文章-世纪中文出版社

黄颡鱼GnRHR基因的克隆和表达及CRISPR/Cas9构建GnRHR基因敲除突变体下载：65 浏览：367

李石竹1 方文宇1 骆明飞2 卢建国1 《中国水产学报》 2021年4期

摘要:

为研究促性腺激素释放激素受体(gonadotropin releasing hormone receptor, GnRHR)对黄颡鱼Pelteobagrus fulvidraco性别分化和性腺发育的调控作用,采用逆转录PCR、氨基酸序列多重比对、系统进化树分析及实时定量PCR方法,对黄颡鱼GnRHR基因的序列、表达和进化进行了研究。结果表明:扩增到的黄颡鱼GnRHR cDNA序列长2894bp,包含239bp的5′非翻译区,1155bp的开放阅读框和1500bp的3′非翻译区,预测编码384个氨基酸、7次跨膜结构域蛋白;氨基酸序列多重比对显示,黄颡鱼GnRHR与硬骨鱼类GnRHR的同源性较高,其与斑点叉尾鮰Ictalurus punctatus、斑马鱼Danio rerio、鲤Cyprinus carpio、银鲫Carassius auratus GnRHR氨基酸序列的一致性分别为96%、87%、83%和82%,与哺乳动物的一致性较低,为42%～44%;系统进化分析显示,黄颡鱼GnRHR与鲤、虹鳟等硬骨鱼类的GnRHR聚为GnRHRⅡB分支;实时定量PCR显示,黄颡鱼GnRHR mRNA主要在端脑、中脑、下丘脑、垂体和精巢中高表达,但在卵巢和其他组织中几乎不表达;通过CRISPR/Cas9基因编辑技术构建和筛选出了黄颡鱼GnRHR突变体,成功获得了各种不同的黄颡鱼GnRHR F0代突变体。研究表明,GnRHR可能参与调控黄颡鱼雄性发育,黄颡鱼GnRHR F0代突变体的获取为探索GnRHR的功能和机制提供了基础资料。

香港牡蛎淋巴因子基因tal的克隆与功能下载：82 浏览：510

黄亚楠1 周银银2 张跃环2 喻子牛2 李军2 潘英1 《水产研究进展》 2021年2期

摘要:

为了研究淋巴因子基因(T-cell acute lymphocytic leukemia，tal)在香港牡蛎中的免疫功能，实验采用cDNA末端快速扩增技术(rapid-amplification of cDNA ends，RACE)克隆了香港牡蛎tal的cDNA全长序列，命名为Chtal，该基因全长812bp，其中5非编码区17bp，3非编码区135bp，开放阅读框(open reading frame，ORF)660bp，编码219个氨基酸，相对分子质量25.11ku，理论等电点5.80。多序列比对和系统进化树结果显示，Chtal与长牡蛎、美洲牡蛎和海蜗牛tal同源性较高，证明了该基因是软体动物tal家族的一个成员。荧光定量PCR结果显示，Chtal在香港牡蛎血淋巴细胞中表达量最高，其次是心脏、鳃和消化腺。在溶藻弧菌和溶血性葡萄球菌刺激后，Chtal表达量显著上调，分别在24和12h达到最高水平，随着时间的增加该基因的表达量逐渐下降。亚细胞定位结果显示，Chtal在细胞核中表达。活体注射重组TAL蛋白能够显著提高淋巴细胞的数量，通过Edu增殖实验进一步证实了tal具有促进香港牡蛎血淋巴细胞再生的功能。本研究初步揭示了香港牡蛎tal参与了淋巴细胞再生，为深入研究该基因在牡蛎抗病中的功能提供了依据。

黄鳍鲷肌肉中弹性蛋白酶基因全长克隆及生物信息学下载：77 浏览：499

钟婵1 吴国平1 舒梅1 孙乐常2 曹敏杰2 《水产研究进展》 2021年1期

摘要:

