文章-世纪中文出版社

海那尔·乌拉孜巴依1,2 叶尔那扎尔·努尔吐热1 陈小玲2 张富春1 张茂祥2 《生物技术研究》 2020年11期

摘要:

克隆人NR2F2(Nuclear Receptor subfamily 2,group F,member 2)基因并分析其生物学特性。[方法]根据NCBI数据库提供的人NR2F2基因序列设计其特异性引物,通过PCR扩增目的基因,并将其连接到p ET-28a载体上,然后进行酶切鉴定与DNA测序来确定人NR2F2基因克隆的正确性,再利用生物信息学在线工具分析人NR2F2蛋白的生物学特性。[结果]酶切鉴定与DNA测序结果表明人NR2F2基因开放阅读框为786 bp,编码261个氨基酸残基,分子量为29 162.79 Da,p I为5.96。NR2F2蛋白是主要位于细胞质和细胞核中的亲水性蛋白,不含跨膜结构域,无信号肽,其二级结构由α螺旋、无规则卷曲和延伸链构成,并且三级结构与二级结构预测结果一致。[结论]克隆获得人NR2F2基因,其编码的蛋白质属于类固醇/甲状腺激素受体超家族,α螺旋和无规则卷曲为二级结构中最主要的结构元件。GO注释分析表明,人NR2F2属于转录因子,参与序列特异性DNA结合、基因转录、RNA的生物合成、RNA代谢等过程。

萤火虫Luc基因的克隆及生物信息学分析下载：81 浏览：496

许勇张忠东李静王红萍王娟胡倩赵娜娜《生物技术研究》 2020年11期

摘要:

克隆野生型虫荧光素酶(luciferase)基因(Luc)全长序列并对其进行生物信息学分析。[方法]以虫荧光素酶报告栽体p XP2 DNA为模板,应用PCR技术,获得萤火虫Luc基因目标条带并克隆到p GEM-T-Easy载体,利用CD search、Prot Param、Prot Scale和SOMPA等11种预测软件对其保守区域、一级结构、理化性质、空间结构及活性区域等进行预测分析。[结果]该酶由551个氨基酸残基组成,属于可溶性亲水蛋白。其二级结构主要由无规卷曲和α-螺旋组成。三级结构以6q2m.1的A链为模板进行同源建模,其活性区域由125个氨基酸残基构成,面积和体积分别为2 483.879?2和1 834.454?3。在该蛋白质的活性区域之外,筛选出38个具备引入二硫键条件的潜在位点。[结论]成功克隆了Luc基因,并对野生型虫荧光素酶进行了生物信息学分析预测,为进一步过定点突变提高虫荧光素酶的热稳定性奠定了理论基础。

软枣猕猴桃ICE1基因克隆与生物信息学分析下载：79 浏览：482

张庆田1 范书田2 李昌禹2 艾军2 秦红艳2 《生物技术研究》 2019年5期

摘要:

为研究软枣猕猴桃ICE1基因的生物学功能及抗寒分子机制奠定基础。[方法]以4℃低温处理24 h的软枣猕猴桃(Actinidia arguta Planch) c DNA为模板,通过反转录PCR技术克隆ICE1基因。[结果]该基因c DNA长1524 bp,可编码507个氨基酸。生物信息学分析显示ICE1基因是编码MYC2型的b HLH转录因子,编码蛋白是定位于细胞核的非跨膜亲水蛋白。推导的氨基酸序列与中华猕猴桃(Actinidia chinensis var. chinensis)和山葡萄(Vitis amurensis) ICE1存在着较高的同源性。[结论]成功克隆到软枣猕猴桃抗寒转录因子命名为AaICE1。

黄瓜Cu/Zn-SOD基因克隆及可溶性表达和纯化下载：81 浏览：494

陈梦瑶冯超越南天豪陈星辉冯雨彤朱振洪《生物技术研究》 2019年6期

摘要:

克隆黄瓜Cu/Zn-SOD基因,并利用大肠杆菌进行可溶性表达、纯化及活性测定。[方法]采用Trizol法提取黄瓜表皮的总RNA,然后设计特异性引物,通过RT-PCR技术克隆获得黄瓜Cu/Zn-SOD基因。该基因与p GEX2T载体相连后,转化大肠杆菌BL21(DE3),摸索可溶性表达方法。利用GST亲和层析方法纯化目标蛋白,SOD酶活性测定采用邻苯三酚法。[结果]成功地克隆了全长为459 bp的黄瓜Cu/Zn-SOD基因,编码152个氨基酸。Protein Blast分析表明其结构域中分别包含Cu2+、Zn2+结合位点,为典型的Cu/Zn-SOD酶。目标蛋白可溶性表达条件是16℃、0. 1 mmol/L IPTG诱导20 h。SDS-PAGE分析表明GST亲和层析成功地获得重组黄瓜Cu/Zn-SOD。活性测定表明两次纯化的蛋白样品SOD酶活力分别为2 328. 9 U/m L、2 144. 7 U/m L。[结论]从黄瓜表皮中克隆获得Cu/Zn-SOD基因,该基因在大肠杆菌系统中获得可溶性表达,纯化后的重组蛋白具有较高的SOD酶活力。

单增李斯特菌lmo2192基因克隆与表达下载：81 浏览：481

李红欢马勋钱凌霄李庆辉刘扬扬《生物技术研究》 2019年3期

摘要:

对单增李斯特菌新疆绵羊脑炎临床分离株LM90SB2的lmo2192基因进行克隆及原核表达。[方法]利用PCR方法扩增lmo2192基因,连接p MD19-T载体进行克隆,筛选阳性菌进行测序比对。构建重组表达质粒p ET32a-2192,将其转入大肠杆菌感受态细胞,经诱导表达,利用SDS-PAGE与Western Blotting鉴定重组蛋白。[结果]扩增lmo2192基因序列长度为969 bp,与预期一致。该基因在大肠杆菌中大量表达,经SDS-PAGE和Western Blotting鉴定分析该产物为56 k Da左右的融合重组蛋白,与预期大小一致。[结论]成功克隆lmo2192基因,并获得大量表达,为进一步研究该基因功能奠定理论基础。

拟南芥肌醇半乳糖苷合成酶与棉子糖合成酶的体外催化活性比较下载：82 浏览：19

郑小芬李晓霞黄金兰余方回刘妙玲范芳黄迎娣张玲周英彪《生物技术研究》 2019年1期

摘要:

基因克隆及原核表达纯化后比较拟南芥的2个肌醇半乳糖苷合成酶及2个棉子糖合成酶的体外催化活性,为微生物法或酶法合成棉子糖尊定基础。[方法]RT-PCR克隆拟南芥的肌醇半乳糖苷合成酶(GolS1及GolS3)与棉子糖合成酶(RafS1及RafS5)的基因,分别构建原核表达菌株,诱导表达纯化获得酶,电泳检测及蛋白定量后进行体外酶催化反应,HPLC分析产物。[结果]克隆到GolS1与GolS3及RafS1与RafS5的基因,原核表纯化获得纯酶,以反应体系中目标产物生成速率衡量,GolS1与GolS3催化速率分别为0.51和0.28mmol/(mg·min),RafS1与RafS5的催化速率分别为0.45和0.21mmol/(mg·min)。[结论]拟南芥的肌醇半乳糖苷合成酶(GolS1及GolS3)与棉子糖合成酶(RafS1及RafS5)基因经异源表达后具有良好酶活,其中GolS1酶活是GolS3的1.82倍,RafS1酶活是RafS5的2.14倍。

尾叶桉GLU4无性系F5H基因的克隆表达及序列分析下载：82 浏览：493

肖玉菲1 刘海龙1 刘雄盛1 晏巢2 陈博雯1 《生物技术研究》 2018年11期

摘要:

