无乳链球菌即B族链球菌（group B Streptococcus， GBS）感染的发病群体以新生儿居多，该病症是一种细菌感染性疾病，并且具有较高的严重性。一般情况下，GBS菌群多在人体的胃肠道定植，并且还可以分布于人体的生殖道组织。通常，发现GBS感染的新生儿群体一般在母体中感染菌群，感染该菌群的途径较多，例如：母体的羊膜腔组织发生感染现象或者母体的胎膜法相破而引起感染症状，此外，在产妇进行分娩期间，胎儿也可以通过阴道感染［1、2］。本研究对26例GBS血流感染患儿回顾性分析。
1 资料与方法
1.1 研究对象
回顾性分析2021年1月至2023年12月就诊于本院的住院和门急诊患者。1.1.1 纳入标准
①所纳入的患儿年龄段均为0～28d;②为新生儿提供血液分离培养后发现，患儿存在GBS血流感染阳性的情况；③参照《实用新生儿学》（第4版）中对新生儿肺炎等疾病的诊断标准，并与其相符。剔除重复菌株。
1.1.2 临床感染分型
按照疾病的出现时间，可将其划分为两类：一类是在出生后的第一周（0 ~ 6天）就开始出现的（early-onset GBS disease,GBS-EOD），另一类是在出生后的第七天至第28天才开始出现的（late-onset GBS disease,GBS-LOD）[5]。
1.2 方法
（1）一般资料收集：在执行这项任务的过程中，主要是通过医院信息管理系统来完成相关的任务，需要收集的信息包括：基本信息、临床症状、病童的体征状况，还需要收集病童的实验室数据和影像学检查结果。
（2） 仪器和材料：BACT/ALERT3D型全自动微生物培养器和相应的培养瓶（BioMerieux，法国），VITEK-2 COMPACT型全自动微生物识别和药敏分析系统以及P639药敏卡（BioMerieux，法国），VITEK-MS质谱仪（BioMerieux，法国）。从广州市迪景公司购买了5%的哥伦比亚羊血琼脂平板和血MH平板，而药敏纸片则是从Oxiod公司购买的。
（3）细菌的分离培养、鉴定和药物敏感试验： 在将病童的静脉血、脑脊液以及其他无菌血样注入到儿童的中和抗生素培养皿之后，将其放入血液培养器内进行培育。一旦培养皿呈现阳性反应，立即将其移植到5%的羊血琼脂平台上，在35℃的环境下，以5 %的5% CO2进行18~24h小时的培育。然后，对这些样品进行细菌的形状学分析、细菌的涂层显微镜检查、触酶实验，以及CAMP实验的初步筛选，并利用VITEK-MS质谱仪来确认其是否为真菌。最后，利用VITEK-2 COMPACT的全自动细菌识别系统来执行药敏测试。2021版 CLSI M100S31被美国临床和实验室标准协会用于评估药品的敏感度。其中，金黄色葡萄球菌（ATCC29213）和粪场球菌（ATCC29212）被纳入了质量控制的范围。《全国临床检验操作规程》（第4版）是执行所有操作的唯一准则。
（4）诱导型克林霉素耐药试验（D-抑菌圈试验）：使用了纸片扩散法来研究GBS分离的大环内酯类抗药性表现。根据2021年CLSI M100-S31的规定，对红霉素抗性以及克林霉素过敏或者作为中介的GBS菌株执行了D-抑菌环境实验。实验使用MHA+5%绵羊血或TSA+5%绵羊血，并将菌液的浓度设定为0.5麦氏单位。然后，将其均匀地涂在一个平板上，并在其上放置了含有15μg红霉素和2μg克林霉素的纸片，两张纸片的间隔为12mm。在35±2℃的环境下，用5%CO2的5%CO2进行20-24小时的孵化，以便获取最后的结果。根据CLSI M100-S31的评估规范，如果一个微生物对红霉素和克林霉素都产生抗药性，它就是一种固定的表型（cMLSB）。然而，如果一个微生物对红霉素产生抗药性，并且在接近红霉素纸片的地方，克林霉素的抑菌环会缩小甚至消失，并且D-抑菌环实验呈现阳性，它就是一种可以被引发的表型（inducible MLSB）。iMLSB）；如果在接近红霉素的地方，克林霉素的抗性仍然存在，且其抑制效果并未下降，这就是由于克林霉素的自我排泄导致的抗性，也就是M型。反之，如果克林霉素的抗性增强，红霉素的抗性可能会增强，这可能会导致L型的表现。
