摘要: 为了更精确地对甲壳动物血细胞进行快速分类和功能分析，本研究以中华绒螯蟹为例，依据其血细胞内具有颗粒结构的特征，与常规显微观察对比，探讨了一种基于图像流式细胞仪的血细胞自动化分类新方法，并测量了体质量为(10±3) g的中华绒螯蟹的血细胞对直径1μm微球的吞噬情况。结果显示，两种方法都可将中华绒螯蟹血细胞分为4个类群。显微镜观察分类基于胞内可见颗粒，但由于缺乏精细的量化标准，批次样品的人工辨识结果波动较大；而图像流式方法以胞内全部颗粒结构为对象，利用高精度检测模块测量，结果更准确、客观，而且通量高、重复性好。测量结果显示，中华绒螯蟹血淋巴中无颗粒、小颗粒、中颗粒及大颗粒细胞占比分别为40.62%±2.65%、36.68%±6.84%、7.80%±1.16%和16.51%±5.60%，依据测量的颗粒特征区分的4个类群界限清晰，缺乏过渡样点，提示各类细胞之间可能没有相互转化。进一步的活体微球吞噬实验证实，中华绒螯蟹的4类血细胞都具有吞噬功能，并以无颗粒细胞为主要吞噬类群；吞噬微球的细胞比例在注射后6 h内呈钟型曲线变化，4 h可达峰值(5.69%±0.44%)，表明中华绒螯蟹血细胞能高效清除血淋巴中的异物。研究表明，图像流式细胞仪适合于中华绒螯蟹的血细胞分类分析和功能研究，本研究结果为同类研究提供了重要参考，将有助于更全面了解甲壳动物血细胞的功能。