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基于转录组的白沙蒿SSR分子标记的开发 下载：81 浏览：505
摘要:
利用转录组数据开发白沙蒿的SSR分子标记,探索其分布特点并对SSR引物进行有效性检测。[方法]以9个不同样品白沙蒿转录组数据为基础,利用MISA软件对1kb以上的Unigenes进行筛选;把重复序列单元相同、重复次数存在差异、侧翼序列长度完全相同的SSR位点作为引物合成的标准,采用PCR技术和聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对其有效性进行初步验证。[结果]在20 149条Unigenes中共检测出5 692个SSR位点,发生频率为22.95%,平均每隔6.66 kb出现1个位点。优势重复单元单、三、二核苷酸分别占总SSR位点的52.09%、28.30%和17.38%。经过验证筛选出具有多态性且扩增条带清晰的引物18对。[结论]印证了利用白沙蒿转录组测序产生的Unigene信息可作为开发SSR标记的有效来源,且开发的有效SSR引物可用于后续群体的相关研究中。
prtR严紧调控的分子基础及对绿脓杆菌素表达的影响 下载：82 浏览：500
基于免疫印迹定量分析的总蛋白提取方法比较 下载：87 浏览：520
摘要:
基于改良的对比蛋白提取结果的方法,探讨两种不同总蛋白提取方法对不同丰度蛋白提取得率的影响。[方法]小胶质细胞株N9总蛋白及商品化预染蛋白标准品,行聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）,三种常用图像软件定量免疫印迹结果,比较线性相关系数R2;选择R2值最高的软件,灰密度定量不同丰度p-IκBα经RIPA裂解液法和Minute试剂盒法蛋白提取后免疫印迹检测的p-IκBα蛋白得率。[结果]三种软件定量分析同一免疫印迹结果显示,Image Studio Lite的上样量与条带灰密度值的R2最大（R2=0.998）;运用Image Studio Lite定量免疫印迹检测p-IκBα高丰度组,发现使用RIPA裂解液法比Minute法的p-IκBα提取得率高出7.5%,而p-IκBα低丰度组,前者p-IκBα的得率只有后者的41%,差异显著（P<0.05）。[结论]Minute试剂盒法在免疫印迹检测中对低丰度蛋白具有高提取得率的优越性。
沙眼衣原体类噬菌体衣壳蛋白CtF的表达及多克隆抗体制备 下载：67 浏览：514
摘要:
预测沙眼衣原中类噬菌体衣壳蛋白CtF的空间结构,表达重组蛋白并制备多克隆抗体。[方法]采用SOPMA和I-TASSER等软件预测CtF的空间结构,利用MEGA6分析其系统发育关系;构建重组质粒pET-28a-CtF,转化至E.coli BL21(DE3)中进行克隆表达;纯化重组蛋白免疫ICR小鼠制备多克隆抗体。[结果]CtF蛋白包含八股β桶状核心结构和环形延伸结构,与已知的衣原体噬菌体VP1蛋白遗传距离较近;重组质粒表达相对分子量约为64 kDa的融合蛋白;免疫小鼠获得免疫血清效价达1∶12 800。[结论]CtF蛋白疑似为沙眼衣原体噬菌体的衣壳蛋白;重组质粒表达相对分子量约为64 kDa蛋白,该蛋白免疫原性良好,为进一步研究其功能奠定了基础。
DZNep诱导HL-60细胞凋亡和生长抑制 下载：78 浏览：513
摘要:
研究S-腺苷同型半胱氨酸水解酶抑制剂DZNep(3-Deazaneplanocin A)对人早幼粒白血病细胞HL-60增殖的影响。[方法]细胞计数法分析DZNep(10～500 nmol/L)处理对HL-60细胞增殖的影响;以DNA片段化、Annexin-V/PI法和线粒体膜电位法检测DZNep处理对HL-60细胞凋亡的影响。Western Blot检测细胞凋亡相关基因Bax和细胞色素C的表达。[结果]50 nmol/L DZNep对HL-60细胞的24、48、72h增殖抑制率达18%、44.5%、81.7%。Annexin-V/PI法显示DZNep能诱导HL-60细胞发生剂量依赖性的细胞凋亡。进一步研究发现,DZNep(50nmol/L)处理24 h诱导23.8%的HL-60细胞发生线粒体途径介导的细胞凋亡,表现为细胞DNA片段化、线粒体膜电位下降和Bax基因表达上调,同时伴有细胞浆内细胞色素C增加。[结论]DZNep能在较低浓度下抑制HL-60细胞增殖并通过激发线粒体凋亡途径诱导HL-60细胞凋亡,具有抗人早幼粒细胞白血病治疗的潜在应用前景。
