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维拉帕米通过调节Bcl-2表达对胃癌细胞株耐阿霉素的影响 下载：72 浏览：378

滕小路1 刘淼2 张腾跃2 黄金2 王成2 杨国红2 范平生2 《肿瘤研究》 2018年12期

摘要:
[目的]探讨Bcl-2在维拉帕米逆转胃癌阿霉素化疗耐药中的作用及初步机制研究。[方法 ]MTT法检测维拉帕米逆转胃癌细胞系(SGC-7901、BGC-823、AGS、HGC-27)对3种化疗药物(氟尿嘧啶、阿霉素、顺铂)的耐药能力；流式细胞仪Annexin V-FITC/PI法检测维拉帕米对阿霉素作用下的胃癌细胞系(SGC-7901、HGC-27)凋亡水平的影响。Western blotting检测Bcl-2蛋白表达水平。[结果 ]SGC-7901细胞系在单药阿霉素组和阿霉素联合维拉帕米组中的半数抑制浓度(IC50)分别为1.51±0.12μg/ml、0.22±0.01μg/ml，两组差异有统计学意义(P<0.05)；HGC-27细胞中分别为1.24±0.19μg/ml、1.06±0.08μg/ml，两组差异无统计学意义(P>0.05)。凋亡实验表明在SGC-7901细胞系中，单药阿霉素组中的细胞凋亡率为36.76%，阿霉素联合维拉帕米组为61.10%，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。HGC-27细胞系中，阿霉素组细胞凋亡率19.79%，阿霉素联合维拉帕米组为21.92%，两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。SGC-7901细胞中维拉帕米促进ADM组胃癌细胞凋亡指数明显高于HGC-27(P<0.05)。q RT-PCR实验显示Bcl-2可能介导维拉帕米促进胃癌细胞凋亡；Western blotting结果显示在SGC-7901细胞中，阿霉素联合维拉帕米组Bcl-2的表达明显低于单药阿霉素组，与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)；而HGC-27中2组间差异无统计学意义。[结论]维拉帕米通过下调Bcl-2表达增强维拉帕米逆转胃癌细胞化疗耐受的能力，并促进胃癌细胞凋亡。

基于海安县的水功能区达标整治研究 下载：46 浏览：76

辛朋磊1 刘淼2 王丽2 《水资源研究进展》 2018年12期

摘要:
本文以海安县为例,进行了水功能区水质达标情况分析,对不达标水功能区的污染源展开调查,结果发现:水功能区不达标的主要成因是受上游来水影响、工业点源污染和农业种植、城镇生活、农村生产以及畜禽养殖等面源污染。为优化产业结构调整与空间布局、加强生活污染源整治、强化农业面源污染治理、推进工业污染源治理等,提出了水功能区达标整治的措施。

传染性胰脏坏死病毒VP2蛋白酵母表面展示系统的建立 下载：90 浏览：505

贺文斌1,2,3 徐黎明2 赵景壮2 刘淼2 任广明2 卢彤岩2 尹家胜2 《中国水产学报》 2019年6期

摘要:
为了将传染性胰脏坏死病毒(Infectious pancreatic necrosis virous,IPNV)的主要保护性抗原及IPNV检测和疫苗开发的主要靶基因——VP2蛋白展示于酵母细胞表面,本研究中基于IPNV VP2基因序列设计引物,以IPNV ChRtm213的RNA为模板进行PCR扩增,然后将扩增产物连接到酵母表面展示载体pYD1上构建了重组质粒pYD1-VP2,将重组质粒转化至酵母EBY100感受态细胞中,得到含有重组质粒的酵母菌EBY100/pYD1-VP2,再向EBY100/pYD1-VP2中加入半乳糖进行VP2蛋白的诱导表达,并采用蛋白免疫印迹和细胞免疫荧光技术对VP2蛋白的酵母表面展示情况进行了分析。结果表明:经半乳糖诱导后VP2蛋白在酵母细胞表面获得了成功表达;细胞免疫荧光分析显示,重组酵母诱导表达后出现特异性绿色荧光,并且在一定时间内荧光强度与诱导时间成正相关,诱导24、36、48h组及对照组(48h)各组之间荧光酵母比例有显著性差异(P<0.05)。研究表明,IPNV VP2蛋白已经被酵母细胞高效表达并且成功展示于酵母细胞表面,本研究结果可为IPNV口服活载体疫苗的研制奠定基础。
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