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太平洋鳕抗菌肽Hepcidin基因克隆及体外表达研究 下载：55 浏览：372

吴玲梅1 顾杰1 温智清2,3 贾鹏2,3 刘瑞婷1 蒋洁兰1 刘荭2,3 郑晓聪2,3 毛明光1 《中国水产学报》 2020年2期

摘要:
为揭示太平洋鳕Gadus macrocephalus抗菌肽Hepcidin(GmHep)的分子结构和表达特性,利用qPCR法对平均体质量为2.438kg鳕不同组织和发育早期的GmHep表达模式进行了探讨,分别构建了原核(pET-32a-GmHep)和真核(pEGFP-GmHep)表达载体,研究了GmHep的体外表达特点。结果表明:GmHep基因开放阅读框长为297bp,编码98个氨基酸,蛋白相对分子质量为10833.56,该肽N端具22个氨基酸残基的信号肽,成熟肽含有8个半胱氨酸残基、4个二硫键;氨基酸序列比对发现,GmHep与大西洋鳕Hepcidin同源性最高(93%),但与其他鱼类Hepcidin同源性较低(小于60%),预示其功能具有独特性;GmHep在肝脏中的表达量显著高于其他组织(P<0.05),且GmHep在5、10、30、37、40日龄仔稚鱼中均有表达(P<0.05);GmHep体外诱导表达优化条件为IPTG浓度0.01mmol/L、30℃、诱导4 h;GmHep在EPC细胞系中主要定位在细胞质中。研究表明,本研究成功构建了两种GmHep体外表达载体,确定GmHep为肝分泌型,且在太平洋鳕发育早期发挥一定作用。

大头鳕TNFSF6基因的结构分析及其在发育早期和病毒暴发时的表达水平 下载：87 浏览：497

刘瑞婷1 蒋洁兰1 毛明光1，2 姜志强1 布尔特1 矫志伟1 陈明康1 孙谦1 《水产研究进展》 2019年2期

摘要:
为揭示大头鳕TNFSF6基因的基本结构与功能及其在大头鳕发育和神经坏死病毒(Pacific cod nervous necrosis virus， PCNNV)暴发时的响应机制，本研究通过基因克隆获得TNFSF6 cDNA开放阅读框序列，并对序列进行生物信息学分析，运用相对荧光定量PCR(qRT-PCR)方法对TNFSF6在不同组织、孵化后不同日龄仔鱼和PCNNV感染前后仔稚鱼中的表达水平进行检测。结果显示，大头鳕TNFSF6 cDNA长1 388 bp，5′UTR占315bp，3′UTR占500 bp，ORF全长573 bp，编码190个氨基酸。qRT-PCR结果显示，TNFSF6在各组织均有表达，但在脾脏和鳃组织中的表达量较高；大头鳕孵化后15、20、37和40 d TNFSF6基因的转录水平分别是其在5 d转录水平的0.28、0.15、0.12和0.13倍。在24 d和46 d PCNNV暴发时，病鱼TNFSF6基因的转录水平高于对照组；在77 d PCNNV暴发时，病鱼TNFSF6转录水平则显著低于对照组。研究表明，TNFSF6基因在大头鳕发育早期和仔鱼暴发PCNNV时发挥了重要的作用。
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