研究表明弹性蛋白酶(elastase， Ela)参与调控嗜水气单胞菌引起的细菌性溃疡病，对控制鱼类养殖中免疫疾病有重要作用。本研究根据已报道脊椎动物的Elas基因序列设计特异性引物，通过RT-PCR和RACE技术克隆获得黄鳍鲷Ela基因(AlEla)cDNA序列全长，并对其进行生物信息学分析。结果显示，AlEla基因全长为946 bp，包含807 bp的开放阅读框，编码269个氨基酸，含有16个氨基酸信号肽的亲水性稳定膜外蛋白，定位于细胞外基质，具有3个O-糖基化和15个磷酸化的潜在位点。编码的成熟AlEla蛋白预测相对分子质量27 509 u，等电点为6.05。氨基酸序列同源性比对发现，AlEla与鲷和鲆的Elas2的同源性为84.76%～99.26%，处于系统进化树上同一分支，表明它们的亲缘性相近。AlEla具有Elas的保守结构，如Tryp-SPc结构域、丝氨酸蛋白酶催化三联体、保守的半胱氨酸残基以及在C端含有GDSGGPL序列等，揭示该酶有丝氨酸蛋白酶的催化活性。对AlEla蛋白的二级结构分析显示，α-螺旋、β-转角、β-折叠和无规则卷曲所占的比例分别为17.84%、7.06%、24.54%和50.56%。三级结构分析推测α-螺旋和β-折叠对于AlEla蛋白的空间构象可能有着重要作用。本研究从黄鳍鲷肌肉中成功克隆AlEla基因并分析其生物信息学特征，为后续研究AlEla参与调控鱼类免疫疾病的机制提供理论基础。

苏丹鱼甘露糖受体的基因克隆表达和免疫特性下载：63 浏览：503

何昕1 秦真东1 张凯1 梁日深1 杨森1 伍剑标2 赵丽娟1 林蠡1 《水产研究进展》 2020年6期

摘要:

为了解苏丹鱼MR(Lh MR)的结构特点及其在抗感染免疫反应中的作用，本研究克隆并分析了LhMR基因，采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测了LhMR在正常及柱状黄杆菌感染苏丹鱼组织中的表达。结果显示，LhMR开放阅读框4 296 bp，编码1 431个氨基酸(aa)。LhMR的氨基酸序列和分子结构与其他物种高度相似，胞外1个富含蓖麻类β型三叶草的结构域(RICIN)、1个纤连蛋白Ⅱ型结构域(FNⅡ)、8个串连的C型凝集素样结构域(CLECTs)、1个跨膜区和1个胞内区。通过qRT-PCR检测显示，LhMR在脾脏、体肾、心脏、脑、皮肤、肌肉、鳃、肝脏、后肠、前肠和中肠11种组织中均有表达，其中脾脏中表达量最高；经柱状黄杆菌感染苏丹鱼后，脾脏、肠、体肾和鳃中LhMR基因的相对表达量显著升高。通过免疫组织化学(IHC)检测发现，在脾脏、肾脏和鳃中的LhMR蛋白表达水平提高。通过苏木精-伊红染色病理组织切片表明，在体肾、肠、肝脏和鳃中均有不同程度的病变。体肾的肾小管有大量的血细胞浸润，上皮细胞发生坏死；肠壁变薄，组织大量弥散坏死；肝脏组织中有多个空泡；鳃小片肿胀、混乱、坏死和脱落。研究表明，LhMR在苏丹鱼感染柱状黄杆菌免疫反应中发挥重要作用，为苏丹鱼柱形病的防控提供新的参考。

刺参多功能表皮生长因子6(megf6)cDNA克隆及在肠再生过程中的表达分析下载：71 浏览：417

陈雷1,2 姚锋1 唐爽1 郭良勇3 王珊2 方蕾2 秦玉雪2 尹增强2 侯林1 《中国水产学报》 2020年4期

摘要:

为了探究刺参Apostichopus japonicus多功能表皮生长因子6(multiple epidermal growth factor 6)的生物学信息和功能,利用RACE技术克隆了体质量为(92.0±4.0)g的成体刺参megf6基因(Aj-megf6)cDNA全长序列,并分析了该基因的信息学特征及其在肠再生过程中表达水平的变化。结果表明:刺参megf6基因的cDNA序列全长为5665bp,共编码了1604个氨基酸,具有37个EGF样结构域;该基因编码蛋白的相对分子质量为172500,理论等电点为4.74,该蛋白具有信号肽,为分泌蛋白,属于亲水性、非跨膜蛋白,共有53个磷酸化位点,分别为23个Ser位点、12个Thr位点、18个Tyr位点;MEGF6氨基酸多序列比对发现,刺参MEGF6与其他物种的氨基酸序列一致性为38.59%～49.07%,其中与紫球海胆Strongylocentrotus purpuratus的一致性最高,为49.07%,其次为长棘海星Acanthaster planci(48.71%);基于MEGF6氨基酸序列的系统进化树分析显示,刺参与紫球海胆、长棘海星聚为一支,该结果符合刺参的分类和进化地位,MEGF家族成员间比对分析显示,MEGF家族成员间具有一定的分化;实时定量PCR (qPCR)结果显示,在刺参肠再生过程中megf6 mRNA表达量呈先升高后降低的趋势,其中再生6d时的表达量达到峰值,为对照组的126.47倍,再生18d时降至正常水平。研究表明,刺参megf6基因的表达与刺参肠管形态的变化趋势相一致,推断megf6可能在刺参肠再生过程中发挥重要作用。

罗非鱼湖病毒核蛋白的克隆表达、抗体制备及其组织分布下载：73 浏览：500

苏国茂秦真东李嘉波周萌莫金凤张凯梁日深吴灶和赵丽娟林蠡《水产研究进展》 2020年3期

摘要:

近年来罗非鱼湖病毒(TiLV)在多个国家流行，对世界罗非鱼养殖业造成严重威胁。中国是罗非鱼第一养殖大国，尽管我国大陆还没有TiLV的正式报道，鉴于吉富罗非鱼是我国重要的罗非鱼养殖品种，其对TiLV的感染特性研究具有重要意义。本实验采用TiLV对吉富罗非鱼进行人工感染，随后在肝脏组织中克隆和测定了TiLV第6片段基因。罗非鱼湖病毒第6片段基因cDNA全长1 044 bp，开放读码框(ORF)为954 bp，编码317个氨基酸，预测分子量为36.38 ku；5′非编码区(NCR)为19 bp，3′非编码区(NCR)为972 bp。系统进化树分析表明该蛋白属于TiLV核蛋白(NP)。随后在大肠杆菌中表达和提纯了GST融合NP蛋白，在新西兰大白兔上制备了多克隆抗体。通过酶联免疫吸附实验(ELISA)检测抗体效价为1∶51 200，且抗体可特异性识别感染组织中的病毒NP蛋白。对吉富罗非鱼不同组织进行苏木精—伊红(H.E)染色观察，发现肝脏组织坏死并形成合胞体，脾脏部分细胞出现空泡、坏死，含铁血黄素增多，头肾细胞坏死，鳃丝上皮细胞明显解离脱落，鳃小片黏连，脑组织细胞肿大。通过蛋白印迹法(WB)和免疫组化(IHC)对人工感染TiLV的吉富罗非鱼不同组织进行检测，结果显示，NP蛋白在肝脏、脑、体肾和头肾等组织中均有表达，以肝脏组织中表达量最高。为了解吉富罗非鱼对TiLV的免疫反应，通过实时荧光定量PCR (qRT-PCR)测定免疫因子TNF-α和TGF-β在主要免疫器官脾脏和头肾组织中的表达。研究表明，在感染早期(感染后12～24 h)，病毒可显著抑制TNF-α和TGF-β在脾脏和头肾中的表达，可能通过抑制宿主这些免疫因子来促进病毒自身早期的复制。本研究将为进一步解读TiLV的致病机理及其高效防控提供理论基础。

三疣梭子蟹C-型凝集素CTL5基因的克隆及在病原刺激下的免疫应答下载：51 浏览：395

阎德平1,2 吕建建3,2 题兴斌2 张文1,2 张云滨2 宋柳2 刘萍3,2 《中国水产学报》 2020年3期

摘要:

为明确三疣梭子蟹Portunus trituberculatus C-型凝集素CTL5的结构和功能,采用cDNA末端快速扩增(Rapid amplification of cDNA end,RACE)技术克隆获得三疣梭子蟹C-型凝集素CTL5基因(PtCTL5)的cDNA全长。结果表明:PtCTL5基因全长为1026bp,包含732bp的开放阅读框,编码了243个氨基酸组成的蛋白,相对分子质量为26000,为半乳糖结合型凝集素;Blast分析显示,PtCTL5氨基酸序列与克氏原螯虾Procambarus clarkia CTL的一致性最高,为41.84%;系统进化树分析显示,PtCTL5与已发表的三疣梭子蟹的另4种C-型凝集素亲缘关系较远;胚胎及幼体不同发育时期的定量分析表明,PtCTL5在溞状幼体Ⅲ期表达量最高,在胚胎发育的心跳期表达量最低;组织表达分析显示,PtCTL5在血细胞中的表达量最高,肝胰腺中次之;人工注射副溶血弧菌Vibrio parahemolyticus后,PtCTL5在血细胞和肝胰腺中的表达量均于72h时达到峰值;而注射对虾白斑综合征病毒(WSSV)感染后,PtCTL5在血细胞和肝胰腺中的表达量分别于72、12h达到峰值且显著高于对照组(P<0.05)。研究表明,C-型凝集素在三疣梭子蟹先天免疫中具有一定的功能,本研究结果可为进一步解析三疣梭子蟹免疫应答机制提供参考。

中国明对虾calcineurin B基因的克隆及其在竞争行为中作用的初探下载：73 浏览：471

孙犁1，2 卢霞2，3 孔杰2，3 孟宪红2，3 闫允君2，3 李波波1，2 仲伟鹏2 陈宝龙2，3 曹宝祥2，3 罗坤2，3 栾生2，3 《水产研究进展》 2020年3期

摘要:

中国明对虾在养殖中表现出较强的竞争行为，对其生长性能产生了较大的影响，然而，到目前为止其发生的分子机制尚不清楚。钙调神经磷酸酶（calcineurin，CN）是高度保守的Ca2+/钙调蛋白（calmodulin， CaM）依赖性丝氨酸/苏氨酸磷酸酶，由催化亚基（CNA）和调节亚基（CN-B）组成，是参与许多重要生理过程的多功能蛋白质。CNB在Ca2+/CaM的介导下主要在动物的中枢神经系统发挥重要作用。另外，前期通过比较转录组分析筛选出的与中国明对虾竞争行为相关的候选基因中包括CNB基因。为了进一步明确CNB在中国明对虾竞争过程中的作用，实验通过RACE技术克隆了中国明对虾CNB基因（FcCN-B）的全长cDNA序列，并利用Real-time PCR技术分析了其在高竞争能力组（HCG）和低竞争能力组（LCG）组间不同组织（神经节、心脏、胃、肝胰腺和肠）中的表达情况。结果显示，FcCN-B的cDNA全长序列为2 867 bp，包括95 bp的5′非编码区（UTR），540 bp的开放阅读框（ORF），和2 232 bp的3′UTR，其中ORF中具有4个保守的EF-hand Ca2+结合结构域。蛋白质同源性分析显示，FcCN-B的氨基酸序列与其他物种具有较高的同源性（78.8%～93.8%），其中最高的是中华绒螯蟹（93.8%）和黑腹果蝇（90.5%）；系统进化关系分析显示，脊椎动物和无脊椎动物分别独立为一支，且中国明对虾与中华绒螯蟹单独聚为一支，之后与黑腹果蝇聚类关系最近，提示FcCN-B在中国明对虾中可能具有与其在中华绒螯蟹和果蝇中相类似的功能。Real-time PCR定量结果显示，FcCN-B在HCG组的神经节中的表达极显著高于LCG组，而其在HCG组的心脏中的表达极显著低于LCG组。研究结果表明，calcineurin B基因在中国明对虾的竞争行为中可能发挥一定的作用，将为解析中国明对虾竞争行为的分子机制奠定重要的基础。