克隆尾叶桉(Eucalyptus urophylla)GLU4中F5H基因全长,并对其进行序列和表达模式分析。[方法]根据NCBI公布的F5H基因保守序列设计引物,以尾叶桉GLU4茎部组织为试验材料克隆其g DNA和c DNA片段,利用荧光定量PCR分析其在植株不同组织中的表达模式。[结果]该基因g DNA长2 358 bp,c DNA长1 610 bp,含有2个外显子、1个内含子。开放阅读框编码529个氨基酸,Eu F5H编码的蛋白为一个带负电荷、存在跨膜结构、定位在内质网起始分泌途径中的蛋白质,二级结构包含典型的的α-螺旋和β-折叠,根据三级结构推测其可能具有羟化酶活性。Eu F5H蛋白与蓝桉亲缘关系较近,Eu F5H在不同组织中表达水平差异显著,其中半木质化茎中表达水平相对最高。[结论]成功获得了尾叶桉GLU4木质素合成酶基因F5H的全长序列。

沙眼衣原体LpxA基因克隆及生物信息学分析下载：86 浏览：505

李德坤1 雷蕾2 李冉辉3 《生物技术研究》 2018年3期

摘要:

克隆沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis)LpxA基因并分析其生物学特性。[方法]根据Ct LpxA基因序列设计特异性引物,利用PCR扩增LpxA基因,并把LpxA基因连接到p MD18-T载体,挑取阳性克隆进行PCR和DNA测序验证。最后使用生物信息学软件分析LpxA蛋白的生物学性质。[结果]从Ct基因组中PCR扩增得到840 bp的Ct LpxA基因,该基因共编码280个氨基酸。LpxA蛋白无信号肽,定位在细菌细胞质。二级结构预测得知α-螺旋占19.6%,延伸链占32.8%,β-转角为11.4%,无规卷曲为36%。三级结构预测得知3个相同的LpxA分子组成同源三聚体。预测得知LpxA蛋白有11个B细胞表位。[结论]克隆得到Ct LpxA基因,并预测了其结构和功能。

洋葱AcSVP基因的克隆及其表达分析下载：92 浏览：521

陈微1 惠林冲1 李威亚1 杨海峰1 郇国磊2 何林玉1 缪美华1 陈振泰1 潘美红1 《农业学报》 2020年10期

摘要:

为了研究SVP(SHORT VEGETATIVE PHASE)基因在洋葱花芽分化和发育中的作用,本研究以洋葱"70-1"为试材,克隆得到了1个SVP同源基因,命名为AcSVP,并采用荧光定量PCR对该基因的表达模式进行了分析,结果表明:AcSVP包含1个741 bp的开放阅读框,编码246个氨基酸。氨基酸同源比对结果显示,AcSVP的氨基酸序列与水仙的相似性较高。系统进化结果也显示洋葱的AcSVP与水仙的亲缘关系较近。实时荧光定量分析表明,AcSVP在洋葱未开放的花蕾中表达量最高,在花薹抽出前的叶中次之,在花中的表达量最低。根据以上研究结果推测,AcSVP可能参与调控洋葱的花芽分化。

黄花苜蓿Mfβ-Hex1基因的克隆及生物信息学分析下载：88 浏览：495

徐文艺赵彦包健王俊杰《农业学报》 2019年7期

摘要:

为了鉴定黄花苜蓿耐牧性的相关基因,采用PCR技术对黄花苜蓿Mfβ-Hex1基因进行克隆,并利用生物信息学软件分析了基因的序列信息。结果表明:黄花苜蓿β-氨基己糖苷酶(Mfβ-Hex1)基因全长786 bp,包含675 bp的开放阅读框,编码224个氨基酸,主要由谷氨酸、缬氨酸、亮氨酸等组成。与豆科植物蒺藜苜蓿和鹰嘴豆中的β-Hex1基因具有高度同源性,与蒺藜苜蓿聚为一支。Mfβ-Hex1基因属于GH20家族成员,不具有跨膜区域,其二级结构以α-螺旋为主,亚细胞定位主要存在于细胞质中,该研究为深入研究Mfβ-Hex1基因的功能奠定了基础。

