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罗非鱼湖病毒核蛋白的克隆表达、抗体制备及其组织分布 下载：73 浏览：500

苏国茂 秦真东 李嘉波 周萌 莫金凤 张凯 梁日深 吴灶和 赵丽娟 林蠡 《水产研究进展》 2020年3期

摘要:
近年来罗非鱼湖病毒(TiLV)在多个国家流行，对世界罗非鱼养殖业造成严重威胁。中国是罗非鱼第一养殖大国，尽管我国大陆还没有TiLV的正式报道，鉴于吉富罗非鱼是我国重要的罗非鱼养殖品种，其对TiLV的感染特性研究具有重要意义。本实验采用TiLV对吉富罗非鱼进行人工感染，随后在肝脏组织中克隆和测定了TiLV第6片段基因。罗非鱼湖病毒第6片段基因cDNA全长1 044 bp，开放读码框(ORF)为954 bp，编码317个氨基酸，预测分子量为36.38 ku；5′非编码区(NCR)为19 bp，3′非编码区(NCR)为972 bp。系统进化树分析表明该蛋白属于TiLV核蛋白(NP)。随后在大肠杆菌中表达和提纯了GST融合NP蛋白，在新西兰大白兔上制备了多克隆抗体。通过酶联免疫吸附实验(ELISA)检测抗体效价为1∶51 200，且抗体可特异性识别感染组织中的病毒NP蛋白。对吉富罗非鱼不同组织进行苏木精—伊红(H.E)染色观察，发现肝脏组织坏死并形成合胞体，脾脏部分细胞出现空泡、坏死，含铁血黄素增多，头肾细胞坏死，鳃丝上皮细胞明显解离脱落，鳃小片黏连，脑组织细胞肿大。通过蛋白印迹法(WB)和免疫组化(IHC)对人工感染TiLV的吉富罗非鱼不同组织进行检测，结果显示，NP蛋白在肝脏、脑、体肾和头肾等组织中均有表达，以肝脏组织中表达量最高。为了解吉富罗非鱼对TiLV的免疫反应，通过实时荧光定量PCR (qRT-PCR)测定免疫因子TNF-α和TGF-β在主要免疫器官脾脏和头肾组织中的表达。研究表明，在感染早期(感染后12～24 h)，病毒可显著抑制TNF-α和TGF-β在脾脏和头肾中的表达，可能通过抑制宿主这些免疫因子来促进病毒自身早期的复制。本研究将为进一步解读TiLV的致病机理及其高效防控提供理论基础。

庞氏安胎汤对先兆流产大鼠血清免疫因子及激素水平的影响 下载：82 浏览：530

马丽亚1 张大伟1 张颖1 庞玉琴1 王磊2 赵君玫2 霍磊2 李宾玲3 杜玉洁2 《当代中医药》 2019年3期

摘要:
目的探讨庞氏安胎汤治疗先兆流产的可能作用机制。方法 60只孕1天大鼠随机分为正常组、模型组、地屈孕酮组和庞氏安胎汤(简称安胎汤)高、中、低剂量组,每组10只。安胎汤高、中、低剂量组在孕1～12天分别灌胃安胎汤89. 6、44. 8、22. 4 g/(kg·d),地屈孕酮组给予地屈孕酮片溶液3. 02 mg/(kg·d),每日1次。孕12天,除正常组外其余各组一次性灌胃米非司酮片溶液3. 75 mg/kg建立先兆流产大鼠模型。各组大鼠孕13天检测血清中γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素4 (IL-4)、白细胞介素6 (IL-6)、白细胞介素10 (IL-10)以及血清雌二醇、孕激素、β人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)水平。结果与正常组比较,模型组大鼠血清IFN-γ、TNF-α、IL-2水平升高,IL-4、IL-6、IL-10水平降低,血清雌二醇、孕激素、β-HCG水平亦降低(P <0. 05)。与模型组比较,安胎汤中、高剂量组IFN-γ、IL-2水平降低,IL-4水平升高(P <0. 05);安胎汤中、低剂量组TNF-α水平降低,IL-6、IL-10水平升高(P <0. 05);各给药组大鼠血清雌二醇、β-HCG和孕激素水平均升高(P <0. 05)。安胎汤中剂量组血清中雌二醇、β-HCG和孕激素水平高于安胎汤低剂量组、地屈孕酮组(P <0. 05)。结论安胎汤可调节先兆流产大鼠免疫因子,使Th1/Th2值向Th2偏移,提高激素水平,从而达到保胎的目的。
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