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F1代苏香杂交猪GAS7、JHDM1A基因组织表达水平研究 下载：84 浏览：512

阮涌1,2,3 嵇辛勤1,2,3 苟维胜4 卢贤君1,2,3 赵佳福1,2,3 段志强1,2,3 倪萌萌1,2,3 《生物技术研究》 2018年4期

摘要:
研究GAS7、JHDM1A基因在组织中的表达分布情况。[方法]试验采用荧光定量PCR技术,测定了苏香杂交猪的心、肝、脾、胃、肾、脑、小肠和背最长肌在各组织的分布表达情况。[结果]GAS7基因在脑表达含量最高(5.23±2.14),在心脏中表达量最低(0.07±0.03),且与脑中的表达量呈极显著差异(P<0.01),JHDM1A基因在脑部表达含量最高(32.79±12.76),在心脏(0.18±0.08)和肝脏(0.18±0.09)中表达量最低,且与脑中的表达量呈极显著差异(P<0.01)。[结论]GAS7基因主要在脑、肝脏组织表达并发挥其生理作用,而JHDM1A基因主要在脑组织表达并发挥其生理作用,此研究结果为进一步分析GAS7基因、JHDM1A基因在肉质或生长性能方面具体的分子作用机理奠定基础。

脊尾白虾隐花色素基因cry1的克隆及其功能分析 下载：88 浏览：486

朱佶轩1 戴琴1 高威1 段健诚1 宋崇阳1 张攀1 阎斌伦1，2，3 高焕1，2，3 《水产研究进展》 2021年5期

摘要:
为探究隐花色素基因(cry1)在甲壳类中的节律调节功能，实验根据脊尾白虾转录组序列，利用RACE技术获得了脊尾白虾cry1的cDNA序列全长并对其进行功能分析。脊尾白虾cry1全长2190bp，开放阅读框1845bp，5′端非编码区为241bp，3′端非编码区为104bp，共翻译出614个氨基酸，预测蛋白质的分子质量为70.5ku，理论等电点为5.09。同源性分析显示，脊尾白虾cry1与凡纳滨对虾的同源性最高，为71.6%。荧光定量分析结果显示，脊尾白虾cry1在眼柄、鳃、心脏、胃、肝胰腺、性腺、肌肉、肠道和腹索神经中均有表达，其中眼柄的表达量最高，性腺和心脏次之；不同时段的表达结果发现，其表达量在日节律(24 h)中表现出先下降再上升的趋势。不同光色条件下RNA干扰(RNA interference， RNAi)结果显示，注射小干扰RNA(siRNA)后3～6 h蓝光光照下脊尾白虾cry1的表达量显著高于白光光照，9～24 h蓝色和白色光照下的表达量无显著差异，而RNA干扰组的表达量显著低于对照组，此结果表明cry1可能主要响应蓝光周期节律。目前对甲壳类生物钟的研究较少，该研究为深入探究甲壳类生物钟基因的调控机制提供帮助。

罗非鱼湖病毒核蛋白的克隆表达、抗体制备及其组织分布 下载：73 浏览：500

苏国茂 秦真东 李嘉波 周萌 莫金凤 张凯 梁日深 吴灶和 赵丽娟 林蠡 《水产研究进展》 2020年3期

摘要:
近年来罗非鱼湖病毒(TiLV)在多个国家流行，对世界罗非鱼养殖业造成严重威胁。中国是罗非鱼第一养殖大国，尽管我国大陆还没有TiLV的正式报道，鉴于吉富罗非鱼是我国重要的罗非鱼养殖品种，其对TiLV的感染特性研究具有重要意义。本实验采用TiLV对吉富罗非鱼进行人工感染，随后在肝脏组织中克隆和测定了TiLV第6片段基因。罗非鱼湖病毒第6片段基因cDNA全长1 044 bp，开放读码框(ORF)为954 bp，编码317个氨基酸，预测分子量为36.38 ku；5′非编码区(NCR)为19 bp，3′非编码区(NCR)为972 bp。系统进化树分析表明该蛋白属于TiLV核蛋白(NP)。随后在大肠杆菌中表达和提纯了GST融合NP蛋白，在新西兰大白兔上制备了多克隆抗体。通过酶联免疫吸附实验(ELISA)检测抗体效价为1∶51 200，且抗体可特异性识别感染组织中的病毒NP蛋白。对吉富罗非鱼不同组织进行苏木精—伊红(H.E)染色观察，发现肝脏组织坏死并形成合胞体，脾脏部分细胞出现空泡、坏死，含铁血黄素增多，头肾细胞坏死，鳃丝上皮细胞明显解离脱落，鳃小片黏连，脑组织细胞肿大。通过蛋白印迹法(WB)和免疫组化(IHC)对人工感染TiLV的吉富罗非鱼不同组织进行检测，结果显示，NP蛋白在肝脏、脑、体肾和头肾等组织中均有表达，以肝脏组织中表达量最高。为了解吉富罗非鱼对TiLV的免疫反应，通过实时荧光定量PCR (qRT-PCR)测定免疫因子TNF-α和TGF-β在主要免疫器官脾脏和头肾组织中的表达。研究表明，在感染早期(感染后12～24 h)，病毒可显著抑制TNF-α和TGF-β在脾脏和头肾中的表达，可能通过抑制宿主这些免疫因子来促进病毒自身早期的复制。本研究将为进一步解读TiLV的致病机理及其高效防控提供理论基础。

