环C5位，形成5-甲基胞嘧啶。在人体内， DNA的甲基化通常是由 CpG二核苷酸所决定的。CpG是一种高度去甲基化的 DNA，在人体中有60%-70%的细胞都是由 CpG岛组成。已有研究表明，在结肠癌发生发展的初期，抑癌基因 CpG岛区域发生异常高的甲基化，引起相关基因的下调或沉默。在正常肠道组织中有大量的细胞凋亡，这些细胞被当作普通的粪便物质从肠道中排出。以每日1010个细胞的速率死亡，并且生命周期为3-4天。大肠上皮组织有一层完整的组织。结肠癌患者肠道内有大量的结肠癌细胞，其脱落的结肠癌细胞比正常人多4-5倍。粪便 DNA甲基化测定是一种新兴的无创检查方法，可以探测大肠、大肠及粪便中癌组织 DNA的甲基化水平。分泌性卷曲相关蛋白SFRP2是一种分泌性的糖蛋白，Wnt通路的重要拮抗因子。Wnt是调控细胞增殖、分化和凋亡的重要途径，其活化与肿瘤的发生发展密切相关。SFRP高甲基化可引起 SFRP低/低表达，进而活化 Wnt通路，促进结肠癌的发展。SFRP1和SFRP2是结直肠癌组织中高表达的一类基因。SFRP2在结肠癌和非结肠癌患者的粪便中存在差异，其甲基化水平高达77%-90%。甲基化特异性 PCR技术对中国地区结肠癌、腺瘤、增殖性息肉及溃疡性结肠炎患者进行了分析。多个基因的组合分析可以增加诊断的敏感性，但也会导致特异性的下降。基于粪便 DNA甲基化的分析方法还不完善且价格昂贵，在大肠癌的大样本筛查中的推广存在困难和挑战。通过分子生物学和免疫学等学科的深入研究，粪便 DNA甲基化将会是大肠癌早期诊断的一种主要方法。
综述，多靶点的粪便 DNA测定对结肠癌的早期筛选具有很大的实用意义，能有效地改善结肠癌的筛检准确率，由于该研究涉及的样本量较小，有待于更大的样本量验证多靶点粪便 DNA测定对结肠癌的诊断意义。
作者简介：张兴发，男，名族：汉，出生日期：1984年8月2日，籍贯：贵州福泉，学历：大学本科 职称：副主任医师，科室：胃肠镜。