低温胁迫对凡纳滨对虾胸腺肽基因功能的影响下载：13 浏览：247

张毅1 靳奎峰1 李文慧1 杨颖璨1 来辉1,2 刘文广3 《中国水产学报》 2024年5期

摘要:

低温是影响凡纳滨对虾养殖的重要因素。为探明凡纳滨对虾在应对低温胁迫下的分子机制，通过RACE方法对凡纳滨对虾胸腺肽(Lvthy)基因进行克隆，并对其序列特征进行分析，并通过荧光定量PCR对其组织分布表达及低温胁迫下的表达谱进行分析，最后通过siRNA干扰的方法对其表达量进行敲降，对其在凡纳滨对虾低温胁迫下的功能进行验证。Lvthy基因cDNA全长1765bp,开放阅读框长度729bp,编码242个氨基酸。组织分布分析结果显示，Lvthy基因在对虾不同组织中均有表达，在胃组织中表达量最高，其次是在肠道、心脏和脑组织。低温胁迫试验结果显示：Lvthy基因在低温刺激1h后表达量开始上调；3h后表达量达到最高，是正常状态下的2.7倍；随后Lvthy基因表达量开始下降。RNAi干扰试验结果显示，敲降Lvthy基因后，凡纳滨对虾在低温胁迫下的存活率仅为31%,显著低于对照组存活率(83%)。试验结果表明，胸腺肽在凡纳滨对虾响应低温胁迫的生理过程中发挥重要的作用，本试验结果可为胸腺肽在甲壳动物应对低温胁迫下的适应机制研究奠定基础。

尼罗罗非鱼高迁移率族蛋白4(TOX4)基因克隆及其在细菌感染过程中的表达特征下载：51 浏览：278

江栢坚1,2 张志强1,2 巫祎琴1,2 于劼豪1,2 黄瑜1,2 简纪常1,2 《中国水产学报》 2023年1期

摘要:

为了解析与胸腺细胞选择相关的高迁移率族蛋白4(tox high mobility group box family member 4,TOX4)在尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)响应无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)感染过程中的功能，利用聚合酶链式反应(PCR)克隆和鉴定尼罗罗非鱼TOX4基因(GenBank登录号：XP003458812)的开放阅读框(open reading frame, ORF)序列，对推导的TOX4氨基酸序列进行生物信息学分析，分析其亚细胞定位特征，以及在尼罗罗非鱼头肾淋巴细胞亚群的分布特征，并利用荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析TOX4基因在健康鱼各组织及响应无乳链球菌感染过程中的表达模式。结果表明：尼罗罗非鱼TOX4基因的ORF全长为2 004bp,编码667个氨基酸，预测TOX4蛋白的相对分子质量为69 060,理论等电点为4.69,无信号肽序列及跨膜结构，具有一个HMG保守结构域；亚细胞定位结果显示，TOX4蛋白主要表达于细胞核中；多序列比对及系统进化分析均显示，尼罗罗非鱼与斑马拟丽鱼(Maylandia zebra) TOX4氨基酸序列的同源性最高；qRT-PCR分析显示，TOX4基因在健康尼罗罗非鱼各组织中均有表达，且在血液中表达量最高；单细胞转录组数据分析显示，TOX4基因主要在尼罗罗非鱼非特异性细胞毒性细胞(nonspecific cytotoxic cell, NCC)和巨噬细胞(macrophage, Mφ)中表达；经无乳链球菌感染后，尼罗罗非鱼脑、头肾、肠道和脾脏中TOX4基因的表达量显著上调，并在感染后12h(脑、头肾、肠道)和48h(脾脏)达到峰值。研究表明，TOX4可能参与尼罗罗非鱼响应细菌感染的免疫应答过程。

