目的将新生儿遗传代谢病筛查(简称"新筛")后剩下的干血斑继续用于耳聋基因提取和飞行质谱检测，从而减少耳聋基因检测过程中的取样频次并缩短检测周期。方法在碱水煮沸法提取耳聋基因的基础上优化碱水的pH值和用量，使"新筛"干血斑DNA提取浓度达到新鲜血斑水平。结果用pH值为9、10、11、12的碱水从干血斑中提取DNA时，DNA的浓度与碱水pH值呈正相关(r=0.906，P=0.094)，20个耳聋基因位点均能被正常检出；当pH值达到12时，质谱峰图信号响应值减小，检测质量下降。用60、70、80、90μL pH值为11的碱水从"新筛"干血斑中提取DNA时，DNA浓度与碱水体积呈负相关(r=-0.988，P=0.012)；用90μL pH值为11的碱水时，有1例样本547G>A位点基因被漏检，用80μL pH值为11的碱水时，DNA提取浓度和新鲜血斑最接近(t=0.035，P=0.974)，同时质谱峰图良好。结论用80μL pH值为11的煮沸碱水从"新筛"干血斑中提取DNA，可获得较好的耳聋质谱检测结果，为搭建"新筛"和耳聋自动化检测平台提供一定的技术参考。