双黄连口服液是一种临床应用频率较高的抗菌抗病毒类药物，其主要成分包括金银花、黄岑以及连翘等几味中药。在治疗因为外感风热导致的感冒以及头痛、咳嗽等病症过程中效果突出。该口服液有效成分的检测目前主要采取高效液相色谱法来实现，同时建立指纹图谱来评价药品质量高低，以下本文结合具体试验对相关方法进行了探讨。
1仪器与材料
本次试验所使用仪器与器材主要如下：Agilent 1200高效液相色谱仪；AR2140型电子分析天平；METFLER AB135-S十万分之-电子天平；超声提取仪(240W，50-60Hz)。连翘苷、绿原酸、黄芩苷等对照品。纯净水；甲醇等试剂。
2化学成分含量测定
2.1色谱条件
梯度洗脱：0～8r ain，A(15％30％)-B(85％～70％)；8～15r a in，A(30％-35％)-B(70％～65％)；15～20r ain，A(35％-53％)-B(65％～47％)；20～45r a in，A(53％～63％)-B(47％～37％)；45～65r a in，A(63％～100％)-B(37％-0％)；检测波长：280nm。
2.2对照品溶液制备
分别精密称取绿原酸、连翘苷、黄芩苷对照品，用50％甲醇制成0.1822、0.053、1.18mg/mL的混合对照品溶液，0.45 m微孔滤膜滤过，即得。
2.3供试品溶液制备
分别取l0支双黄连口服液的等量内容物混合，精密量取0.5mL，置于10mL量瓶中，加入50％甲醇定容，摇匀，0.45 m微孔滤膜滤过，即得。
2.4阴性对照溶液制备
取除去金银花、连翘、黄芩药材，按双黄连口服液制备工艺制备阴性药品，按供试品溶液制备方法操作，制成缺失金银花、连翘、黄芩的阴性对照溶液，备用。
2.5准确度试验
精密量取6份已知含量的双黄连口服液(S-2)0.25mL，置10mL量瓶中，分别精密加入黄芩苷(1.18mg／mL)5mL、绿原酸(0.1822mg／mL)5mL和连翘苷(0.053mg／mL)5ml对照品溶液，按供试品溶液的制备方法制备，注入色谱仪，测定峰面积，计算回收率。结果显示，3个成分的含量的回收率均在95％～105％之间。
2.6含量测定
制备供试品溶液，在上述色谱条件下进行测定，采用外标法计算含量。11个不同厂家双黄连口服液含量测定结果有一定差异，但均满足相关含量限度要求，具体结果见表1。
3双黄连口服液指纹图谱的建立
3.1供试品溶液制备
分别取1O支双黄连口服液的等量内容物混合，精密量取0.5mL，置于10mL量瓶中，加入50％甲醇定容，摇匀，0.45 m微孔滤膜滤过，即得。
3.2参照物溶液制备
分别精密称取黄芩苷14.0lmg、绿原酸4.24mg、连翘苷5.03mg，置于10mL量瓶中，加人50％甲醇定容，摇匀，分别制得黄芩苷标准品溶液1.401mg／mL、绿原酸0.424g／mL、连翘苷0.503mg／mL。
3.3阴性溶液的制备
取除去双黄连口服液，按供试品溶液制备方法操作，制备阴性对照溶液，备用。
3.4色谱条件
色谱柱：Agilent C色谱柱(250mmX4.6mm，5)；流动相：甲醇(A)-0.25％冰乙酸(B)；梯度洗脱：0～8min，A(15％～30％)-B(85％～70％)：8～15r a in，A(30％～3 3％)-B(7O％～67％)：15～20min，A(33％～40％)-B(67％～60％)：20～40min。A(40％～43％)-B(60％～57％)；40～50 r a in.A(43％～47％)-B(57％～53％)；50～70 min。A(47％～100％)-B(53％～0％)。流速：1.0mL／min；柱温：30~C；进样体积：101xL；检测波长：278nm
3.5参照物的确定
试验过程中分别检测不同厂家提供的试验样品，结果显示色谱峰基本都在70分钟左右的时间出现。考量参照物的一致性，选择其中共有成分黄芩苷、绿原酸和连翘苷为参照对象，参照色谱图见图1。
3.6共有指纹峰的标定
分别量取供试品溶液以及阴性溶液进行共有指纹峰对比分析，以所有厂家所提供的供试样品中测试成分的峰值保留时间和对照物成分峰值保留时间为是对比数据来源，实践一致的峰为共有智文峰。将相关数据导入专业的中药色谱指纹图谱相似度评价系统中对保留时间进行相似度评价。具体评价结果见表2。
3.7方法学考察
3.7.1精密度试验
首先，精密量取适量供试品溶液并连续6次进样试验，然后对共有峰的相对保留时间以及相对峰的面积进行记录。数据显示，六次进样是的两项数据都在3%以下，符合相关产品指纹图谱分析标准。同样将相关数据导入评价系统进行分析，数据显示，六次进样的图谱相似度都是在96%以上，说明采取的试验方法具有较高的精密度。
3.7.2稳定性试验
首先，制备并精密量取供试品溶液，分多次进样，进样时间设定为0、2、4、6、8、10h六个节点。然后同样也是记录共有峰相对保留时间和相对峰面积值，数据显示，试验结果与精密度试验数据一致，说明本次试验的稳定性也十分可靠。
4讨论
通过本次试验研究发现，采取高效液相色谱法对双黄连口服液中的黄芩苷、连翘苷和绿原酸3种主要成分进行检定，其准确率、稳定性以及重复性都表现良好。且该检测工艺操作简单， 只要简单培训即可上岗，有助于提高同类药品成分含量检测的效率，值得被广泛推广应用。另外，本次试验研究还建立了双黄连口服液指纹图谱，标定了12个共有峰，试验结果显示，该方法学考察符合规范要求，可行性较高。
参考文献
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