珍珠龙胆石斑鱼紧密连接蛋白基因Claudin-3与Claudin-12的克隆及精氨酸干预下的肠道表达下载：57 浏览：326

李广1 崔晓1 姚春凤2 陈东鸿1 何凯1 陈冠霖1 韩煜轩1 杨奇慧1,3 迟淑艳1,3 《中国水产学报》 2022年2期

摘要:

为评价Claudin-3与Claudin-12基因在珍珠龙胆石斑鱼Epinephelus fuscoguttatus♀×E.lanceolatus♂生长和肠道黏膜屏障中的作用，通过同源克隆及RACE PCR技术克隆珍珠龙胆石斑鱼Claudin-3和Claudin-12基因的全长，采用qRT-PCR技术分析Claudin-3和Claudin-12基因在珍珠龙胆石斑鱼脑、鳃、皮肤、肌肉、肝脏、胃、前肠、中肠、后肠、头肾、体肾、脾和心脏13种组织的表达情况，并通过饲料精氨酸干预评估上述两个基因在肠道的表达情况。结果表明：Claudin-3 cDNA全长序列为1 544bp,包括一个153bp的5′末端非翻译区(UTR)和743bp的3′UTR,Claudin-3的开放阅读框(ORF)为648bp,可编码215个氨基酸的蛋白，预测该蛋白相对分子质量为23 100;Claudin-12 cDNA全长序列为1 236bp,包括一个118bp的5′UTR和92bp的3′UTR,Claudin-12的ORF为1 026 bp,可编码341个氨基酸的蛋白，预测该蛋白相对分子质量为37 400;系统进化树和氨基酸序列比对显示，珍珠龙胆石斑鱼Claudin-3与斜带石斑鱼亲缘关系最近，同源性最高，一致性高达98.14%,珍珠龙胆石斑鱼Claudin-12与䲟的亲缘关系最近，同源性最高，一致性高达91.75%;Claudin-3和Claudin-12基因在被检测的13种组织中均有表达，Claudin-3 mRNA在鳃和体肾中表达量最高(P<0.05),其次是中肠和肝脏，Claudin-12在脑中表达量最高(P<0.05),其次是中肠和后肠；饲料中精氨酸含量为3.06%时，珍珠龙胆石斑鱼增重率及肠道Claudin-3和Claudin-12基因表达水平显著高于1.96%和3.74%精氨酸组(P<0.05)。研究表明，Claudin-3和Claudin-12基因表达在适宜精氨酸水平的影响下上调，可维护石斑鱼肠道黏膜屏障完整，并促进鱼体生长。

香港牡蛎淋巴因子基因tal的克隆与功能下载：82 浏览：504

黄亚楠1 周银银2 张跃环2 喻子牛2 李军2 潘英1 《水产研究进展》 2021年2期

摘要:

为了研究淋巴因子基因(T-cell acute lymphocytic leukemia，tal)在香港牡蛎中的免疫功能，实验采用cDNA末端快速扩增技术(rapid-amplification of cDNA ends，RACE)克隆了香港牡蛎tal的cDNA全长序列，命名为Chtal，该基因全长812bp，其中5非编码区17bp，3非编码区135bp，开放阅读框(open reading frame，ORF)660bp，编码219个氨基酸，相对分子质量25.11ku，理论等电点5.80。多序列比对和系统进化树结果显示，Chtal与长牡蛎、美洲牡蛎和海蜗牛tal同源性较高，证明了该基因是软体动物tal家族的一个成员。荧光定量PCR结果显示，Chtal在香港牡蛎血淋巴细胞中表达量最高，其次是心脏、鳃和消化腺。在溶藻弧菌和溶血性葡萄球菌刺激后，Chtal表达量显著上调，分别在24和12h达到最高水平，随着时间的增加该基因的表达量逐渐下降。亚细胞定位结果显示，Chtal在细胞核中表达。活体注射重组TAL蛋白能够显著提高淋巴细胞的数量，通过Edu增殖实验进一步证实了tal具有促进香港牡蛎血淋巴细胞再生的功能。本研究初步揭示了香港牡蛎tal参与了淋巴细胞再生，为深入研究该基因在牡蛎抗病中的功能提供了依据。