拟穴青蟹Cactus基因的cDNA克隆、序列及生物学功能下载：76 浏览：492

胡蕾1，2 邓恒为2 李晶晶2 刘姗姗2 何建国2 李海云1 翁少萍2 《水产研究进展》 2020年3期

摘要:

为获取拟穴青蟹Cactus基因cDNA全长、分析基本生物学信息，并初步探索其在病原物刺激下的免疫反应，实验采用RACE技术获得了拟穴青蟹Cactus(SpCactus)基因的cDNA全长序列，其cDNA全长为2 035 bp，开放阅读框(ORF)1 311 bp，编码436个氨基酸，分子量为46.01 ku。对蛋白理化性质进行预测发现，SpCactus为亲水性蛋白，等电点pI为4.91。经预测，SpCactus与其他物种的IκB蛋白具有相似的功能结构域。同源性比对结果显示，SpCactus与凡纳滨对虾和中国明对虾的Cactus蛋白同源性均高达62%，相似度为73%。系统进化树分析显示，SpCactus与甲壳动物聚为一支，与无脊椎动物聚为一大支。实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测发现，SpCactus基因在拟穴青蟹不同组织中均有表达，肌肉中的表达量最高，其次为心脏、眼柄、血液和鳃，肝胰腺中的表达量最低。LPS和金黄色葡萄球菌刺激均能显著诱导SpCactus基因的表达。本实验成功扩增了SpCactus基因全长，并进行了生物信息学分析、理化性质预测，初步探讨了其生物学功能，为进一步研究其在免疫反应中的生物学功能提供参考依据。

太平洋鳕抗菌肽Hepcidin基因克隆及体外表达研究下载：55 浏览：381

吴玲梅1 顾杰1 温智清2,3 贾鹏2,3 刘瑞婷1 蒋洁兰1 刘荭2,3 郑晓聪2,3 毛明光1 《中国水产学报》 2020年2期

摘要:

为揭示太平洋鳕Gadus macrocephalus抗菌肽Hepcidin(GmHep)的分子结构和表达特性,利用qPCR法对平均体质量为2.438kg鳕不同组织和发育早期的GmHep表达模式进行了探讨,分别构建了原核(pET-32a-GmHep)和真核(pEGFP-GmHep)表达载体,研究了GmHep的体外表达特点。结果表明:GmHep基因开放阅读框长为297bp,编码98个氨基酸,蛋白相对分子质量为10833.56,该肽N端具22个氨基酸残基的信号肽,成熟肽含有8个半胱氨酸残基、4个二硫键;氨基酸序列比对发现,GmHep与大西洋鳕Hepcidin同源性最高(93%),但与其他鱼类Hepcidin同源性较低(小于60%),预示其功能具有独特性;GmHep在肝脏中的表达量显著高于其他组织(P<0.05),且GmHep在5、10、30、37、40日龄仔稚鱼中均有表达(P<0.05);GmHep体外诱导表达优化条件为IPTG浓度0.01mmol/L、30℃、诱导4 h;GmHep在EPC细胞系中主要定位在细胞质中。研究表明,本研究成功构建了两种GmHep体外表达载体,确定GmHep为肝分泌型,且在太平洋鳕发育早期发挥一定作用。

中华鳖dazl基因克隆及在生殖细胞中的表达下载：90 浏览：510

唐舟凯1 张飘逸2 储张杰1 朱新平1，2 李伟2 吴栩灵2 徐红艳1，2 《水产研究进展》 2019年4期

摘要:

为探索龟鳖类生殖细胞的发育分化机制，实验通过特异性引物克隆了中华鳖dazl基因的cDNA片段，长1 007 bp，其中包括5′端非编码区197 bp，3′端非编码区33 bp，开放阅读框777 bp，编码258个氨基酸。氨基酸序列比对显示其与西部锦龟Dazl同源性最高，达96%；与小鼠Dazl同源性达75%。荧光定量PCR分析结果显示，中华鳖dazl mRNA主要在精巢和卵巢中表达，在体细胞组织中仅检测到微量表达。冰冻切片原位杂交结果显示，中华鳖dazl mRNA在生殖细胞中特异表达，且在不同时期的生殖细胞中呈动态表达模式。在精巢中，中华鳖dazl mRNA在初级和次级精母细胞中表达最强，在精原干细胞中表达水平次之，在精子细胞中未检测到信号；在卵巢中，中华鳖dazl mRNA信号在初级卵母细胞胞质中均匀分布且在最早期的初级卵母细胞中信号最强，随着卵母细胞的增大，信号逐渐聚集并逐渐减弱。研究表明，dazl基因可能对中华鳖两性生殖细胞的发生具有重要的调控作用。

黄条鰤PTEN基因克隆、组织分布及早期发育阶段的表达分析下载：77 浏览：513

孙冉冉1 史宝2 柳学周1,2 常亚青1 张言祥3 高全义3 徐永江2 王滨2 姜燕2 张正荣2 《中国水产学报》 2019年2期

摘要:

为探究PTEN在黄条鰤Seriola aureovittata生长发育过程中的分子作用机制,采用同源克隆和cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆了黄条鰤生长调控因子PTEN的cDNA全长序列,并采用实时荧光定量PCR(qPCR)技术分析了PTEN mRNA的时空表达特征。结果表明:黄条鰤PTEN cDNA序列全长为1575bp,开放阅读框为1287bp,编码428个氨基酸,PTEN编码的蛋白具有脊椎动物PTEN的共同特征,含有PTP(PTPc基序)和PTEN-C2结构域;序列比对分析发现,黄条鰤与高体鰤Seriola dumerili同源性较高,一致性达到了95%;通过系统进化树分析表明,黄条鰤与鲈形目及鲽形目鱼类聚为一支;经qPCR分析发现,黄条鰤PTEN mRNA在心脏中的相对表达量最高(P<0.05),其次在脾脏、头肾、肾脏、胃、肠、鳃中表达量较高,PTEN mRNA在多种组织中的广泛表达,暗示着其可能参与多种生理过程的调控;同时分析了PTEN mRNA在黄条鰤早期发育阶段(胚胎期、仔稚幼鱼期)中的时序表达特征,发现PTEN在早期胚胎发育中持续表达,从低囊胚时期(38hpf)表达量显著升高(P<0.05),初孵仔鱼时期相对表达量最高(P<0.05);在仔稚幼鱼时期,PTEN mRNA相对表达水平逐渐降低,35日龄表达量显著下降(P<0.05)并保持较低表达水平。研究表明,PTEN在胚胎及仔稚幼鱼发育过程中具有重要调节作用,本研究结果可为黄条鰤早期生长发育过程的调控机制研究及苗种培育提供数据资料。

西伯利亚鲟MHCⅡβ基因克隆、组织分布及细菌感染后的表达变化下载：83 浏览：512

田照辉徐绍刚胡红霞王巍董颖东天孙爱《中国水产学报》 2019年2期

摘要:

为研究鲟鱼主要组织相容性复合体（Major histocompatibility complex,MHC）基因的分子特征和表达,利用RACE技术克隆获得了西伯利亚鲟Acipernser baerii MHCⅡβ cDNA序列1443bp,包括开放阅读框（OFR）801bp,编码184个氨基酸。Blast分析显示,由MHCⅡβcDNA基因推导的氨基酸序列同其他物种的一致性为46%～83%,通过Smart站点分析,该序列具有SMART MHCⅡbeta结构域、SMART IGc1结构域和跨膜螺旋结构域;实时定量分析表明,正常情况下MHCⅡβ mRNA在西伯利亚鲟10种组织中均有表达,其中脾、头肾和血液中表达量较高,皮肤和肉中表达量极低（P<0.05）;感染维氏气单胞菌Aeromonas veronii 40h后,脾脏中MHCⅡβ mRNA的表达量显著低于未感染的对照组（P<0.05）,直至93 h时恢复至对照组水平且有显著性变化（P<0.05）。研究表明,MHCⅡβ基因参与了西伯利亚鲟的免疫反应。

