文章-世纪中文出版社

江瑞宁万苾馨苏新华窦向梅《生物学报》 2019年1期

摘要:

利用聚合酶链反应(PCR)技术,建立鱼类制品中河豚鱼成分的分子生物学鉴定方法,弥补河豚鱼形态学鉴定的缺陷。方法:通过阅读文献,确定河豚鱼鉴定的靶基因并筛选特异性引物,提取河豚鱼DNA,优化PCR反应条件,扩增河豚鱼特异性DNA片段,并通过DNA电泳显示特异性扩增的DNA条带。结果:选择细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)作为河豚鱼成分鉴定的靶基因,PCR最佳反应条件是退火温度68℃,镁离子浓度2.0 mmol/L,DNA模板加入量0.07～0.1μg。河豚鱼特异性引物具有较好的特异性,与市场上常见的鲤鱼、草鱼等水产品无交叉反应。结论:所建立的PCR方法可以有效鉴定鱼类制品中河豚鱼成分。

ICC患者血浆ctDNA突变检测数字PCR平台的建立及临床应用价值下载：93 浏览：584

戴谦1 黄斐1 王宇鹏2 黄傲2 成剑文2 潘柏申1 郭玮1 周俭2 樊嘉2 杨欣荣 2王蓓丽1 《国际检验医学》 2020年12期

摘要:

目的建立KRAS G12D、TP53 C242S、IDH1 R132C突变数字聚合酶链反应(dPCR)检测平台，并初步评估其检测性能及临床应用价值。方法选取行切除手术的肝内胆管细胞癌(ICC)患者22例，设计KRAS G12D、TP53 C242S、IDH1 R132C突变位点的引物及探针，建立dPCR突变检测平台。并采用不同浓度的自配标准品质粒验证该平台的准确性、精密度、空白限、功能灵敏度及线性范围。将外周血dPCR检测结果与外周血Oseq-ctDNA及组织Oseq-T靶向测序结果进行比较。ICC患者行切除术后，每6个月采集1次外周血并跟踪随访，评估该突变检测平台对ICC患者术后疗效监测的作用。结果 dPCR平台的准确性良好[3种突变(KRAS G12D、TP53 C242S和IDH1 R132C)3个丰度的检测结果与理论值的偏差均<±15%]，批内和批间精密度[变异系数(CV)]均<20%，空白限为4拷贝，功能灵敏度为0.1%，且在0.1%～10.0%范围内线性良好。ROC曲线分析结果显示，ctDNA突变谱诊断ICC的曲线下面积(AUC)为0.659，敏感性为31.8%，特异性为100%；与糖类抗原19-9(CA19-9)联合检测诊断ICC的AUC为0.841，敏感性为68.2%，特异性为100%。dPCR平台的检测结果与Oseq-ctDNA测序结果有较高的一致性(kappa=0.792，P=0.007)。随访结果显示，有1例ICC患者术后18个月KRAS G12D突变升高，与影像学检查确认的复发时间一致。结论建立了检测KRAS G12D、TP53C242S、IDH1 R132C突变的dPCR平台，可用于ICC患者的辅助诊断、疗效评估及术后动态监测。

成人非典型社区获得性肺炎患者病原体感染情况分析下载：91 浏览：505

申春梅1 冷蓓铮2 刘亚隽1 张慧1 周聪1 徐茂锁1 贺乐奇1 《国际检验医学》 2020年4期

摘要:

目的分析肺炎支原体(MP)等经典微生物引起的非典型肺炎患者的实验室检查结果，为临床诊治提供参考。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测188例成人社区获得性肺炎患者急性期咽拭子和/或痰液样本中的MP、肺炎衣原体和嗜肺军团菌，分析每位患者的临床资料、实验室指标、影像学检查结果。结果MP核酸检测阳性41例(21.8%)，肺炎衣原体核酸检测阳性1例(0.5%)，未检出嗜肺军团菌；细菌培养阳性23例(12.23%)。MP阳性患者年龄较阴性患者小，较少伴有基础疾病，肺部以单侧受累为主，其他临床症状和实验室相关指标差异均无统计学意义。秋季、冬季MP阳性率明显高于春季、夏季(P<0.05)。结论 MP是成人社区获得性肺炎的主要病原体，qPCR对MP急性感染的早期诊断具有明显的优势。

多种方法联合检测附红细胞体的应用下载：82 浏览：503

路凌怡1 王剑飚2 姚玉峰1 《国际检验医学》 2019年10期

摘要:

目的通过多种方法联合检测以提高人附红细胞体检测的特异性。方法选取223例血液病患者，分别用瑞氏-吉姆萨染色和吖啶橙荧光染色检测附红细胞体，比较2种方法的附红细胞体检出率。对2种方法检测结果均阳性的标本进行聚合酶链反应(PCR)检测，并对PCR检测结果阳性的标本进行基因测序和GenBank比对分析。结果瑞氏-吉姆萨染色附红细胞体的检出率为46.19%，吖啶橙荧光染色附红细胞体的检出率为28.25%。2种方法检测结果均阳性的40例标本中有10例PCR检测结果阳性，取其中1例条带较深的标本进行基因测序，测序结果与猪附红细胞体、牛附红细胞体和羊附红细胞体16S rRNA基因序列的同源性分别为95.84%、86.84%和87.33%。结论多种方法联合检测可提高附红细胞体检测的特异性。

