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改良Trizol法提取血浆游离RNA 下载：73 浏览：489

陈雪梅 李聪 丁雨 吴思思 《生物技术研究》 2019年2期

摘要:
建立一种成本低、得率高的血浆游离RNA的提取方法。[方法]分别采用传统Trizol法、改良Trizol法、试剂盒法提取200μL健康成年人血浆中游离RNA,并比较三种方法所得RNA的浓度、纯度及大小片段RNA得率的差异。[结果]改良Trizol法所得RNA浓度是常规Trizol法的21. 7倍（P <0. 01）,是试剂盒法的6. 4倍（P <0. 01）;三种方法所得RNA纯度(A260/A280)无显著差异;采用RT-q PCR方法检测血浆游离RNA大小片段的回收率,外参秀丽线虫miR-39-3p（cel-miR-39-3p）代表小片段RNA,GAPDH代表大片段RNA,改良Trizol法检测Cq平均值分别为15. 64和33. 34,平均低于常规Trizol法2. 05～3. 62个Cq,低于试剂盒法0. 32～3. 34个Cq。[结论]改良Trizol法提取血浆游离RNA相较于常规Trizol法提高了10～20倍,增加了得率。

3种血浆微小RNA提取方法的评价 下载：98 浏览：492

黄学文 潘杰 赵兰静 吴茵 朱菊平 《国际检验医学》 2018年9期

摘要:
目的对3种血浆微小RNA(miRNA)提取方法进行评价。方法运用国产、进口硅胶吸附柱法和TRIzol法分别提取20名志愿者血浆中的miRNA；利用TaqMan聚合酶链反应(PCR)检测提取物中的β-globin基因含量，观察提取物中RNA的纯度；利用反转录茎环引物及TaqMan-MGB探针q PCR检测提取物中miRNA-21含量，观察miRNA提取的效率。结果国产、进口硅胶吸附柱法及TRIzol法提取液中β-globin基因的Ct值分别为35.487±0.356、35.591±0.332和33.529±0.499，3种方法的Ct值差异有统计学意义(P<0.001)；国产和进口硅胶吸附柱方法的β-globin基因Ct值均明显高于TRIzol法(P<0.000 1)；而国产与进口硅胶吸附柱法β-globin基因Ct值差异无统计学意义(P=0.345 4)。国产、进口硅胶吸附柱法和TRIzol法miRNA-21的Ct值分别为26.527±0.158、26.653±0.201和28.169±0.385，3种方法的Ct值差异有统计学意义(P=0.000 3)；国产和进口硅胶吸附柱法miRNA-21的Ct值均明显低于TRIzol法(P<0.000 1)；国产硅胶吸附柱法miRNA-21的Ct值低于进口硅胶吸附柱法(P=0.033 7)。结论硅胶吸附柱法可有效提高miRNA的提取效率和纯度。国产硅胶吸附柱法完全可以取代进口硅胶吸附柱法。
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