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半滑舌鳎源哈维氏弧菌分泌蛋白HutZ的功能鉴定及免疫原性 下载：79 浏览：481

尚玉曼1 王恒1 刘静茹1 袁增智1，2 孙金生1，2 《水产研究进展》 2022年1期

摘要:
哈维氏弧菌为我国海水鱼类养殖过程中的常见病原，为了进一步探究哈维氏弧菌的致病机制，本实验分别从前期筛选到的哈维氏弧菌强毒株H2LB1和弱毒株H1SAI3中提取胞外产物(ECPs)，并通过蛋白质组学进行差异蛋白鉴定。从中选取了哈维氏弧菌强毒株特异性蛋白HutZ为研究对象，对其功能和免疫原性开展深入研究。首先利用qRT-PCR检测了哈维氏弧菌在不同铁源培养基培养条件下的HutZ基因表达量差异，进一步将克隆HutZ基因连接到原核表达载体上，并在大肠杆菌中成功表达出重组HutZ蛋白。将纯化的HutZ蛋白与血红素共孵育，检测发现该蛋白能够结合血红素并改变其光吸收峰。将HutZ蛋白乳化后免疫半滑舌鳎2次，以间接血凝法检测免疫后1—7周的血清效价，同时在免疫4周后进行攻毒检测其免疫保护率。研究表明，HutZ蛋白免疫后的半滑舌鳎抗体效价最高可达1∶128，攻毒免疫保护率达73.3%，说明HutZ蛋白可作为开发预防半滑舌鳎感染哈维氏弧菌的亚单位疫苗的有效候选抗原。

凡纳滨对虾JAK和STAT基因在苏云金芽孢杆菌侵染过程中的表达变化分析 下载：82 浏览：491

李丹蕾1 郝少彦1 张亦陈1 耿绪云2 刘逸尘1 孙金生1 《水产研究进展》 2020年6期

摘要:
为了分析凡纳滨对虾JAK (Lv-JAK)和STAT (Lv-STAT)基因应答病原菌侵染的表达变化特征，本实验利用半定量PCR技术分析了Lv-JAK和Lv-STAT基因的组织表达特征，并利用实时荧光定量PCR技术分析了其在苏云金芽孢杆菌侵染过程中的表达变化特征。结果显示，Lv-JAK和Lv-STAT基因在凡纳滨对虾的9种组织中有不同程度的表达，均在鳃、肠道和心脏中表达量较高。苏云金芽孢杆菌感染后，在鳃组织中，Lv-JAK和Lv-STAT基因的相对表达量在感染的中晚期(24～72 h)显著上调表达；在肠道组织中，Lv-JAK基因的相对表达量在感染后的6和24 h显著上调，Lv-STAT基因的相对表达量在感染后的24和72 h显著上调。综上表明，JAK和STAT基因在一定程度上参与了凡纳滨对虾体内由苏云金芽孢杆菌引发的天然免疫应答过程，探讨凡纳滨对虾JAK和STAT基因应答苏云金芽孢杆菌感染的表达变化特征，有助于研究对虾JAK/STAT通路在应答病原菌侵染过程中的功能和作用机制。

图像流式细胞仪在中华绒螯蟹血细胞分群及吞噬功能研究中的应用 下载：92 浏览：457

胡锦丽1 任星潮1 刘逸尘1 孙金生1 耿绪云2 张亦陈1 《水产研究进展》 2019年6期

摘要:
为了更精确地对甲壳动物血细胞进行快速分类和功能分析，本研究以中华绒螯蟹为例，依据其血细胞内具有颗粒结构的特征，与常规显微观察对比，探讨了一种基于图像流式细胞仪的血细胞自动化分类新方法，并测量了体质量为(10±3) g的中华绒螯蟹的血细胞对直径1μm微球的吞噬情况。结果显示，两种方法都可将中华绒螯蟹血细胞分为4个类群。显微镜观察分类基于胞内可见颗粒，但由于缺乏精细的量化标准，批次样品的人工辨识结果波动较大；而图像流式方法以胞内全部颗粒结构为对象，利用高精度检测模块测量，结果更准确、客观，而且通量高、重复性好。测量结果显示，中华绒螯蟹血淋巴中无颗粒、小颗粒、中颗粒及大颗粒细胞占比分别为40.62%±2.65%、36.68%±6.84%、7.80%±1.16%和16.51%±5.60%，依据测量的颗粒特征区分的4个类群界限清晰，缺乏过渡样点，提示各类细胞之间可能没有相互转化。进一步的活体微球吞噬实验证实，中华绒螯蟹的4类血细胞都具有吞噬功能，并以无颗粒细胞为主要吞噬类群；吞噬微球的细胞比例在注射后6 h内呈钟型曲线变化，4 h可达峰值(5.69%±0.44%)，表明中华绒螯蟹血细胞能高效清除血淋巴中的异物。研究表明，图像流式细胞仪适合于中华绒螯蟹的血细胞分类分析和功能研究，本研究结果为同类研究提供了重要参考，将有助于更全面了解甲壳动物血细胞的功能。
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