目的研究某三级甲等医院院内感染产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌的耐药性及危险因素,为临床合理使用抗菌药物及医院感染的防控提供依据。方法采用回顾性病例对照研究,调查2016年1月1日至2018年12月31日期间全院检出产ESBLs大肠埃希菌院内感染患者共550例,对照组则为随机抽取同等数量同期分离的非医院感染产ESBLs大肠埃希菌病例,危险因素分析采用单因素X2检验和多因素logistic回归分析。结果共检出医院感染产ESBLs大肠埃希菌病例550例,其中男性325例,女性225例,平均年龄为59.30±20.71岁。耐药率除碳青霉烯类抗菌药物外,医院感染产ESBLs大肠埃希菌均高于对照组。产ESBLs大肠埃希菌医院感染的主要危险因素有:年龄（OR=1.163,95%CI:1.021～1.325,P<0.001）、住院天数（OR=1.789,95%CI:1.455～2.199,P<0.001）、手术（OR=4.436,95%CI:3.249～6.057,P<0.001）、基础疾病（OR=2.124,95%CI:1.562～2.888,P<0.001）和侵入性操作（OR=3.607,95%CI:2.667～4.879,P<0.001）。结论除碳青霉烯类抗菌药物外,医院感染产ESBLs大肠埃希菌的耐药率均高于非医院感染产ESBLs大肠埃希菌;年龄、住院天数、手术、基础疾病和侵入性操是其主要危险因素。重点监测高危人群,规范抗菌药物的合理使用,将有利于指导院内感染该菌的预防与控制。