1.3 统计学处
采用SPSS19.0软件进行统计分析。两组间的比较采用Fisher确切概率检验，以P ＜0.05为差异具有 统计学意义。药物敏感试验数据使用世界卫生组织 （WHO）推荐的WHONET 5.6软件进行分析。
2 结果
2.1 一般资料
2021年1月～2023年12月本院新生儿重症监护室、急诊科门特及新生儿科病房已确诊为无乳链球菌败血症的患儿26例，12例为早发型，14例为晚发型。26例患儿中早产儿8例，余18例均为足月儿；男16例，女10例。
2.2 临床特征
脑膜炎中16.6%和50.0%分别为早发型、晚发型，有可能会有神经系统的后遗症。这些病例的主要表现为视力下降、脑部出血，同时也可能会有听力信号的阻断，此外，也可能会有脑积水的病史。对于病情危重的患儿而言，其多以脑梗塞、脑软化症等症状为表现。对于存活的患儿而言，患儿存在较高的复发率，所以患儿通常需要反复接受入院治疗。对于晚发型GBS感染患儿而言，患儿多以发热、脑膜炎等症状为表现。早发型与晚发型临床特征比较见表1。
表1 早发型与晚发型临床症状比较
2.3 辅助检查结果
2.3.1 实验室检查
26例无乳链球菌感染的辅助检查结果见表2。
表2 26例无乳链球菌感染的实验室检查结果
2.3.2 影像学检查
7例（26.9%）MRI提示合并化脓性脑膜炎，2例（7.7%）颅脑彩超提示合并化脓性脑膜炎；2例（7.7%）MRI提示脑膜下出血，1例（3.8%）颅脑彩超提示脑膜下出血，1例（3.8%）MRI和颅脑彩超均提示脑膜下出血；1例（3.8%）MRI提示新生儿缺血缺氧；2例（7.7%）颅脑彩超提示脑室增宽；1例（3.8%）颅脑彩超脑实质弥漫性改变；2例（7.7%）MRI提示未见明显异常，3例（11.5%）颅脑彩超提示未见明显异常； 4例（15.4%）死亡未做。
2.4 药物敏感试验结果及红霉素和克林霉素的耐药表型
使用MIC法来研究26个GBS菌株对青霉素药物、氨苄西林药物、替加环素药物、万古霉素药物、利奈唑胺药物、左氧沙星药物以及氧氟沙星药物的抗药性。在这些菌株中，青霉素药物、氨苄西林药物、替加环素药物、万古霉素药物以及利奈唑胺药物的抗药性是100%的。而左氧沙星药物与氧氟沙星药物的抗药性相比，则是3.8%（1/26），占比3.8%（1/26）。
采用纸片扩散法检测其中15株GBS红霉素和克林霉素的耐药性及耐药表型，其中17株红霉素和克林霉素均耐药，耐药率为66.7%（10/15），为固有表型（constitutive macrolide-lincosamide Streptogramin B，cMLSB）；5株红霉素和克林霉素均敏感，敏感率为33.3%（5/15）；并未观察到克林霉素对红霉素的耐药性，也没有检测到D-抑菌圈实验呈阳性的iMLSB菌株。同时，也没有观察到病童虽然对红霉素产生耐药，但却对克林霉素药品具备一定的敏感度。且经相关试验发现阴性菌株（M型），试验名称为D-抑菌圈试验；除此以外，也没有发现患儿对克林霉素存在耐药性，但是对红霉素药物相对敏感或者中介为L型表型。红霉素和克林霉素耐药表型详细结果见表3。
表3 红霉素和克林霉素耐药表型
3 讨论
目前全球尚无完善的防治策略能够完全消除GBS感染，特别是晚发型，具体原因尚不明确[5-7]
