文章-世纪中文出版社

李广龙1,2 李靖年3 李文斌1,2 严玲1,2 张鹏1,2 王晓航1,2 《材料科学研究》 2020年6期

摘要:

采用拉伸、冲击、硬度、OM和TEM等方法研究纵向变厚度EH40钢板的组织和性能。结果表明,由于EH40钢板的薄端和厚端的制备工艺过程不同,其纵向的组织和性能呈现多样化；随着钢板厚度的增加屈服强度由534 MPa降低至489 MPa,抗拉强度由599 MPa降低至569 MPa。在-60℃进行冲击实验时,钢板薄端的冲击吸收能量大于200 J,而厚端的冲击吸收能量出现波动。钢板厚端的晶粒尺寸比薄端的粗大,贝氏体的含量低。在30 mm和40 mm位置全厚度都有贝氏体组织,厚度为8 mm时50 mm位置的贝氏体组织全部消失。薄端和厚端的析出相均为(Nb,Ti)C,但是薄端析出相的数量多、尺寸小,厚端析出相的数量少、尺寸大。

罗非鱼湖病毒核蛋白的克隆表达、抗体制备及其组织分布下载：73 浏览：500

苏国茂秦真东李嘉波周萌莫金凤张凯梁日深吴灶和赵丽娟林蠡《水产研究进展》 2020年3期

摘要:

近年来罗非鱼湖病毒(TiLV)在多个国家流行，对世界罗非鱼养殖业造成严重威胁。中国是罗非鱼第一养殖大国，尽管我国大陆还没有TiLV的正式报道，鉴于吉富罗非鱼是我国重要的罗非鱼养殖品种，其对TiLV的感染特性研究具有重要意义。本实验采用TiLV对吉富罗非鱼进行人工感染，随后在肝脏组织中克隆和测定了TiLV第6片段基因。罗非鱼湖病毒第6片段基因cDNA全长1 044 bp，开放读码框(ORF)为954 bp，编码317个氨基酸，预测分子量为36.38 ku；5′非编码区(NCR)为19 bp，3′非编码区(NCR)为972 bp。系统进化树分析表明该蛋白属于TiLV核蛋白(NP)。随后在大肠杆菌中表达和提纯了GST融合NP蛋白，在新西兰大白兔上制备了多克隆抗体。通过酶联免疫吸附实验(ELISA)检测抗体效价为1∶51 200，且抗体可特异性识别感染组织中的病毒NP蛋白。对吉富罗非鱼不同组织进行苏木精—伊红(H.E)染色观察，发现肝脏组织坏死并形成合胞体，脾脏部分细胞出现空泡、坏死，含铁血黄素增多，头肾细胞坏死，鳃丝上皮细胞明显解离脱落，鳃小片黏连，脑组织细胞肿大。通过蛋白印迹法(WB)和免疫组化(IHC)对人工感染TiLV的吉富罗非鱼不同组织进行检测，结果显示，NP蛋白在肝脏、脑、体肾和头肾等组织中均有表达，以肝脏组织中表达量最高。为了解吉富罗非鱼对TiLV的免疫反应，通过实时荧光定量PCR (qRT-PCR)测定免疫因子TNF-α和TGF-β在主要免疫器官脾脏和头肾组织中的表达。研究表明，在感染早期(感染后12～24 h)，病毒可显著抑制TNF-α和TGF-β在脾脏和头肾中的表达，可能通过抑制宿主这些免疫因子来促进病毒自身早期的复制。本研究将为进一步解读TiLV的致病机理及其高效防控提供理论基础。

拟穴青蟹Cactus基因的cDNA克隆、序列及生物学功能下载：76 浏览：492

胡蕾1，2 邓恒为2 李晶晶2 刘姗姗2 何建国2 李海云1 翁少萍2 《水产研究进展》 2020年3期

摘要:

为获取拟穴青蟹Cactus基因cDNA全长、分析基本生物学信息，并初步探索其在病原物刺激下的免疫反应，实验采用RACE技术获得了拟穴青蟹Cactus(SpCactus)基因的cDNA全长序列，其cDNA全长为2 035 bp，开放阅读框(ORF)1 311 bp，编码436个氨基酸，分子量为46.01 ku。对蛋白理化性质进行预测发现，SpCactus为亲水性蛋白，等电点pI为4.91。经预测，SpCactus与其他物种的IκB蛋白具有相似的功能结构域。同源性比对结果显示，SpCactus与凡纳滨对虾和中国明对虾的Cactus蛋白同源性均高达62%，相似度为73%。系统进化树分析显示，SpCactus与甲壳动物聚为一支，与无脊椎动物聚为一大支。实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测发现，SpCactus基因在拟穴青蟹不同组织中均有表达，肌肉中的表达量最高，其次为心脏、眼柄、血液和鳃，肝胰腺中的表达量最低。LPS和金黄色葡萄球菌刺激均能显著诱导SpCactus基因的表达。本实验成功扩增了SpCactus基因全长，并进行了生物信息学分析、理化性质预测，初步探讨了其生物学功能，为进一步研究其在免疫反应中的生物学功能提供参考依据。