人腺病毒-B55实时荧光定量PCR扩增方法的建立下载：97 浏览：530

董磊1 刘娟2 艾现印3 马红雨1 全首祯1 姜涛4 《国际检验医学》 2019年7期

摘要:

目的构建人腺病毒(HAdV)-B55的实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)扩增方法，并验证其检测性能。方法采用Beacon Designer 7软件设计针对HAdV-B55 Hexon基因序列的特异性引物，建立HAdV-B55的实时荧光定量PCR扩增方法，并评估其敏感性及特异性。结果建立了检测HAdV-B55的实时荧光定量PCR扩增方法，反应敏感性为0.08 PFU/反应体系，且特异性良好，与相关HAdV B组病毒均未检测到交叉反应。结论成功建立了针对我国HAdV-B55的特异性实时荧光定量PCR检测方法，为HAdV-B55的快速检测及防控提供了有力的支持。

乙型肝炎病毒YMDD突变室间质量评价调查品制备及应用下载：88 浏览：507

蒋玲丽肖艳群王雪亮鲍芸杨依绡王华梁《国际检验医学》 2019年4期

摘要:

目的制备乙型肝炎病毒(HBV)YMDD突变室间质量评价(EQA)调查品，评估上海地区临床实验室检测HBV YMDD突变的能力。方法筛选HBV DNA>5×104 IU/ML的临床样本，经稀释制成含HBV YMDD不同突变类型的样本盘。采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)、高温连接酶反应(LDR)和测序法筛选EQA候选样本，并采用PCR评估样本均匀性和稳定性。2017年2次EQA各制备5份样本，要求参评实验室在规定时间内检测样本并上报检测结果。对回报结果进行分析。结果 2017年2次EQA分别收到12份和10份有效回报结果，66.67%的实验室检测结果完全正确。HBV YIDD、YVDD、YIDD+YVDD和YMDD不同突变样本的检测符合率分别为90.63%、86.36%、77.27%和88.24%。结论制备的调查品均匀、稳定，可用于EQA；部分临床实验室HBV YMDD突变检测能力尚需提高，应加强质量控制以保证检测结果的准确性。

3种血浆微小RNA提取方法的评价下载：98 浏览：503

黄学文潘杰赵兰静吴茵朱菊平《国际检验医学》 2018年9期

摘要:

目的对3种血浆微小RNA(miRNA)提取方法进行评价。方法运用国产、进口硅胶吸附柱法和TRIzol法分别提取20名志愿者血浆中的miRNA；利用TaqMan聚合酶链反应(PCR)检测提取物中的β-globin基因含量，观察提取物中RNA的纯度；利用反转录茎环引物及TaqMan-MGB探针q PCR检测提取物中miRNA-21含量，观察miRNA提取的效率。结果国产、进口硅胶吸附柱法及TRIzol法提取液中β-globin基因的Ct值分别为35.487±0.356、35.591±0.332和33.529±0.499，3种方法的Ct值差异有统计学意义(P<0.001)；国产和进口硅胶吸附柱方法的β-globin基因Ct值均明显高于TRIzol法(P<0.000 1)；而国产与进口硅胶吸附柱法β-globin基因Ct值差异无统计学意义(P=0.345 4)。国产、进口硅胶吸附柱法和TRIzol法miRNA-21的Ct值分别为26.527±0.158、26.653±0.201和28.169±0.385，3种方法的Ct值差异有统计学意义(P=0.000 3)；国产和进口硅胶吸附柱法miRNA-21的Ct值均明显低于TRIzol法(P<0.000 1)；国产硅胶吸附柱法miRNA-21的Ct值低于进口硅胶吸附柱法(P=0.033 7)。结论硅胶吸附柱法可有效提高miRNA的提取效率和纯度。国产硅胶吸附柱法完全可以取代进口硅胶吸附柱法。

实时荧光定量PCR快速检测脑膜炎奈瑟菌的临床价值下载：84 浏览：514

王崇义1 史训忠2 孙正林1 《国际检验医学》 2018年9期

摘要:

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)快速检测流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)病原菌脑膜炎奈瑟菌(Nm)的临床价值。方法收集70例疑似流脑病例的双份脑脊液标本，1份采用细菌培养法进行检测，另1份采用实时荧光定量PCR进行检测，比较2种方法的检出阳性率以及敏感性和特异性。结果采用细菌培养法检出Nm阳性49例，阳性率为70.00%；实时荧光定量PCR检出Nm阳性67例，阳性率为95.71%，二者阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)。实时荧光定量PCR检测结果与细菌培养法阳性符合率为70.00%，其中有18例细菌培养法为阴性而实时荧光定量PCR为阳性。实时荧光定量PCR检测Nm的特异性为100%，无假阴性结果，阳性预测值为73.13%，阴性预测值为0.00%，检测下限为103拷贝/m L，线性范围为2×103～2×107拷贝/m L。结论实时荧光定量PCR检测Nm敏感性高、特异性强，且快速简便，为流脑流行病学调查提供了一种快速、简便的病原学诊断手段。

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