摘要: 目的建立高效液相色谱串联质谱（HPLC-MS/MS）检测血浆百草枯浓度的方法。方法选用Phenomenex Kinetex 2.6μm HILIC色谱柱（100.0 mm×2.1 mm），以1%甲酸水溶液（含250 mmol/L甲酸铵）为流动相A、乙腈为流动相B，梯度洗脱，流速为0.35 mL/min，进样量为10μL，柱温为40℃；使用电喷雾电离（ESI）源，采用正离子条件下多离子反应监测扫描模式。百草枯和内标乙基百草枯的离子对分别为质/荷比（m/z）92.7→171.0和m/z 107.0→185.1。对建立的HPLC-MS/MS进行方法学评价（线性范围、定量下限、准确度、精密度、选择性和基质效应、稳定性），并检测75例百草枯急性中毒患者的血浆百草枯浓度，采用受试者工作特征（ROC）曲线评估血浆百草枯浓度对临床结局的判断价值。结果 HPLC-MS/MS检测百草枯浓度在54.28～13 190.00 ng/mL范围内具有良好线性关系（Y=0.000 1X+0.011 6，r2=0.998 3）。定量下限处的批内平均准确度为96.31%120.04%，批间准确度为104.43%；高、中、低浓度批内和批间检测值与理论值的偏差均在±15%范围内；高、中、低浓度及定量下限处的批内和批间相对标准偏差（RSD）均<15%。随机选择6份空白基质考察方法的选择性和基质效应，结果表明百草枯出峰位置无干扰，方法选择性好；高、低浓度处经内标归一化的基质因子的变异系数均<15%，基质效应符合要求。样本室温放置可稳定1 d，2～8℃放置可稳定1周，-80℃冻存可稳定1个月，反复冻融处理3次对结果无影响。75例百草枯中毒患者的血浆百草枯浓度为2 820（0～22 200）ng/mL，死亡组血浆百草枯浓度明显高于存活组（P<0.05）。ROC曲线分析显示血浆百草枯浓度判断临床结局的ROC曲线下面积为0.855，最佳临界值为2 431 ng/mL。结论建立的HPLC-MS/MS方法可用于临床血浆百草枯浓度的常规检测。