黄鳍鲷肌肉中弹性蛋白酶基因全长克隆及生物信息学下载：77 浏览：493

钟婵1 吴国平1 舒梅1 孙乐常2 曹敏杰2 《水产研究进展》 2021年1期

摘要:

研究表明弹性蛋白酶(elastase， Ela)参与调控嗜水气单胞菌引起的细菌性溃疡病，对控制鱼类养殖中免疫疾病有重要作用。本研究根据已报道脊椎动物的Elas基因序列设计特异性引物，通过RT-PCR和RACE技术克隆获得黄鳍鲷Ela基因(AlEla)cDNA序列全长，并对其进行生物信息学分析。结果显示，AlEla基因全长为946 bp，包含807 bp的开放阅读框，编码269个氨基酸，含有16个氨基酸信号肽的亲水性稳定膜外蛋白，定位于细胞外基质，具有3个O-糖基化和15个磷酸化的潜在位点。编码的成熟AlEla蛋白预测相对分子质量27 509 u，等电点为6.05。氨基酸序列同源性比对发现，AlEla与鲷和鲆的Elas2的同源性为84.76%～99.26%，处于系统进化树上同一分支，表明它们的亲缘性相近。AlEla具有Elas的保守结构，如Tryp-SPc结构域、丝氨酸蛋白酶催化三联体、保守的半胱氨酸残基以及在C端含有GDSGGPL序列等，揭示该酶有丝氨酸蛋白酶的催化活性。对AlEla蛋白的二级结构分析显示，α-螺旋、β-转角、β-折叠和无规则卷曲所占的比例分别为17.84%、7.06%、24.54%和50.56%。三级结构分析推测α-螺旋和β-折叠对于AlEla蛋白的空间构象可能有着重要作用。本研究从黄鳍鲷肌肉中成功克隆AlEla基因并分析其生物信息学特征，为后续研究AlEla参与调控鱼类免疫疾病的机制提供理论基础。

苏丹鱼甘露糖受体的基因克隆表达和免疫特性下载：63 浏览：497

何昕1 秦真东1 张凯1 梁日深1 杨森1 伍剑标2 赵丽娟1 林蠡1 《水产研究进展》 2020年6期

摘要:

为了解苏丹鱼MR(Lh MR)的结构特点及其在抗感染免疫反应中的作用，本研究克隆并分析了LhMR基因，采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测了LhMR在正常及柱状黄杆菌感染苏丹鱼组织中的表达。结果显示，LhMR开放阅读框4 296 bp，编码1 431个氨基酸(aa)。LhMR的氨基酸序列和分子结构与其他物种高度相似，胞外1个富含蓖麻类β型三叶草的结构域(RICIN)、1个纤连蛋白Ⅱ型结构域(FNⅡ)、8个串连的C型凝集素样结构域(CLECTs)、1个跨膜区和1个胞内区。通过qRT-PCR检测显示，LhMR在脾脏、体肾、心脏、脑、皮肤、肌肉、鳃、肝脏、后肠、前肠和中肠11种组织中均有表达，其中脾脏中表达量最高；经柱状黄杆菌感染苏丹鱼后，脾脏、肠、体肾和鳃中LhMR基因的相对表达量显著升高。通过免疫组织化学(IHC)检测发现，在脾脏、肾脏和鳃中的LhMR蛋白表达水平提高。通过苏木精-伊红染色病理组织切片表明，在体肾、肠、肝脏和鳃中均有不同程度的病变。体肾的肾小管有大量的血细胞浸润，上皮细胞发生坏死；肠壁变薄，组织大量弥散坏死；肝脏组织中有多个空泡；鳃小片肿胀、混乱、坏死和脱落。研究表明，LhMR在苏丹鱼感染柱状黄杆菌免疫反应中发挥重要作用，为苏丹鱼柱形病的防控提供新的参考。

