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转基因vp28蓝藻口服疫苗半数有效量测定及其对斑马鱼的安全评价 下载：72 浏览：494

徐杨1 谢京昆1 李赟卉1 苏永政1 何培民1，2 贾睿1，2 《水产研究进展》 2021年3期

摘要:
为了探究转基因蓝藻作为口服疫苗来防治白斑综合征病毒(WSSV)的效果，本研究将转基因vp28蓝藻口服疫苗投喂凡纳滨对虾幼苗，验证其剂量梯度抗WSSV的影响，并测定其半数有效剂量(ED50)。以该剂量为依据投喂斑马鱼，通过测定斑马鱼体内的酶学指标、观察组织切片及养殖水体中氮磷等的变化，来探究转基因vp28蓝藻口服疫苗对水生生物和水体环境造成的影响。研究结果显示，随着转基因蓝藻口服疫苗剂量的增加，凡纳滨对虾幼苗抗WSSV的能力随之增强，测得ED50为0.027g。分别使用野生型和转基因型蓝藻配合饲料投喂斑马鱼15d，投喂结束后其生长状态良好、游动正常；投喂前后身体颜色无明显差异，不同组间体长增长不显著。转基因组斑马鱼中过氧化氢酶活力稍低于空白组和野生型组，过氧化物酶活力随着投喂天数的增长而呈降低趋势；水质监测发现，总氮日均波动变化且变化幅度较小，总磷在投喂期间有所提升，15d时恢复到初始投喂日的水平。投喂蓝藻的2组氨氮均要低于空白对照组，氨氮含量的提升对斑马鱼的抗氧化能力存在一定影响；组织切片发现，各组斑马鱼的肝脏、心脏组织细胞无明显差异。研究表明，转基因vp28蓝藻口服疫苗可有效增强凡纳滨对虾抗WSSV能力，且抗病能力随着口服疫苗剂量的升高而增强；投喂斑马鱼后，斑马鱼无明显的毒理效应，且对水质影响较小；转基因vp28蓝藻作为亚单位疫苗投放对水生生物的影响较小，可为后续产业规模应用提供基础。

传染性胰脏坏死病毒VP2蛋白酵母表面展示系统的建立 下载：90 浏览：517

贺文斌1,2,3 徐黎明2 赵景壮2 刘淼2 任广明2 卢彤岩2 尹家胜2 《中国水产学报》 2019年6期

摘要:
为了将传染性胰脏坏死病毒(Infectious pancreatic necrosis virous,IPNV)的主要保护性抗原及IPNV检测和疫苗开发的主要靶基因——VP2蛋白展示于酵母细胞表面,本研究中基于IPNV VP2基因序列设计引物,以IPNV ChRtm213的RNA为模板进行PCR扩增,然后将扩增产物连接到酵母表面展示载体pYD1上构建了重组质粒pYD1-VP2,将重组质粒转化至酵母EBY100感受态细胞中,得到含有重组质粒的酵母菌EBY100/pYD1-VP2,再向EBY100/pYD1-VP2中加入半乳糖进行VP2蛋白的诱导表达,并采用蛋白免疫印迹和细胞免疫荧光技术对VP2蛋白的酵母表面展示情况进行了分析。结果表明:经半乳糖诱导后VP2蛋白在酵母细胞表面获得了成功表达;细胞免疫荧光分析显示,重组酵母诱导表达后出现特异性绿色荧光,并且在一定时间内荧光强度与诱导时间成正相关,诱导24、36、48h组及对照组(48h)各组之间荧光酵母比例有显著性差异(P<0.05)。研究表明,IPNV VP2蛋白已经被酵母细胞高效表达并且成功展示于酵母细胞表面,本研究结果可为IPNV口服活载体疫苗的研制奠定基础。
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