摘要: B型清道夫受体是清道夫受体超家族成员，可识别多种配体，在机体脂类转运及免疫防御过程中发挥重要作用。为深入研究三疣梭子蟹B型清道夫受体(Pt-SRB)的功能，本实验在前期工作基础上构建了Pt-SRB胞外结构域原核表达载体，并成功获得了重组蛋白rPt-SRB。利用亲和层析方法获得纯化的rPt-SRB，并将纯化rPt-SRB蛋白免疫大鼠获得抗rPt-SRB重组蛋白免疫抗血清以用于后续研究。SDS-PAGE检测发现，体外诱导表达重组rPt-SRB以包涵体的形式出现在大肠杆菌BL21裂解液的沉淀中，分子量大小约为49.18 ku。Western-Blot分析表明，大鼠抗rPt-SRB血清能与rPt-SRB特异性结合。本实验还利用免疫荧光技术，对Pt-SRB在三疣梭子蟹血淋巴细胞的定位及不同组织中的分布进行研究。结果显示，Pt-SRB在三疣梭子蟹消化道、肝胰腺、鳃、心脏、肌肉组织中均有分布，但不同组织中Pt-SRB的分布不同。免疫荧光结果显示，绿色荧光信号在消化道及腺体结缔组织中较强，另外在肝小管上皮、鳃丝上皮细胞中亦有较强的阳性信号，表明PtSRB蛋白在上述组织结构中分布较广；在血淋巴细胞中，绿色荧光信号主要分布于细胞质和细胞膜，在细胞核中没有明显荧光信号，提示Pt-SRB在三疣梭子蟹血淋巴细胞的细胞质和细胞膜上表达。本结果将为三疣梭子蟹B型清道夫受体蛋白的生理及免疫学功能的研究奠定基础。