黄条鰤PTEN基因克隆、组织分布及早期发育阶段的表达分析 下载：77 浏览：513

孙冉冉1 史宝2 柳学周1,2 常亚青1 张言祥3 高全义3 徐永江2 王滨2 姜燕2 张正荣2 《中国水产学报》 2019年2期

摘要:
为探究PTEN在黄条鰤Seriola aureovittata生长发育过程中的分子作用机制,采用同源克隆和cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆了黄条鰤生长调控因子PTEN的cDNA全长序列,并采用实时荧光定量PCR(qPCR)技术分析了PTEN mRNA的时空表达特征。结果表明:黄条鰤PTEN cDNA序列全长为1575bp,开放阅读框为1287bp,编码428个氨基酸,PTEN编码的蛋白具有脊椎动物PTEN的共同特征,含有PTP(PTPc基序)和PTEN-C2结构域;序列比对分析发现,黄条鰤与高体鰤Seriola dumerili同源性较高,一致性达到了95%;通过系统进化树分析表明,黄条鰤与鲈形目及鲽形目鱼类聚为一支;经qPCR分析发现,黄条鰤PTEN mRNA在心脏中的相对表达量最高(P<0.05),其次在脾脏、头肾、肾脏、胃、肠、鳃中表达量较高,PTEN mRNA在多种组织中的广泛表达,暗示着其可能参与多种生理过程的调控;同时分析了PTEN mRNA在黄条鰤早期发育阶段(胚胎期、仔稚幼鱼期)中的时序表达特征,发现PTEN在早期胚胎发育中持续表达,从低囊胚时期(38hpf)表达量显著升高(P<0.05),初孵仔鱼时期相对表达量最高(P<0.05);在仔稚幼鱼时期,PTEN mRNA相对表达水平逐渐降低,35日龄表达量显著下降(P<0.05)并保持较低表达水平。研究表明,PTEN在胚胎及仔稚幼鱼发育过程中具有重要调节作用,本研究结果可为黄条鰤早期生长发育过程的调控机制研究及苗种培育提供数据资料。

剑尾鱼趋化因子CCL4和CCL19基因的克隆及嗜水气单胞菌感染对其组织表达的影响 下载：84 浏览：520

朱成科1 王建1 陈灵涵1 周朝伟1 雷骆1 邓星星1 刘春2 郑宗林1 《水产研究进展》 2018年5期

摘要:
趋化因子是一类能够吸引白细胞移行到感染部位的低分子量(8～10 ku)蛋白质，在炎症反应、非特异性免疫反应中具有重要作用。实验克隆了剑尾鱼2个趋化因子基因(CCL4、CCL19)c DNA序列，运用荧光定量PCR技术检测其在健康组织和嗜水气单胞菌感染后肝、脾中的表达情况。结果显示，剑尾鱼CCL4和CCL19开放阅读框长度分别为294和333 bp，分别编码97和110个氨基酸，推导氨基酸序列均含有趋化因子CC家族标志性的4个半胱氨酸残基，与其他物种尼罗罗非鱼、鼠、狗、人、鸡的氨基酸序列相似性比较，CCL4相似度分别为71.1%、33%、33%、31%、23.5%；CCL19相似度分别为62%、26.9%、24.5%、26.6%、27.8%。在检测的健康剑尾鱼8个组织中，CCL4和CCL19均有表达，其中CCL4和CCL19均在脾脏中表达量最高；CCL4在肌肉和肠中表达量较低，而CCL19则在心脏中表达量较低。经嗜水气单胞菌感染后，CCL4在剑尾鱼头肾中12 h表达量达到最高，在肝脏中24 h表达量最高；CCL19在头肾和肝脏中均在24 h时表达量最高。研究表明，趋化因子CCL4和CCL19可能参与剑尾鱼机体免疫调节反应，在抗嗜水气单胞菌感染过程中发挥了重要作用。
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