本研究26株GBS对多种类型的药物均敏感，其中包括：青霉素类、头孢菌素类、万古霉素和利奈唑胺等。根据国外相关研究报道显示发现[8-10]，GBS分离株对青霉素类药物产生的中介率较高。
此次研究中，发现红霉素耐药率、克林霉素耐药率等都比较高，其中5株红霉素和克林霉素都较为敏感，占比为33.3%（5/15）；同时，并无在检验中发现存在阳性菌株（iMLSB），而对于试验名是红霉素的耐药克林霉素敏感D-抑菌圈检验；并无患儿对于红霉素耐药，可对于克林霉素药物有显著的敏感度，且经相关试验发现阴性菌株（M型），试验名称为D-抑菌圈试验；除此以外，也没有发现患儿对克林霉素存在耐药性，但是对红霉素药物相对敏感或者中介为L型表型。与李娟的多中心研究数据有所不同，李娟的多中心研究数据对红霉素和克林霉素分别为60.2%和78.5%；耐药表型以固有表型（cMLSB）为主，占53.9%，其次为L表型（26.3%）、诱导表型（iMLSB）（15.8%）和M表型（3.9%）。其原因可能与各地用药习惯不同有关。
本研究对莫西沙星药物和左氧氟沙星药物产生得到耐药性概率一致，均在3.8%，对于新生儿来说，为其提供氟喹诺酮类药物极易引起不良反应，例如；关节软骨损伤等，所以在孕妇、新生儿等群体中的应用频次较低。除此以外，对患儿提供万古霉素药物极易对患儿的肾脏部位、耳部等部位造成毒性反应。考虑到头孢菌素类药物对血脑屏障的穿透性更强，所以更推荐对患儿提供头孢曲松进行治疗[5]。
综上，新生儿GBS血流感染死亡率、致残率高；定期统计本院GBS血流感染病症药敏检验结果与临床特征表现，对于临床医生治疗方案的制定与感染方案的制定具有较高的指导意义，对于控制、预防耐药株的传播与产生非常关键。
参考文献
[1]刘玲,王晓芳,郭利敏,等.我院2010-2017年新生儿无乳链球菌医院感染的流行病学调查分析[J].中国抗生素杂志,2019,44(4):483-487.
[2]陆月合,王立芳.新生儿无乳链球菌医院感染的临床分子流行病学特点及药物敏感性分析[J/CD].中华妇幼临床医学杂志(电子版),2020,16(4):472-477.
[3]钱春燕,黄华飞.新生儿无乳链球菌败血症患儿的临床特征和药敏分析结果[J].中华围产医学杂志,2021.
[4] Blaschke AJ, Pulver LS, Korgenski EK, et al. Clindamycin-resistant
group B streptococcus and failure of intrapartum prophylaxis to prevent early-onset disease[J]. J Pediatr,2010,156(3):501-503.
[5]中华医学会围产医学分会,中华医学会妇产科学分会产科学组.预防围产期B族链球菌病(中国)专家共识[J].中华围产医学杂志,2021,24(8):561-566.
[6] Imperi M, Gherardi G, Berardi A, et al. Invasive neonatal GBS
infections from an area-based surveillance study in Italy[J]. Clin
Microbiol Infect,2011,17(12):1834-1839.
[7] Verani JR, McGee L, Schrag SJ. Prevention of perinatal group B streptococcal disease-revised guidelines from CDC[J]. MMWRRecomm Rep,2010,59(10):1-36.