流式细胞技术能够同步分析大量细胞,可以通过单克隆抗体在细胞分析水平上定量分析生物粒子,能够从单个细胞中测量多个参数,本身有着精度高、速度快的特点,主要应用于医学领域,不仅能够有效提升临床医学检验的效果,还能提高疾病诊断的准确性。
1流式细胞技术概述
作为一种综合性的检验技术,流式细胞技术本身涵盖了一定的统计学理论和细胞学知识,涉及到电子、生物学、流体力学等多项学科,本身有着原理并不是非常复杂的特点,不仅能够有效提升检验结果的准确性,还能缩短检验工作的速度。除此之外,流式细胞技术应用于医学检验工作期间,对检验环节相关技术操作的要求较高,要求检验人员必须具有较高的专业素养,必须严格按照检验要求开展相应操作,但是,实际应用于临床医学检验工作时,发现这种检验技术的检验操作工序较为复杂,这一情况给临床检验工作开展造成较大影响,增加了人为影响因素出现的概率。
流式细胞技术又被称之为流式细胞分析,主要应用于医学检验工作中,检验工作开展期间需要借助先进的检验设备,比如:流式细胞仪等设备,合理应用流式细胞仪,准确分析测量结果,主要分析细胞的特异性、基本态势、功能等。除此之外,随着生物学、医疗技术等发展速度的不断加快,流式细胞技术的应用范围也在不断扩大,设计常规细胞检测、肿瘤检验等多个领域,本身有着应用效果较好的特点。
2医学检验中流式细胞技术的应用
2.1一般资料
进行多次临床试验,并对最终的实验结果进行精准分析。
2.2方法
流式细胞分析方法主要包括血液淋巴细胞免疫表型分析法、流式细胞免疫表型分析法等,这些分析方法主要以标准化的模型作为分析基础,选取若干参数做特异性观察,以此判定细胞态势。流式细胞免疫表型分析法下,通过分子探针进行标记,对单克隆抗体进行分析,探针上附荧光素,可以鉴别单细胞的抗原,完成对大量细胞的同步判断,当其中部分细胞荧光素的宽度、亮度存在异常时,特异性会直接得到捕捉,用于细胞态势解读。血液淋巴细胞免疫表型分析法下,可使用多种荧光色,与全血中淋巴细胞膜的特异性抗原进行结合,溶解红细胞,洗涤抗体,统计存在异常的细胞数目,使用的荧光色越多,分析的结果越全面,但可能导致分析精度出现下降。流式细胞内或细胞核内抗原分析法一般应用于白血病和肿瘤检测,主要捕捉异常细胞核健康细胞的差异,分析靶细胞态势进行诊断。
在本次实验中将U2OS细胞作为检测目标物,对其进行细胞培养,并完成铺板、加药刺激与有效配置相关试剂等操作。在进行培养时主要以U2OS为主;在进行铺板前需要对细胞进行严格的分化处理;在进行细胞计数过程中,若细胞密度较大,则将影响计数结果的准确性,因此为避免计数结果受到影响,因此需要选择合适的倍数进行稀释。同时在实施铺板的过程中,首先需要将细胞放置于培养皿中,并将其摇晃,以此确保细胞能够在培养皿中均匀分布,但避免培养液溢出。之后将细胞放置于培养箱中,以确保其健康生长。上述操作完成后使用转染色剂进行转染,此时需要在DEF-FN上方构建基因质粒,当细胞密度达到50%-60%左右时进行转染,并在转染12-16h后按照1:3进行分板,确保细胞密度能够维持在30%左右。在进行转染过程中,可将转染质粒作为阳性对照组。在细胞铺板完成24h后使用相关药物对细胞进行刺激,完成加药培养的24h之后,针对细胞有效实施收获处理,在此过程中操作人员需要严格仔细地收集培养液,在每个规格板中添加1ml的胰酶,以促进消化。之后加入培养液以中和胰酶。上述操作完成后,将样本放置于冰箱中,时间约为4h,取出后在室温下溶解并进行离心操作,取上层清液并将其与100μl的1*PBS进行均匀混合,之后加入10μl的PI与10μl的Rnase进行摇匀,将样本放置于水浴锅中约30min。
2.3应用设备
流式细胞技术本身具有应用原理较为明确的特点,进行医学检测工作期间需要应用多种检验技术,要求必须要对各个环节进行规范化、精准化处理,以期能够有效提升医学检验工作的整体水平,应用流式细胞技术过程中不能应用传统的人工处理方式,以便更好的突出设备应用价值,常用的设备为流式细胞仪,主要涉及细胞计数学、细胞技术对流等,流式细胞仪又被称之为烟雾微粒计数器,能够进行过100-50个对象目标分析,这种分析为单一参数分析,法国学者曾对流式细胞仪进行改造,改进为全血细胞计数器,之后各国学者纷纷投入至流式细胞仪研究工作中,研究出了使用荧光检测的细胞计数器,有效地提升了医学检测工作的水平。
2.4工作原理
流式细胞仪主要包括:激光系统、液体流动系统、信号系统等五个工作系统,在常规工作状态下,研究对象对投入至设备中,通过激光方式测量杂色细胞,并捕捉其中存在特异性的细胞,并将这一捕捉过程记录下来,通过散射光强度、荧光强度、荧光宽度等参数表达这种特异性,进而捕捉特异性的突出对象,以便为后续分析工作提供相应参考,在定量分析模式下,准确区分细胞抗原物质,以此得到细胞成分的相关信息。
2.5结果
在同一时段内能够获得单个细胞的诸多参数,最终确定受染细胞,同时还能够在同一时段内检测出诸多病毒以及病毒抗原,例如能够有效地进行HLA-B27抗原检测、白血病免疫检测、淋巴细胞亚群检测等;除此之外,流式细胞术还能够有效地进行寄生虫、病毒以及真菌等系列病原体的混合感染检测。
2.6讨论
为确诊患者的疾病类型与病情程度,同时也为治疗提供可靠保障,医生需要对患者进行临床检验。以往由于受到技术条件的限制,多进行常规的临床检测,内容多包括尿常规与血常规检测等,虽然能够获得一定的检测结果,然而缺乏有效地对患者的病情进行有效的判断,进而无法进行有效的治疗。随着临床医学的不断发展,目前临床中主要使用流式细胞术替代常规检测,能够有效地进行深入检验,从而为医生提供可靠的检测结果,为病情判别提供可靠保障。依据本项研究结果可知,通过使用流式细胞术的检验方式,HLA-B27抗原检测、白血病免疫检测、淋巴细胞亚群检测与肿瘤标志物检测获得较大程度的提升,具有显著效果。
3总结
进行临床医学诊断工作期间,相关部门要重视流式细胞技术的应用,掌握流式细胞技术的应用原理,细化检验流程,应用先进的流式细胞仪,准确检测细胞的面积功能,了解白血病免疫分型检测工作的整体水平,本身有着较高的临床检验工作价值。
参考文献
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