HPA-1a、HPA-3a、HPA-5b抗体MAIPA定量检测方法的建立下载：95 浏览：507

李睿书凌冰陆萍《国际检验医学》 2018年2期

摘要:

目的分别建立针对人类血小板抗原（HPA）-1a、HPA-3a、HPA-5b 3种抗体的定量血小板（PLT）抗原单克隆抗体特异性免疫固定检测（MAIPA）方法。方法采用MAIPA方法检测不同浓度的标准或参比HPA-1a、HPA-3a、HPA-5b抗血清，优化实验条件，在检测范围内绘制线性曲线，并分别分析其敏感性、特异性、准确性和精密度。结果针对HPA-1a、HPA-3a、HPA-5b 3种抗体的MAIPA定量检测方法得到了优化，检测范围分别为0～4 IU、0～20 AU、0～20 AU，准确性（回收率）分别为96.20%103.10%、97.90%103.10%、100.20%106.10%。批内精密度[变异系数（CV）]分别为1.3%3.6%、2.7%5.2%和4.7%5.3%，批间精密度（CV）分别为4.0%5.6%、4.4%5.9%和3.2%6.3%，检测人源抗体抗A、抗B、抗I、抗P均无明显阳性，具有良好的特异性。结论建立的针对HPA-1a、HPA-3a、HPA-5b抗体的MAIPA定量检测体系均具有较高的敏感度、特异度、准确度和精密度，对于临床相关疾病的诊断和PLT安全输注具有重要的应用价值。

剑尾鱼趋化因子CCL4和CCL19基因的克隆及嗜水气单胞菌感染对其组织表达的影响下载：84 浏览：521

朱成科1 王建1 陈灵涵1 周朝伟1 雷骆1 邓星星1 刘春2 郑宗林1 《水产研究进展》 2018年5期

摘要:

趋化因子是一类能够吸引白细胞移行到感染部位的低分子量(8～10 ku)蛋白质，在炎症反应、非特异性免疫反应中具有重要作用。实验克隆了剑尾鱼2个趋化因子基因(CCL4、CCL19)c DNA序列，运用荧光定量PCR技术检测其在健康组织和嗜水气单胞菌感染后肝、脾中的表达情况。结果显示，剑尾鱼CCL4和CCL19开放阅读框长度分别为294和333 bp，分别编码97和110个氨基酸，推导氨基酸序列均含有趋化因子CC家族标志性的4个半胱氨酸残基，与其他物种尼罗罗非鱼、鼠、狗、人、鸡的氨基酸序列相似性比较，CCL4相似度分别为71.1%、33%、33%、31%、23.5%；CCL19相似度分别为62%、26.9%、24.5%、26.6%、27.8%。在检测的健康剑尾鱼8个组织中，CCL4和CCL19均有表达，其中CCL4和CCL19均在脾脏中表达量最高；CCL4在肌肉和肠中表达量较低，而CCL19则在心脏中表达量较低。经嗜水气单胞菌感染后，CCL4在剑尾鱼头肾中12 h表达量达到最高，在肝脏中24 h表达量最高；CCL19在头肾和肝脏中均在24 h时表达量最高。研究表明，趋化因子CCL4和CCL19可能参与剑尾鱼机体免疫调节反应，在抗嗜水气单胞菌感染过程中发挥了重要作用。

新加坡石斑鱼虹彩病毒ORF39L基因克隆、表达及抗体的制备下载：43 浏览：479

张红莲1 夏立群2 秦启伟3 《中国水产学报》 2018年3期

摘要:

为研究新加坡石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus,SGIV)核心基因ORF39L在病毒侵染过程中的作用,制备了SGIV ORF39L表达蛋白的抗体;通过生物信息学软件预测SGIV ORF39L的抗原表位基因,并以所选抗原表位基因片段39Ag1和39Ag2构建原核表达质粒pET32a-39Ag1和pET32a-39Ag2;将质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达融合蛋白pET32a-VP39Ag1和pET32a-VP39Ag2;用所得融合蛋白分别免疫小鼠,获得了高效特异抗体39Ab1和39Ab2;利用制备的抗体进行间接免疫荧光试验,结果显示,VP39参与了SGIV的装配。本研究结果为进一步研究ORF39L基因在SGIV感染过程中的作用机制提供了数据资料。

