美洲大蠊抗菌肽AMPPA13的表达及纯化
张文博1 高洁1 麻锦楠2 李午佼2 沈咏梅2 张修月1 岳碧松1
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张文博1 高洁1 麻锦楠2 李午佼2 沈咏梅2 张修月1 岳碧松1,. 美洲大蠊抗菌肽AMPPA13的表达及纯化[J]. 生物技术研究,2018.3. DOI:.
摘要:
预测美洲大蠊新的抗菌肽基因,构建原核表达体系并纯化表达产物。[方法]通过生物信息学方法,预测分析出潜在的美洲大蠊抗菌肽。构建pET32a重组质粒,优化诱导表达条件,通过亲和层析,分子筛等手段获得纯化的抗菌肽,并进行Western Blot鉴定。[结果]预测出美洲大蠊新的抗菌肽基因AMPPA13,成功构建重组质粒pET32aAMPPA13。优化诱导表达条件得最佳IPTG浓度为0.1 mmol/L,最佳诱导时间为4 h,最佳诱导温度为37℃。纯化后AMPPA13浓度为268μg/m L。[结论]克隆出美洲大蠊抗菌肽基因,并成功构建原核表达体系,得到1 m L纯化的AMPPA13,经Western Blot鉴定,表达产物正确。
关键词: 美洲大蠊;抗菌肽AMPPA13;原核表达;分离纯化
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