在临床上，轮状病毒是引起婴儿腹泻的最主要原因，也是引起婴儿死亡的重要原因。
轮状病毒引起的腹泻至今尚无有效的防治手段，因此，积极开展该疾病的防控工作是十分必要的[1]。轮状病毒为一种类似车轮的双链核糖核酸病毒，具有极强的传染性，是秋冬季导致婴幼儿腹泻的重要病原，5岁以下儿童均有感染史；我国每年因轮状病毒导致的消化道感染性腹泻患者达1800万名人，死亡人数高达40,000人[2-3]。当儿童被轮状病毒感染后，通常会表现为急性胃肠炎，也就是会有发热、呕吐、腹痛等症状，拉出来的食物主要是白色的米汤样或黄绿色的鸡蛋花样稀水便，气味难闻，严重的还会引起脱水、肺炎、中毒性心肌炎等并发症而死[4-5]。目前，针对轮状病毒的检测方法有很多种，包括胶体金免疫层析、免疫荧光、免疫电镜、核酸聚丙烯胺凝胶电泳法、酶联免疫吸附法等。而本研究着重对GICA在婴幼儿粪便样本中轮状病毒检测中的应用效果及意义进行分析，以积极探索轮状病毒的流行特点，为研发轮状病毒疫苗提供一定参考，报道如下。
一般资料与方法
1.1一般资料 将在2020年2月至2021年2月期间我院儿科收治的92份来自婴幼儿腹泻患儿的粪便标本，其中包括52例男、40例女，年龄范围在5个月～5岁，年龄平均值为（3.25±0.24）岁，病程范围在2天～5天之间，病程平均值为（3.16±0.34）天；患儿在入院后都表现出了典型的轮状病毒感染性症状，病情发展很快，同时还会有腹泻、腹痛、呕吐、发热等表现，部分患儿还会有不同程度的高渗脱水情况。
1.2方法
1.2.1仪器设备：本研究试剂盒选择由珠海丽珠试剂股份有限公司生产的A群轮状病毒检测试剂盒(胶体金法)，结构组成：试剂条/检测卡:由塑料片材、包被了a群轮状病毒多克隆抗体和羊抗鼠抗体的硝酸纤维素膜、包被了A群轮状病毒单克隆抗体的玻璃纤维、吸水纸等组成。
1.2.2逆转录-聚合酶的链反应（RT-PCR）法：①引物，反转录引物可以分为腺病毒，诺罗病毒，星形病毒，轮状病毒等，都是从高保守的碱基中衍生出来的。本项目拟选取 RVVP7和51-71 bp之间的两条引物，分别以376-392 bp的间隔作为引物，分别从5-GTGTGGGCATCC-3'和5'-GATCCTGTGGGCATCC-3'，用这两条引物分别在两个区域内分别扩增342 bp的1条 DNA片段。首先，将以上引物稀释至50μ mol/L，然后放入-20℃冷藏；②RNA提取：将200μ L的粪便样本上清液与5% SDS、100毫克/L蛋白酶 K混合，置于37℃水中进行1小时的水浴。最终，在酚-三氯甲烷-异戊醇（以体积计25:24:1）的混合物中提取提取物，然后在-20°C下添加3小时的乙醇，4℃下离心20分钟，除去上清液，将10μ L的沉淀物溶于 RNA酶水中；③cDNA合成：向 RNA溶液中添加1μ L的下游引物，然后放入95摄氏度的水浴5分钟，水浴结束后马上冰浴5分钟。其次，向其中加入1μ L AMV反转录酶溶液，1μ L不含 RNase水，1μ L RNase抑制液，2μ LdNTP,4μ L反转录缓冲液，42℃水浴1小时，95℃水浴5分钟；④PCR扩增，进行琼脂糖凝胶电泳检测，紫外检测器检测， PCR产物以 DNA分子量为标准品进行测定。
1.2.3GICA：试剂盒主要是双抗体夹心法，将标本采集器打开，用盖子上随附的取样棒将粪便样本抽出来，大概60 mg左右，如果大便太稀，可以用塑料吸管，大概50 ml的样本放在收集器中，加9倍生理盐水稀释后，混合均匀，然后将上面的粪便清液滴入试剂条内，10 min后观察结果。若粪便样本中有A群轮状病毒，检测卡上显示一条红线，表示情况为阳性，若无A群轮状病毒，则检验卡内无变动，该状态判定为阴性。
1.3观察指标
①对比RT-PCR检测法与GICA对粪便样本的检查结果；②对本次研究对象的年龄分布情况、季节分布情况进行分析。
1.4统计学方法 本研究采取SPSS 19.0的统计学软件进行分析，P＜0.05时，则表示差异有意义。采用（
）表示研究中计量资料，实施t检验；采用[n(%)]表示研究中计数资料，实施c2检验。
结果
2.1RT-PCR检测法与GICA对粪便样本检测结果的对比
本次检测中经RT-PCR检测法可见轮状病毒阳性74例，占比为80.43%，同时其中合并诺如病毒9例、占比为9.78%，合并星状病毒16例、占比为17.39%，合并腺病毒22例、占比为23.91%；而经GICA可见轮状病毒阳性86例，占比为93.48%；经GICA的检测准确率高于RT-PCR检测法，见表1.
