鳜下丘脑神经元细胞培养 下载：79 浏览：480

旷玉兰1，2 梁旭方1，2 蔡文静1，2 何珊1，2 徐晶1，2 高俊杰1，2 魏君冉1，2 《水产研究进展》 2021年5期

摘要: 为了建立可行、高效的下丘脑神经元细胞技术，本研究通过分离鳜下丘脑组织，用Ⅰ型胶原酶将组织消化成单细胞悬液，并用完全培养液进行培养，在培养的第3、4、5和6天观察细胞的形态。结果显示，培养第3天时细胞贴壁量少，胞体小并且呈单个分布；在培养第4天，细胞的数量显著增多，且具有典型的神经元的形态，胞体饱满；第5天神经元胞体的融合度进一步增大，突起增长增粗，许多分支互相交错连接而形成密集的神经纤维网络；第6天细胞活性减弱，开始凋亡。使用CCK-8法检测细胞活性，结果显示，在培养第5天，细胞活性最高；采用荧光定量PCR(RT-PCR)法和免疫荧光鉴定法对神经元细胞进行鉴定，经RT-PCR检测发现，培养的下丘脑细胞可以表达神经元特异基因noggin，经免疫荧光鉴定，下丘脑神经元细胞纯度为95.9%。研究表明，通过此培养方法能够获得纯度较高的鳜下丘脑神经元细胞，为进一步在细胞水平研究鳜的摄食与能量代谢相关机理奠定基础。

鳜脑神经元的原代培养与鉴定 下载：78 浏览：471

石林杰1，2 梁旭方1，2 何珊1，2 彭建1，2 《水产研究进展》 2020年2期

摘要: 目前鱼类神经细胞模型极少，物种间的差异性使鳜在细胞水平上的研究具有极大的局限性，为建立一种简单易行的鳜脑神经元细胞模型进一步研究鳜神经系统，本实验取3月龄鳜，联合胶原酶消化法和机械吹打法分离出鳜脑细胞，用含20%FBS的L15培养液制成细胞悬液接种在细胞培养瓶内，于28°C无CO2培养箱中培养，3 d后更换培养基，待细胞贴壁长满瓶底后进行传代培养；采用Neu-N和β-tubulin免疫荧光细胞化学技术鉴定鳜脑细胞神经元纯度。结果显示，鳜脑细胞分离培养2 d后贴壁状态较好，随着时间延长，贴壁细胞增多，细胞突起相互连接，培养5 d后神经元胞体丰满，细胞数量明显增多，突起相互间形成了明显的神经网络。经Neu-N和β-tubulin免疫荧光细胞化学技术鉴定鳜脑神经元细胞纯度可达95%以上。研究表明，该鳜脑细胞的分离培养方法简单易行，且可获得高纯度的鳜脑神经元细胞。