[Abstract] Objective To analyze the application effect of different immunoassay methods in detecting serum markers of hepatitis B virus infection. Methods 78 patients with hepatitis B virus infection in our hospital from April 2022 to April 2023 were randomly divided into control group (39 cases) and observation group (39 cases) for ELISA test and CLIA test. The positive detection rates of HBeAb, HBeAg, and HBsAg in the observation group were significantly higher than those in the control group (P<0.05); The testing cost of the observation group (428.69 ± 14.86) yuan was significantly higher than that of the control group (134.32 ± 13.65) yuan. Conclusion The introduction of CLIA test in the test of hepatitis B virus infection can significantly improve the test effect, but the cost is high. The clinical can choose appropriate test technology according to the actual situation.
【Keywords】 Enzyme linked immunosorbent assay; Hepatitis B virus infection; Chemiluminescence immunoassay method
乙型肝炎发生率较高，属于一种感染性疾病，该病毒存在一定潜伏期，一般为1—6个月，该病会影响到多种疾病[1]。患者常见症状有恶心、腹胀、厌食、肝区疼痛和乏力等，随着病程延长，可能引发肝功能异常或者脾大等现象。该病传染性强，传播途径主要有性、汗液、血液和母婴等。选取适宜技术，尽早检出该病，予以患者诊治意义重大。本次研究以乙肝病毒感染患者为对象，分析不同免疫检验方法的应用效果。
1 资料和方法
1.1一般资料
选取2022年4月-2023年4月本院78例乙肝病毒感染患者开展研究，随机平均分为对照组39例，男20例，女19例，平均年龄（42.18±4.71）岁；观察组39例，男21例，女18例，平均年龄（42.76±4.13）岁。两组一般资料（P＞0.05），具有可比性。
1.2方法
采集肘静脉血，含量为5ml，放入离心机，展开离心处理，将离心率设置为3000r/min，共进行15min，分离血液样本，低温保存。
对照组行ELISA检验：选取PHOMO酶标仪、Iwo-960型洗板机，相关试剂，检验血液样本，放置ELISA试剂、微孔反应条，维持30min，将血清样本注入微孔反应条，借助封片，将其封锁，置于水浴箱中，将温度控制在37℃，将反应条中含有的液体清除，重复洗涤，共进行5次，放入试剂，然后封锁。
观察组行CLIA检验：选取聚苯乙烯试管，注入血清样本，应用100μLHRP进行标记，将环境温度控制在37℃，放置2h，采取PBS缓冲液展开冲洗，共计3次，每次3min，选取0.1mol/L氢氧化钠100μL，30mol/L鲁米诺100μL，静置10min，选择100μL过氧化氢，浓度为3%，借助发光仪对发光强度展开检验。对血清样本展开PCR检验，用实时荧光分析仪及相应试剂检验，遵循说明书展开各项操作。
1.3观察项目和指标
评价检验结果：观察HBsAb 、HBcAb 、HBeAb、 HBeAg和HBsAg阳性检出情况；观察两组检验成本。
1.4统计学方法
SPSS23.0处理数据，（
）与（%）表示计量与计数资料，分别行t与检验，P＜0.05，差异有统计学意义。
2 结果
2.1两组检验结果比较
观察组的HBeAb、HBeAg和HBsAg阳性检出率均明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。详见表1。