表1 RT-PCR检测法与GICA对粪便样本检测结果的对比
2.2研究对象的年龄分布情况
调查后可见本次研究对象中1岁以下的患儿例数最多为31例、占比为36.05%，其次为1岁患儿共22例，占比为25.58%，再者为2岁患儿共19例，占比为22.09%，其余见表2.
表2 研究对象的年龄分布情况
2.3研究对象的年龄分布情况
调查后可见本次研究对象中12月的患儿例数最多为20例、占比为23.26%，其次为2021年1月的患儿共17例，占比为19.77%，再者为11月和2020年/2021年2月的患儿分别为12例，占比为13.95%，其余见表3.
表3 研究对象的年龄分布情况
讨论
腹泻是一种高发于5岁以下婴幼儿的疾病，具有极高的致残率和致死率，是发展中国家儿童主要死因[6]。轮状病毒属于呼肠孤病毒科的轮状病毒属,属于双链RNA病毒，是一种严重危害人类健康的感染性疾病。轮状病毒分为 A组、 B组和c3组病毒，A组轮状病毒是最容易在人体内传播的，而婴幼儿则以轮状病毒为主，多见于1个月到2岁的婴幼儿。轮状病毒在体内的潜伏期通常是2-3天，通常症状并不严重，以排便次数增加为主，一天可达10-20次，粪便呈鸡蛋汤状水样，少数患儿可伴有呕吐、腹胀、发热等症状，少数患儿还可伴有中度脱水[7]。轮状病毒的传播途径主要是通过接触轮状病毒的手部和物品，而不干净的食物也是导致儿童感染的一个主要因素。有研究表明，轮状病毒感染儿童的粪便中含有约1000亿个病毒颗粒，而10-100个单位的病毒颗粒就能引起其它儿童的感染，所以要以预防为重点[8]。
本研究结果可见：本次检测中经RT-PCR检测法可见轮状病毒阳性74例，占比为80.43%，而经GICA可见轮状病毒阳性86例，占比为93.48%；经GICA的检测准确率高于RT-PCR检测法。分析原因是由于金标免疫层析是一种以胶体金标作为示踪物质的新型免疫分析方法，是一种新兴的、可被广泛应用的病毒抗原-抗体反应的方法[9]。
并且本研究结果中可见：调查后可见本次研究对象中1岁以下的患儿例数最多为31例、占比为36.05%，其次为1岁患儿共22例，占比为25.58%，再者为2岁患儿共19例，占比为22.09%；本次研究对象中1岁以下的患儿例数最多为31例、占比为36.05%，其次为1岁患儿共22例，占比为25.58%，再者为2岁患儿共19例，占比为22.09%。其主要原因是婴幼儿由于年龄小，自身免疫功能尚未充分发展，加之肠道负担过重，容易出现感染，然而，随着孩子的生长，其发病人数逐渐减少。轮状病毒的主要传染方式是胃肠道的感染，并且大部分时间都在寒冷的季节，炎热的夏天并不适合它的存活，在秋季和冬季，轮状病毒更加的活跃，可以通过被污染的水、食物、衣服、玩具等间接地进行传染，所以在冬天的时候，要做好孩子的防护工作，保持良好的个人卫生，并且要养成饭前、便后要勤洗手的良好习惯[10]。
尽管轮状病毒是引起小儿腹泻的重要病原，但也要关注引起小儿腹泻的其它病原，同时也要考虑到多个病原体同时感染的情况。本文结果可见92例腹泻患儿中还合并有不同比例的星状病毒、诺如病毒或腺病毒感染。美国研究人员曾一度以为诺罗病毒导致的儿童腹泻多为散发性，但后来有研究发现，诺罗病毒可能会因受污染的水源而爆发；英国的研究人员报告了星形病毒与痢疾的流行之间的联系。这说明上述两种病毒同时感染与儿童腹泻的流行情况相关联。所以，引起小儿腹泻的病原体有星状病毒、诺如病毒、腺病毒等[11]。
综上所述，引起婴幼儿腹泻的最重要病因是轮状病毒，但也要警惕其它病原也可能引起儿童腹泻，同时也要警惕多种病原菌的联合感染。
参考文献
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