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LAMP技术检测非小细胞肺癌患者外周血EGFR基因L858R位点突变方法的建立及应用 下载：95 浏览：496

钮静1 权文强2 李冬2 《国际检验医学》 2020年8期

摘要:
目的利用环介导等温扩增(LAMP)技术建立非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血靶点表皮生长因子受体(EGFR)基因L858R位点突变的快速筛查方法。方法在Genebank上查找EGFR 21号外显子(L858R)的DNA序列，利用Primer Explorer V4软件设计特异性引物，建立LAMP检测方法，并对其特异性和敏感性进行评价。采集11例临床病理诊断为NSCLC患者外周血血浆，以聚合酶链反应(PCR)扩增结果为标准，对建立的LAMP方法的准确性进行验证。结果采用自行设计的LAMP引物及构建的反应体系可特异性扩增EGFR L858R位点突变阳性DNA，检测敏感性为0.1%，特异性达到100%。LAMP法在11例EGFR L858R位点突变阳性的NSCLC患者血浆标本中检测到9例阳性。结论成功建立了LAMP检测人外周血浆EGFR基因突变方法，诊断敏感性、特异性和准确性均较高，可荧光目测判读检测结果，是一种简单、快速的EGFR基因突变筛查方法。

可视化LAMP法检测耐碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌耐药基因blaKPC-2的初步应用 下载：90 浏览：509

邹萍 鲍俊峰 臧嘉 张婷 许耀辉 《国际检验医学》 2019年2期

摘要:
目的建立可视化环介导等温扩增（LAMP）方法检测肺炎克雷伯菌耐药基因blaKPC-2，并初步评估其应用价值。方法设计3对特异性的LAMP引物，建立25μL的LAMP检测体系并进行优化，通过与聚合酶链反应（PCR）进行比较，分析其特异性和敏感性。结果成功建立了检测肺炎克雷伯菌耐药基因blaKPC-2的可视化LAMP方法。63℃保温40 min可实现对blaKPC-2基因的快速检测。特异性与PCR一致，敏感性比PCR高约10倍。采用新建立的可视化LAMP方法检测出25株对亚胺培南、美罗培南和厄他培南其中之一耐药的肺炎克雷伯菌中有12株携带blaKPC-2基因，31株对亚胺培南、美罗培南和厄他培南敏感的肺炎克雷伯菌中有5株携带blaKPC-2基因，二者比较差异有统计学意义（P=0.009 9）。结论建立的可视化LAMP方法可作为检测肺炎克雷伯菌耐药基因blaKPC-2的方法，但尚不能替代体外药物敏感性试验。
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