目的建立流式细胞术(FCM)检测人类白细胞抗原(HLA)-B27的阴阳性判读标准，同时探讨灰区样本的特性及应对措施。方法采用FCM检测132例腰背关节痛患者外周血HLA-B27的表达，以流式反向序列特异性寡核苷酸探针(Flow-rSSO)法检测患者HLA-B位点的分型。结果 FCM和Flow-rSSO法检测HLA-B27的阳性率分别为18.18%和73.48%。根据FCMHLA-B27试剂盒推荐的判读规则，灰区样本45例，经Flow-rSSO法验证后，HLA-B27全部为阳性。通过对不同d值(荧光强度的均值与校准磁珠中位值的差值)范围样本的基因型分析设定判读规则，即d>2均判读为阳性，d≤-7为阴性，-7