摘要:
研究银杏内酯B(GB)对甲基苯丙胺(METH)引发的小胶质细胞活化及炎症反应的影响及潜在机制。方法根据METH浓度不同分为0、300、600、1 000μmol/L METH组,采用相应浓度METH刺激BV2细胞24 h,选择最佳METH浓度。根据METH处理时间不同分为0、12、24、48 h METH组,采用1 000μmol/L METH(最佳浓度)分别刺激BV2细胞相应时间,选择最佳METH刺激时间。检测30、60、120、240、480、960μmol/L GB+METH组以及对照组的BV2细胞活力,选择最佳GB浓度。Western Blotting检测对照组、120μmol/L GB+METH组、阴性对照组(NC组)、METH+NC组、TLR4siRNA组及TLR4siRNA+METH组CD11b、Toll样受体4(TLR4)、磷酸化的核因子κB(p-NF-κB)的表达,ELISA法检测TNF-α、IL-1β和IL-6水平。结果与对照组比较,30、60、120、240、480、960μmol/L GB组细胞活力差异无统计学意义(均P>0.05),1 000μmol/L METH组细胞活力显著下降(P<0.05)。与1 000μmol/L METH组比较,120、240μmol/L GB+METH组细胞活力显著升高(P<0.05～0.01)。与0μmol/L METH组相比,300μmol/L METH组CD11b表达差异无统计学意义(P>0.05),600、1 000μmol/L METH组CD11b表达显著增加(均P<0.05),且呈浓度依赖性;300、600、1 000μmol/L METH组TLR4表达及1 000μmol/L METH组p-NF-κB表达显著升高(P<0.05～0.01)。与0 h METH组相比,12 h、24 h及48 h METH组CD11b、TLR4及p-NF-κB表达均显著增加(P<0.05～0.001)。与对照组比较,1 000μmol/L METH组CD11b表达显著升高(P<0.05),120μmol/L GB组及120μmol/L GB+METH组CD11b表达差异无统计学意义(均P>0.05)。与1 000μmol/L METH组相比,120μmol/L GB+METH组CD11b表达显著降低(P<0.05)。与NC组比较,METH+NC组TLR4、p-NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平均显著升高(P<0.05～0.01)。与METH+NC组比较,TLR4siRNA组TLR4、p-NF-κB表达显著降低(均P<0.01),TLR4siRNA+METH组TLR4、TNF-α、IL-1β、IL-6表达显著降低(P<0.05～0.01)。与对照组比较,1 000μmol/L METH组BV2细胞TLR4、p-NF-κB表达显著增加(均P<0.05)。与1 000μmol/L METH组相比,120μmol/L GB+METH组BV2细胞TLR4、p-NF-κB表达显著降低(均P<0.05)。结论 GB可能通过抑制TLR4-NF-κB通路,发挥对METH引发的小胶质细胞活化及炎症反应的抑制作用。