中国明对虾calcineurin B基因的克隆及其在竞争行为中作用的初探下载：73 浏览：461

孙犁1，2 卢霞2，3 孔杰2，3 孟宪红2，3 闫允君2，3 李波波1，2 仲伟鹏2 陈宝龙2，3 曹宝祥2，3 罗坤2，3 栾生2，3 《水产研究进展》 2020年3期

摘要:

中国明对虾在养殖中表现出较强的竞争行为，对其生长性能产生了较大的影响，然而，到目前为止其发生的分子机制尚不清楚。钙调神经磷酸酶（calcineurin，CN）是高度保守的Ca2+/钙调蛋白（calmodulin， CaM）依赖性丝氨酸/苏氨酸磷酸酶，由催化亚基（CNA）和调节亚基（CN-B）组成，是参与许多重要生理过程的多功能蛋白质。CNB在Ca2+/CaM的介导下主要在动物的中枢神经系统发挥重要作用。另外，前期通过比较转录组分析筛选出的与中国明对虾竞争行为相关的候选基因中包括CNB基因。为了进一步明确CNB在中国明对虾竞争过程中的作用，实验通过RACE技术克隆了中国明对虾CNB基因（FcCN-B）的全长cDNA序列，并利用Real-time PCR技术分析了其在高竞争能力组（HCG）和低竞争能力组（LCG）组间不同组织（神经节、心脏、胃、肝胰腺和肠）中的表达情况。结果显示，FcCN-B的cDNA全长序列为2 867 bp，包括95 bp的5′非编码区（UTR），540 bp的开放阅读框（ORF），和2 232 bp的3′UTR，其中ORF中具有4个保守的EF-hand Ca2+结合结构域。蛋白质同源性分析显示，FcCN-B的氨基酸序列与其他物种具有较高的同源性（78.8%～93.8%），其中最高的是中华绒螯蟹（93.8%）和黑腹果蝇（90.5%）；系统进化关系分析显示，脊椎动物和无脊椎动物分别独立为一支，且中国明对虾与中华绒螯蟹单独聚为一支，之后与黑腹果蝇聚类关系最近，提示FcCN-B在中国明对虾中可能具有与其在中华绒螯蟹和果蝇中相类似的功能。Real-time PCR定量结果显示，FcCN-B在HCG组的神经节中的表达极显著高于LCG组，而其在HCG组的心脏中的表达极显著低于LCG组。研究结果表明，calcineurin B基因在中国明对虾的竞争行为中可能发挥一定的作用，将为解析中国明对虾竞争行为的分子机制奠定重要的基础。

拟穴青蟹Cactus基因的cDNA克隆、序列及生物学功能下载：76 浏览：485

胡蕾1，2 邓恒为2 李晶晶2 刘姗姗2 何建国2 李海云1 翁少萍2 《水产研究进展》 2020年3期

摘要:

