摘要:
分析rab7及其下游相关分子rilp和rep1在卡介苗侵袭巨噬细胞过程中的作用。[方法]利用CRISPRERA在线设计鼠源rab7-gRNA序列,构建dCas9调控质粒,比较调控前后rab7、rilp和rep1的mRNA表达量。[结果]成功设计3条rab7-gRNA,构建重组调控质粒p X330S-2-d Cas9-gRNA-T2A-EGFP; BCG感染后,巨噬细胞内rab7及其下游的rilp和rep1的mRNA水平明显上升(P <0. 01); gRNA1调控后,rab7及下游rilp的mRNA水平明显下降(P <0. 05; P <0. 01); gRNA3调控后,rab7及rilp mRNA水平有所下降,但无统计学意义(P> 0. 05)。gRNA1和gRNA3调控对rep1 mRNA水平无明显影响(P> 0. 05)。[结论]在BCG侵染巨噬细胞过程中,rab7作为晚期吞噬体的标志受到dCas9调控后变化明显,rilp作为rab7的下游效应分子,表达水平与rab7的变化一致,而rep1未见明显变化。三者在MTB寄生过程中的作用还有待深入研究。