黄条鰤PTEN基因克隆、组织分布及早期发育阶段的表达分析下载：77 浏览：510

孙冉冉1 史宝2 柳学周1,2 常亚青1 张言祥3 高全义3 徐永江2 王滨2 姜燕2 张正荣2 《中国水产学报》 2019年2期

摘要:

为探究PTEN在黄条鰤Seriola aureovittata生长发育过程中的分子作用机制,采用同源克隆和cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆了黄条鰤生长调控因子PTEN的cDNA全长序列,并采用实时荧光定量PCR(qPCR)技术分析了PTEN mRNA的时空表达特征。结果表明:黄条鰤PTEN cDNA序列全长为1575bp,开放阅读框为1287bp,编码428个氨基酸,PTEN编码的蛋白具有脊椎动物PTEN的共同特征,含有PTP(PTPc基序)和PTEN-C2结构域;序列比对分析发现,黄条鰤与高体鰤Seriola dumerili同源性较高,一致性达到了95%;通过系统进化树分析表明,黄条鰤与鲈形目及鲽形目鱼类聚为一支;经qPCR分析发现,黄条鰤PTEN mRNA在心脏中的相对表达量最高(P<0.05),其次在脾脏、头肾、肾脏、胃、肠、鳃中表达量较高,PTEN mRNA在多种组织中的广泛表达,暗示着其可能参与多种生理过程的调控;同时分析了PTEN mRNA在黄条鰤早期发育阶段(胚胎期、仔稚幼鱼期)中的时序表达特征,发现PTEN在早期胚胎发育中持续表达,从低囊胚时期(38hpf)表达量显著升高(P<0.05),初孵仔鱼时期相对表达量最高(P<0.05);在仔稚幼鱼时期,PTEN mRNA相对表达水平逐渐降低,35日龄表达量显著下降(P<0.05)并保持较低表达水平。研究表明,PTEN在胚胎及仔稚幼鱼发育过程中具有重要调节作用,本研究结果可为黄条鰤早期生长发育过程的调控机制研究及苗种培育提供数据资料。

西伯利亚鲟MHCⅡβ基因克隆、组织分布及细菌感染后的表达变化下载：83 浏览：512

田照辉徐绍刚胡红霞王巍董颖东天孙爱《中国水产学报》 2019年2期

摘要:

为研究鲟鱼主要组织相容性复合体（Major histocompatibility complex,MHC）基因的分子特征和表达,利用RACE技术克隆获得了西伯利亚鲟Acipernser baerii MHCⅡβ cDNA序列1443bp,包括开放阅读框（OFR）801bp,编码184个氨基酸。Blast分析显示,由MHCⅡβcDNA基因推导的氨基酸序列同其他物种的一致性为46%～83%,通过Smart站点分析,该序列具有SMART MHCⅡbeta结构域、SMART IGc1结构域和跨膜螺旋结构域;实时定量分析表明,正常情况下MHCⅡβ mRNA在西伯利亚鲟10种组织中均有表达,其中脾、头肾和血液中表达量较高,皮肤和肉中表达量极低（P<0.05）;感染维氏气单胞菌Aeromonas veronii 40h后,脾脏中MHCⅡβ mRNA的表达量显著低于未感染的对照组（P<0.05）,直至93 h时恢复至对照组水平且有显著性变化（P<0.05）。研究表明,MHCⅡβ基因参与了西伯利亚鲟的免疫反应。

三疣梭子蟹B型清道夫受体蛋白的原核表达及细胞、组织分布下载：89 浏览：519

杨宁2 周素明1 王国良1 刘顺1 李猛1 《水产研究进展》 2018年2期

摘要:

B型清道夫受体是清道夫受体超家族成员，可识别多种配体，在机体脂类转运及免疫防御过程中发挥重要作用。为深入研究三疣梭子蟹B型清道夫受体(Pt-SRB)的功能，本实验在前期工作基础上构建了Pt-SRB胞外结构域原核表达载体，并成功获得了重组蛋白rPt-SRB。利用亲和层析方法获得纯化的rPt-SRB，并将纯化rPt-SRB蛋白免疫大鼠获得抗rPt-SRB重组蛋白免疫抗血清以用于后续研究。SDS-PAGE检测发现，体外诱导表达重组rPt-SRB以包涵体的形式出现在大肠杆菌BL21裂解液的沉淀中，分子量大小约为49.18 ku。Western-Blot分析表明，大鼠抗rPt-SRB血清能与rPt-SRB特异性结合。本实验还利用免疫荧光技术，对Pt-SRB在三疣梭子蟹血淋巴细胞的定位及不同组织中的分布进行研究。结果显示，Pt-SRB在三疣梭子蟹消化道、肝胰腺、鳃、心脏、肌肉组织中均有分布，但不同组织中Pt-SRB的分布不同。免疫荧光结果显示，绿色荧光信号在消化道及腺体结缔组织中较强，另外在肝小管上皮、鳃丝上皮细胞中亦有较强的阳性信号，表明PtSRB蛋白在上述组织结构中分布较广；在血淋巴细胞中，绿色荧光信号主要分布于细胞质和细胞膜，在细胞核中没有明显荧光信号，提示Pt-SRB在三疣梭子蟹血淋巴细胞的细胞质和细胞膜上表达。本结果将为三疣梭子蟹B型清道夫受体蛋白的生理及免疫学功能的研究奠定基础。

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