为获取拟穴青蟹Cactus基因cDNA全长、分析基本生物学信息，并初步探索其在病原物刺激下的免疫反应，实验采用RACE技术获得了拟穴青蟹Cactus(SpCactus)基因的cDNA全长序列，其cDNA全长为2 035 bp，开放阅读框(ORF)1 311 bp，编码436个氨基酸，分子量为46.01 ku。对蛋白理化性质进行预测发现，SpCactus为亲水性蛋白，等电点pI为4.91。经预测，SpCactus与其他物种的IκB蛋白具有相似的功能结构域。同源性比对结果显示，SpCactus与凡纳滨对虾和中国明对虾的Cactus蛋白同源性均高达62%，相似度为73%。系统进化树分析显示，SpCactus与甲壳动物聚为一支，与无脊椎动物聚为一大支。实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测发现，SpCactus基因在拟穴青蟹不同组织中均有表达，肌肉中的表达量最高，其次为心脏、眼柄、血液和鳃，肝胰腺中的表达量最低。LPS和金黄色葡萄球菌刺激均能显著诱导SpCactus基因的表达。本实验成功扩增了SpCactus基因全长，并进行了生物信息学分析、理化性质预测，初步探讨了其生物学功能，为进一步研究其在免疫反应中的生物学功能提供参考依据。

太平洋鳕抗菌肽Hepcidin基因克隆及体外表达研究下载：55 浏览：375

吴玲梅1 顾杰1 温智清2,3 贾鹏2,3 刘瑞婷1 蒋洁兰1 刘荭2,3 郑晓聪2,3 毛明光1 《中国水产学报》 2020年2期

摘要:

为揭示太平洋鳕Gadus macrocephalus抗菌肽Hepcidin(GmHep)的分子结构和表达特性,利用qPCR法对平均体质量为2.438kg鳕不同组织和发育早期的GmHep表达模式进行了探讨,分别构建了原核(pET-32a-GmHep)和真核(pEGFP-GmHep)表达载体,研究了GmHep的体外表达特点。结果表明:GmHep基因开放阅读框长为297bp,编码98个氨基酸,蛋白相对分子质量为10833.56,该肽N端具22个氨基酸残基的信号肽,成熟肽含有8个半胱氨酸残基、4个二硫键;氨基酸序列比对发现,GmHep与大西洋鳕Hepcidin同源性最高(93%),但与其他鱼类Hepcidin同源性较低(小于60%),预示其功能具有独特性;GmHep在肝脏中的表达量显著高于其他组织(P<0.05),且GmHep在5、10、30、37、40日龄仔稚鱼中均有表达(P<0.05);GmHep体外诱导表达优化条件为IPTG浓度0.01mmol/L、30℃、诱导4 h;GmHep在EPC细胞系中主要定位在细胞质中。研究表明,本研究成功构建了两种GmHep体外表达载体,确定GmHep为肝分泌型,且在太平洋鳕发育早期发挥一定作用。

中华鳖dazl基因克隆及在生殖细胞中的表达下载：90 浏览：503

唐舟凯1 张飘逸2 储张杰1 朱新平1，2 李伟2 吴栩灵2 徐红艳1，2 《水产研究进展》 2019年4期

摘要:

为探索龟鳖类生殖细胞的发育分化机制，实验通过特异性引物克隆了中华鳖dazl基因的cDNA片段，长1 007 bp，其中包括5′端非编码区197 bp，3′端非编码区33 bp，开放阅读框777 bp，编码258个氨基酸。氨基酸序列比对显示其与西部锦龟Dazl同源性最高，达96%；与小鼠Dazl同源性达75%。荧光定量PCR分析结果显示，中华鳖dazl mRNA主要在精巢和卵巢中表达，在体细胞组织中仅检测到微量表达。冰冻切片原位杂交结果显示，中华鳖dazl mRNA在生殖细胞中特异表达，且在不同时期的生殖细胞中呈动态表达模式。在精巢中，中华鳖dazl mRNA在初级和次级精母细胞中表达最强，在精原干细胞中表达水平次之，在精子细胞中未检测到信号；在卵巢中，中华鳖dazl mRNA信号在初级卵母细胞胞质中均匀分布且在最早期的初级卵母细胞中信号最强，随着卵母细胞的增大，信号逐渐聚集并逐渐减弱。研究表明，dazl基因可能对中华鳖两性生殖细胞的发生具有重要的调控作用。

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