栀子苷单克隆抗体的制备与鉴定下载：68 浏览：507

张海霞1 尹湘君1 刘姝伶1 程发峰1 王庆国1 于才2 魏玮3 王雪茜1 《中医研究杂志》 2019年4期

摘要:

目的:制备特异性的栀子苷(Geniposide,GEN)单克隆抗体。方法:采用高碘酸钠氧化法合成栀子苷免疫抗原,通过对BALB/c小鼠进行免疫;对血清进行检测阳性后,取上述免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0-Ag14按10∶1的比例融合;用间接竞争ELISA法和有限稀释法进行单克隆杂交瘤细胞的筛选;用阳性细胞株诱导制备腹水抗体;用辛酸硫酸铵法纯化抗体,并进行交叉反应检测。选择血清效价高且敏感性好的小鼠,采用杂交瘤细胞技术进行细胞融合,筛选分泌栀子苷单克隆抗体的杂交瘤细胞株;采用体内诱生腹水法制备栀子苷单克隆抗体,并通过正辛酸纯化的方法纯化腹水中抗体蛋白,采用SDS-PAGE法对抗体蛋白的纯化纯度进行检测。结果:获得了能分泌抗栀子苷单克隆抗体稳定的杂交瘤细胞株。SDS-PAGE结果说明经过纯化腹水中大量的杂蛋白能够被除去,获得的栀子单克隆抗体纯度较高,纯化后腹水中抗体效价与纯化前比均为60 000∶1左右。结论:成功获得了能分泌栀子苷单克隆抗体稳定的杂交瘤细胞株,特异性、灵敏度都比较高,为样品中的栀子苷快速微量检测及免疫亲和色谱柱的制备奠定了基础。

单克隆抗体制备之细胞融合虚拟仿真实验的设计与实践下载：145 浏览：819

范丽颖《建模与系统仿真》 2024年12期

摘要:

为了强化本科教育教学的数字化建设，探究在实体实验的基础上，构建与传统实验课程功能互补、内容拓展的细胞生物学虚拟仿真实验教学模式，选取了单克隆抗体制备过程中的细胞融合作为虚拟实验内容，设计了4个模块20个实验操作步骤，实验部分包括练习模式和考核模式，完成实验操作考核后会自动生成学生的每一步骤的得分和总成绩考核报告。该实验在生物工程、生物技术 3年级本科生试行虚实结合实验教学模式，线上与线下教学有机结合，有效提高了学生的自主学习兴趣、思维能力和实践能力，有利于提升人才培养质量和教学效果。

缢蛏生长因子受体结合蛋白2基因克隆、时空表达及SNP筛查下载：52 浏览：434

赵家熙1 崔宝月2 董迎辉1 姚韩韩1 林志华1 《海洋研究》 2018年5期

摘要:

为了探索生长因子受体结合蛋白2（GRB2）在缢蛏生长发育中的作用,本实验基于缢蛏转录组文库,利用SMART RACE技术克隆缢蛏GRB2（Sc-GRB2）基因的cDNA全长序列,分析其在不同组织和发育时期的表达差异,并在外显子中进行了SNP位点筛选。结果表明,Sc-GRB2基因cDNA全长1 223bp,开放阅读框711bp,编码236个氨基酸;氨基酸序列比对发现,缢蛏与文蛤、泥蚶等双壳贝类同源性较高（64%、59%）,而与其他物种的同源性为45%58%,表明GRB2基因比较保守;不同组织的荧光定量PCR（qRT-PCR）结果显示,Sc-GRB2基因在缢蛏7个组织中均有表达,其中足中的表达量极显著地高于其他6个组织（P<0.01）;在8个发育时期的表达差异分析发现,该基因在稚贝期表达量极显著地高于其他7个时期（P<0.01）。SNP位点筛选结果表明,在Sc-GRB2基因的外显子区域共发现11个SNP位点。

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