摘要: 由弧菌感染引起的疾病是影响鲍存活率的主要因素，实验以皱纹盘鲍为研究对象，探讨金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinase， TIMP)在皱纹盘鲍抗弧菌免疫中的功能及其与基质金属蛋白酶1 (matrix metalloproteinase 1， MMP-1)的相互作用关系。实验通过PCR技术克隆得到了TIMP cDNA序列，全长为2 291 bp。利用NetNGlyc 1.0Server和NetOGlyc 4.0 Server软件对TIMP的氨基酸序列进行分析，结果显示，TIMP有3个潜在的N-糖基化位点，分别位于第47、77和152位的Asn，以及一个潜在的O-糖基化位点，即位于第108位的Thr。多序列比对结果显示，皱纹盘鲍TIMP氨基酸序列与杂色鲍、太平洋牡蛎、泥蚶中TIMP的序列相似性分别为76.0%、18.9%和19.3%。利用荧光定量PCR技术分析了副溶血性弧菌感染过程中皱纹盘鲍不同组织中TIMP的表达情况，发现在弧菌感染早期，TIMP在血淋巴细胞和鳃组织中的表达量均显著上调。利用RNA干扰技术分别敲低皱纹盘鲍TIMP和MMP-1的表达水平，研究TIMP与MMP-1在皱纹盘鲍抗弧菌免疫中的相互作用关系。结果显示，鲍体内MMP-1表达沉默后，TIMP表达量显著上调；而TIMP表达受到抑制时，MMP-1表达量显著下降，说明TIMP表达受MMP-1负调控，而MMP-1表达受TIMP正调控。本研究将有助于揭示TIMP及其与MMP-1相互作用在皱纹盘鲍先天免疫反应中的功能，也可为鲍养殖的病菌防治策略提供新的思路。