心血管疾病相关的MicroRNA-21新型检测方法的建立
鞠传静1 王东霞2 梁斌斌3 卜胜君4 王奎宇4 万家余4
1.吉林省一汽总医院心内科2.吉林省一汽总医院电诊科3.吉林省一汽总医院老年病科4.中国人民解放军军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所
摘要: 建立一种测定miR-21含量新型实验方法。[方法]利用microRNA-21(miR-21)作为靶标,并设计基于双链特异性核酸酶(Duplex specific nuclease,DSN)及杂交链式反应(Hybridization chain reaction,HCR)的探针MP、H1及H2,通过加入靶标从而引起DSN和HCR反应,达到双重信号放大的目的,最终信号输出方式为DNAzyme显色,裸眼可视,根据其产生颜色强度对靶标进行定量检测。[结果]DSN结合HCR靶标的最低检测限可达1 pmol/L,线性范围为1 pmol/L~1μmol/L,特异性良好,除靶标miR-21外,非特异性靶标均无明显信号产生,在人体血清实际样品中检测miR-21,其回收率可达到92. 3%~101. 5%。[结论]该检测方法成功建立测定miR-21含量的技术平台,灵敏性可达1 pmol/L,且特异性好、快速可视,为研究及临床诊断心血管疾病提供技术依托。
关键词:
miRNA-21;心血管疾病;微小RNA;双链特异性核酸酶;杂交链式反应;DNAzyme;可视化检测;
miRNA-21;心血管疾病;微小RNA;双链特异性核酸酶;杂交链式反应;DNAzyme;可视化检测