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解淀粉芽孢杆菌TF28活菌定量PMA-qPCR技术 下载：67 浏览：478

张淑梅1,2 姜威1,2 胡基华1 孟利强1,2 李晶1,2 夏海华1,2 《生物技术研究》 2020年11期

摘要:
建立解淀粉芽孢杆菌TF28特异性活菌分子定量技术。[方法]基于TF28特有基因设计q PCR引物,建立菌株特异性q PCR技术;优化PMA处理条件,建立PMA-q PCR定量TF28活菌技术,对其特异性、灵敏性与可靠性进行检测。[结果]建立的q PCR技术对菌株TF28具有特异性。优化的PMA处理条件为:PMA终浓度150μmol/L、暗培养10 min、光照20 min,在此条件下,可封闭106cfu/m L以下死菌基因组DNA;建立的PMA-q PCR技术特异性强,灵敏度高,最低检测限102cfu/m L;线性关系好,R2=0.997;在菌浓度103cfu/m L～107cfu/m L范围内重复性好,CT值变异系数小于2%,与平板活菌计数比较,差异不显著。[结论]建立的PMA-q PCR技术对TF28具有特异性,能够对菌浓度103cfu/m L～107cfu/m L活菌进行定量。
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