表1 两组检验结果比较[n(
)/(%)]
2.2两组检验成本比较
观察组的检验成本（428.69±14.86）元明显高于对照组的（134.32±13.65）元，差异有统计学意义（P＜0.05）。详见表2。
表2 两组检验成本比较[n(
)]
3 讨论
乙肝发生率高，具有传染性，乙肝病原为乙肝病毒，其体积较小，度过一段潜伏期，会形成乙肝。乙肝病毒具有较强抵抗力，针对一般浓度消毒剂、干燥、热、紫外线和低温等，可以耐受，传播途径主要包括性接触、血液/血制品、母婴和破损皮肤黏膜等。传染源主要包括乙肝携带者及乙肝患者。在特定生活习惯、工作环境中，乙肝感染风险增加，例如和乙肝患者体液、血液密切接触，共有针头/注射器，不洁性生活等。机体受侵后，病毒会在干细胞中繁殖和复制，于肝细胞核中嗜肝脱氧核糖核酸不断转录、复制，合成核心颗粒，进一步转移到干细胞浆中，发展为外壳，通过发芽途径，逃离肝细胞。乙肝病毒具有较高耐热、耐紫外线和耐低温能力，治疗难度相对较大，目前临床检验该病时多采取血清标志物。
通过免疫检验，能了解免疫应答特征，针对乙肝病毒感染，其在临床上分为三个阶段，分别为免疫稳定期、免疫耐受期和免疫活跃期。时期不同，患者免疫特征有一定差异，其机体内肝脏损伤程度、病毒水平也不一致，临床可以检查结果为依据，能对患者免疫状态进行评估。对于免疫耐受期者，分析其特征，主要有乙肝病毒复制相对活跃，检验血清HBeAg呈现出阳性，患者体内病毒含量高，血清ALT正常，肝组织学变化不明显。该阶段患者症状不明显，患者容易忽略，疾病逐步恶化，干扰到日常工作、生活。精准、积极评估乙肝病毒感染，制定适宜治疗方案，能显著缓解肝细胞受损。患者被乙肝病毒感染后，可能出现免疫反应，形成抗原抗体。检验乙肝核心抗原，具有较高难度，故而临床检验时，不仅要检验核心抗原，还应检测乙肝二对半。HBeAg多出现于急性乙肝潜伏期，也可能在慢性乙肝病毒感染、乙肝慢性期等阶段检验出乙肝病毒外科中含有HBsAg，属于一种蛋白成分，不会感染，乙肝病毒感染者体内的HBsAg显著增加，感染7—14天能够检验到，HBsAg水平和病情程度成正比。在HBeAg刺激下，机体会产生抗体，即为HBeAb，其能精准反映出乙肝病毒复制情况，临床可借此评估诊疗情况[2]。另外，该病毒常见标志物还有HBsAb、HBcAb和HBeAg等，检验上述指标，评价感染情况。
ELISA花费较少，但检验流程复杂，检验结果影响因素较多，容易出现误差。ELISA能令抗体结合酶复合物，观察显色情况，对其展开检验。该技通过血清检验，凝集30min血液，获取到血清，采取稀释液，对酶复合物进行稀释处理，加入适量血清，对其进行阳性、阴性对照，合理选取质控品。对其进行孵育，时间为60min，洗板，将底物加入，开展0.5h避光反应，将终止液注入，反应部分完成。CLIA以前者为基础，临床操作便捷，需要样本量少，取得检验结果时间较短。借助微粒子化学发光技术，对药物浓度及微量成分展开定量测量，敏感性、稳定性和特异性高[3]。进行化学反应时，部分反应物将反应形成的化学能吸收，从基态跃迁，形成较高电子，通过内转换或振动弛豫，实现最低能量级，通过辐射形式，将能量放出，达到基态。对于个别情况，其能经由系间跃迁发展到三重态，形成光辐射。化学反应本身决定了化学效率，环境对其发光体本身性质、结构产生的影响到发光效率。本次研究结果显示观察组的检测成本、HBeAb、HBeAg和HBsAg阳性检出率均明显高于对照组（P＜0.05）；观察组的检验成本（428.69±14.86）元明显高于对照组的（134.32±13.65）元，表明CLIA具有更高诊断效能，但同时其花费也较高。分析原因主要为CLIA全程自动化，能有效防范人为因素导致的结果误差，实现定量分析，但该技术涉及多项检验项目，所以成本更高。说明临床可根据实际情况选取适宜技术，检验乙肝。
综上所述，在乙肝病毒感染检验过程中引入CLIA检验能显著提升检验效果，但花费较高，临床可根据实际情况选择适当检验技术。
参考文献：
[1]李鑫,李志勤,苏彬彬,张海军,王小娟. 不同免疫检验方法检测乙肝病毒感染血清标志物的效果分析[J]. 医学食疗与健康,2022,20(17):59-61.
[2]徐彩姝. 乙型肝炎病毒感染血清学标志物应用不同免疫检验方法检测的效果分析[J]. 中国现代药物应用,2022,16(4):98-100.
[3]赵艳争,陈凯,王学菊. 两种免疫检验方法检测乙肝病毒感染血清标志物的对比分析[J]. 中国医疗器械信息,2022,28(2):4-7+10.
