目的构建人腺病毒(HAdV)-B55的实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)扩增方法，并验证其检测性能。方法采用Beacon Designer 7软件设计针对HAdV-B55 Hexon基因序列的特异性引物，建立HAdV-B55的实时荧光定量PCR扩增方法，并评估其敏感性及特异性。结果建立了检测HAdV-B55的实时荧光定量PCR扩增方法，反应敏感性为0.08 PFU/反应体系，且特异性良好，与相关HAdV B组病毒均未检测到交叉反应。结论成功建立了针对我国HAdV-B55的特异性实时荧光定量PCR检测方法，为HAdV-B55的快速检测及防控提供了有力的支持。