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基于Nrf2/HO-1启动子筛选抗水生病毒药物的方法 下载:71 浏览:463

王靖雯1 吴苗苗1 李莉娟1,2 顾泽茂1,2 袁军法1,2 《水产研究进展》 2024年3期

摘要:
为建立基于Nrf2、HO-1启动子活性的抗病毒药物筛选方法,实验以胖头鱥上皮细胞系(FHM)为材料,构建Nrf2、HO-1启动子重组质粒,利用双荧光素酶报告系统检测不同浓度(0、3.1、6.3、12.5、25.0、50.0μg/mL)的白藜芦醇、水飞蓟宾、穿心莲内酯及姜黄素对启动子活性的影响,并利用鲤春病毒血症病毒(spring viremia of carp virus,SVCV)和蛙虹彩病毒(rana grylio iridovirus,RGV)验证阳性药物的抗病毒效果。结果显示,Nrf2、HO-1启动子序列中存在FOX家族、IRF家族等多种转录因子的结合位点,并分别存在1个和3个与甲基化相关的CpG岛。双荧光素酶报告实验显示,水飞蓟宾、穿心莲内酯及姜黄素可激活Nrf2、HO-1启动子。药物浓度梯度实验显示,6.3μg/mL的姜黄素和穿心莲内酯可显著上调Nrf2和HO-1的启动子活性。病毒感染后的细胞病变效应、病毒的复制及病毒滴度结果均表明姜黄素和穿心莲内酯可抑制SVCV和RGV的感染。综上,本实验建立的pGL3-Nrf2和pGL3-HO-1启动子报告质粒,可用于抗水生病毒药物的筛选,也为Nrf2、HO-1转录调控机制的研究提供了工具。

基于Nrf2/HO-1/NF-κB信号通路探讨脐带间充质干细胞对哮喘大鼠气道炎症的影响 下载:31 浏览:1586

林益平 于倩 吴湘杰 吴晓虞 《中国医学研究》 2025年2期

摘要:
目的:研究脐带间充质干细胞(UC.MSCs)对哮喘大鼠模型气道炎症的影响,探讨UC.MSCs治疗哮喘的作用机制。方法:随机将SD大鼠分为正常对照组(C组)、模型组(M组)、地塞米松组(D组),UC.MSCs静脉注射组(iv组)和UC.MSCs气管滴入组(it组)。建立哮喘大鼠模型,实验后观察肺组织炎症反应水平。ELISA检测肺组织中IL-6、IL-17和还原型GSH含量;免疫荧光检测NF-κB和NRf2的表达;qPCR检测肺组织 NQO1,HO-1的mRNA表达。结果:与正常对照组相比,模型组肺组织炎症明显,AB-PAS染色显示杯状细胞明显增生,同时肺组织中 IL-6和IL-17含量显著升高(P < 0.001);NQO1和HO-1的mRNA表达显著下调(P < 0.001),还原型GSH含量显著降低(P < 0.001);NF-κB荧光密度增强,而NRf2的荧光密度减弱。而与模型组比较,iv组和it组的肺组织中 IL-6和IL-17含量显著降低(P < 0.01);NQO1和HO-1的mRNA表达显著上调(P < 0.01),还原型GSH含量显著增加(P < 0.001);NF-κB荧光密度减弱,而NRf2的荧光密度有所增强。结论:UC.MSCs两种给药方式均可有效改善哮喘大鼠气道炎症、氧化应激,其作用机制可能与抑制哮喘大鼠肺组织 NF-κB 水平,激活Nrf2/HO-1信号通路有关。
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