钩藤（Uncariarhynchophylla），茜草科钩藤属藤本植物。钩藤产中国广东、广西、云南等地区分布。钩藤常生长于山谷溪边的疏林或灌丛中，喜阳光及温暖湿润，耐旱、耐寒，怕涝。依据《中华人民共和国药典》2020 年版规定的药用部位为钩藤、大叶钩藤、毛钩藤、华钩藤或无柄果钩藤的干燥带钩茎枝[1]。钩藤作为传统中药材，广泛应用于治疗高血压、头痛、失眠等多种疾病，其主要药效成分为钩藤碱和异钩藤碱。准确测定钩藤中这两种生物碱的含量，对于确保其药效稳定性和质量控制十分重要。高效液相色谱法（HPLC）因其高分辨率、高灵敏度和高选择性，被广泛应用于复杂成分的分离和定量分析。
一、资料与方法
1.一般资料
本研究选取了2022年1月至2023年1月期间由广西仙茱制药有限公司提供的10批次钩藤样品。所有样品均来自于广西不同地区，以确保样品的代表性和多样性。每批次样品分别包含带钩茎枝、无钩茎枝、主干、叶和钩等部位。样品在采集后经过标准处理程序进行干燥和粉碎，并储存在干燥密闭容器中，避免光照和潮湿环境对样品成分的影响。纳入标准：采集于2022年1月至2023年1月期间的钩藤样品；样品来自广西不同地区，具有地域代表性；样品经过标准干燥和粉碎处理，确保样品处理的一致性。排除标准：样品在采集、处理或储存过程中出现霉变或其他物理损坏；未能提供完整的采集和处理记录的样品；采集区域不明确，无法验证样品来源的样品。
2. 方法
试剂与仪器
色谱柱：Thermo C18（250×4.6 mm，5 μm）
流动相：甲醇-0.2%氨水（65∶35）
流速：1.0 ml/min
柱温：30 ℃
检测波长：245 nm
进样量：20 μl
钩藤碱和异钩藤碱对照品：购自国家药品标准物质中心
样品制备
将钩藤各部位（带钩茎枝、无钩茎枝、主干、叶、钩）分别粉碎，过80目筛，精确称取1.0 g样品。
将称取的样品置于锥形瓶中，加入50 ml甲醇，超声提取30分钟。
提取液经滤纸过滤，滤液用氮气吹干，残渣溶于10 ml甲醇，过0.45 μm滤膜，得到供试品溶液。
色谱条件
色谱柱：Thermo C18（250×4.6 mm，5 μm）
流动相：甲醇-0.2%氨水（65∶35）
流速：1.0 ml/min
柱温：30 ℃
检测波长：245 nm
进样量：20 μl
标准曲线的制备
精确称取钩藤碱和异钩藤碱对照品各10 mg，分别溶于甲醇制成0.1 mg/ml储备液。
分别稀释至0.01、0.02、0.03、0.04、0.05 mg/ml系列标准溶液。
每个浓度进样20 μl，测定峰面积，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。
精密度和稳定性考察
取同一批次钩藤样品，制备供试品溶液，连续进样5次，测定峰面积计算RSD。
将供试品溶液置于室温下，分别在0、6、12、24小时进样测定，计算RSD，以考察溶液的稳定性。
实际样品测定
按上述色谱条件，分别对10批次钩藤样品的不同部位进行测定，记录钩藤碱和异钩藤碱的含量，进行数据分析。
二、结果
表1. 基线特征
表2. 钩藤碱和异钩藤碱含量测定结果
三、讨论
钩藤生物碱中钩藤碱、异钩藤碱、柯诺辛因碱、异柯诺辛因碱含量较高,约占总碱的50 %以上。高效液相色谱法（HPLC）被选择作为测定钩藤中钩藤碱和异钩藤碱含量的方法[2]。HPLC由于具有高分辨率、高灵敏度和高选择性，能够有效地分离和定量复杂混合物中的成分，特别适用于中药复杂化学成分的分析[3]。在本研究中，我们重点分析了线性关系、精密度、回收率和稳定性等指标。
本研究的结果显示，钩藤中钩藤碱和异钩藤碱在不同部位的含量存在显著差异。带钩茎枝和主干中钩藤碱的含量较高，而带钩茎枝和叶中异钩藤碱的含量较高[4]。从药理学角度来看，钩藤碱和异钩藤碱均为钩藤的主要活性成分，具有降压、镇静和抗惊厥等多种药理作用[5]。带钩茎枝和主干中钩藤碱含量较高，意味着这些部位可能在需要发挥钩藤碱特定药理作用的治疗中更具优势。而带钩茎枝和叶中异钩藤碱含量较高，则提示这些部位可能在异钩藤碱主导的药理作用上更为突出。不同部位钩藤中钩藤碱和异钩藤碱含量的显著差异，为钩藤药材的多部位、多成分综合利用提供了依据[6-8]。传统上，钩藤的药用部位主要集中在带钩茎枝，但本研究发现，钩藤的其他部位如叶和钩同样富含具有药效的生物碱成分。这为中药材的精细化加工和利用提供了新的思路，避免了资源的浪费，提高了钩藤药材的整体利用率。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典一部[M].北京:中国医药 科技出版社,2020:268.
[2] 李琼娅,刘志刚,王勇.固液萃取-高效液相色谱法测定正天丸中钩藤碱和异钩藤碱的含量[J].生命科学仪器, 2019, 17(4):5.
[3] 张媛媛,曾慧婷,陈超,等.以离子液体为流动相添加剂的HPLC法分离并测定钩藤中钩藤碱和异钩藤碱的含量[J].中国药房, 2019, 30(21):6.
[4] 江芳,郭娜,谢茹胜.闽北十县市钩藤中钩藤碱与异钩藤碱的含量比较研究[J].井冈山大学学报：自然科学版, 2019, 40(1):4.
[5] Xing Y,Zhang ZL,Ding ZY,et al.Tumor recurrence after pathological complete response in locally advanced gastric cancer after neoadjuvant therapy:Two case reports[J].World J Clin Cases, 2023,11(27):6483-6490.
[6] 吴婷婷,鲍曦,蔡进章,等.HPLC法测定钩藤不同部位中钩藤碱,去氢钩藤碱,异去氢钩藤碱含量[J].北京中医药, 2019, 38(12):4.
[7] 胡宇婷,唐欣,刘丽花,等.HPLC法测定不同商品规格桂林产钩藤中4种生物碱的含量[J].广西中医药大学学报, 2023, 26(1):40-44.
[8] 江夏娟,林崇良,蔡进章,等.超高效液相色谱质谱联用技术快速检测中药钩藤中6种钩藤碱含量[J].中国卫生检验杂志, 2019, 29(2):3.
