qikan23@ccnpub.com
（邮箱投稿时，请说明投稿期刊名）
（邮箱投稿时，请说明投稿期刊名）
《生物技术研究》在线投稿系统
提示文字！
注：我们将于1~7个工作日告知您审稿结果，请耐心等待；
您也可以在官网首页点击“查看投稿进度”输入文章题目，查询稿件实时进程。
期刊菜单
最新文章2025年 »
2024年 »
2023年 »
2022年 »
2021年 »
2020年 »
2019年 »
2018年 »
DNA模板中发卡结构对定量PCR扩增的影响 下载：84 浏览：512
摘要:
探究模板引物结合区发卡对定量PCR的影响及优化方法。[方法]用分布连接法构建一系列在模板引物结合区含环大小为5～60 nt,茎长9 bp的DNA模板,考察发卡环部大小、茎干区GC含量对q PCR扩增效率的影响,再针对引物浓度、引物长度及退火温度来优化含发卡结构DNA模板的扩增。[结果]环区为5～40 nt时,其Ct值比对照组高1.3～4.2,对q PCR的抑制作用与环大小成负相关;茎长9 bp发卡结构当GC含量达3 bp以上时会对定量扩增产生明显抑制作用;增加引物长度、提高引物浓度和退火温度可提高发卡模板的扩增效率。[结论]模板引物结合区环大小在40 nt以内,茎长达9 bp的发卡结构对q PCR扩增会产生抑制作用,通过增加引物长度、提高引物浓度和退火温度可缓解此类抑制。
V1C、G116D、N171H定点突变对黑曲霉(Aspergillus niger)XZ-3S木聚糖酶XynZF-2热稳定性的影响 下载：75 浏览：500
摘要:
探索V1C、G116D、N171H定点突变对木聚糖酶Xyn ZF-2热稳定性的作用。[方法]生物信息学方法确定木聚糖酶Xyn ZF-2可突变位点,引入Cys、Asp、His;定点突变V1C、G116D、N171H,PCR扩增突变基因xyn CDH,构建大肠杆菌表达载体,转化表达宿主大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达目的蛋白并测定酶活,分析酶学性质。[结果]突变酶Xyn CDH的最适温度由40℃上升到45℃。40℃条件下突变酶Xyn CDH半衰期t40℃1/2由55 min延长到60 min;在45℃条件下,突变酶Xyn CDH的半衰期t45℃1/2由7min提高到15 min。[结论]定点突变V1C、G116D、N171H能增强木聚糖酶Xyn ZF-2热稳定性,为加深木聚糖酶分子改造的研究提供参考。
鞘糖脂内切糖苷酶的半理性设计 下载：81 浏览：495
摘要:
对鞘糖脂内切糖苷酶EGCaseⅡ进行半理性设计,获得高水解活性突变体。[方法]用半理性设计方法进行突变库设计,利用HPLC对突变库进行筛选,随后对阳性突变体进行动力学及底物谱表征,并利用结构建模对活性提高的分子机制进行解析。[结果]获得了对鞘糖脂GM1、GM3水解活性提高的突变体S63G/D311E、I276L/D311V,活性分别提高为野生型的25.3倍、11.8倍。酶动力学表征显示,S63G/D311E的KM由0.17 mmol/L降低到0.06 mmol/L,kcat由5.5 min-1增大到50.3 min-1。酶-底物复合物模式结构分析表明,D311E、D311V、I276L这几种突变更有利于酶与底物结合,从而提高酶活性。[结论]通过半理性设计成功获得对GM1和GM3水解活性分别提高25.3倍和11.8倍的EGCaseⅡ突变体。
转运过程中Caco-2细胞对外源miR-133a摄取规律探究 下载：81 浏览：500
摘要:
探究外源miR-133a在Caco-2细胞转运过程中细胞摄取的规律。[方法]建立Caco-2细胞模型以探究miR-133a在体内吸收情况;以Cy3标记的miR-133a对细胞摄取miR-133a的状态和过程进行探究;以细胞破碎液来评价被摄入的miR-133a在胞内的稳定性;通过细胞在不同温度下摄取miR-133a状态来评价细胞摄取miRNA途径。[结果]通过RT-q PCR检测到24 h内外源miR-133a能够以完整片段地形式被Caco-2细胞所转运,最大转运量占加入的总片段量的5.51×10-3%;Caco-2细胞能够摄取外源miR-133a,24 h后达到饱和状态,吸收率达7.2%;被摄入的miR-133a主要分布于细胞质,且部分会围绕细胞核分布;摄入胞内的外源miR-133a在24 h后残留量占总量的0.04%;miR-133a的细胞摄取过程需要消耗能量。[结论]证明了Caco-2细胞能够主动摄取外源miR-133a,孵育24 h的吸收率为7.2%,且摄取为能量依赖过程。
重组人IgE Fc的制备及抗过敏应用 下载：84 浏览：513
摘要:
考察重组人Ig E Fc的抗过敏反应作用。[方法]建立阴离子交换和疏水层析为主的分离纯化工艺,从CHO细胞培养的上清中获得重组人Ig E Fc样品;利用流式细胞法测定重组人Ig E Fc与表达人FcεRIα的CHO3D10细胞的亲和力;利用表达人FcεRIαEG-RBL2H3的细胞评价重组人Ig E Fc对细胞活化的抑制;在猴体上考察重组人Ig E Fc阻止被动皮肤过敏反应的作用。[结果]制备的重组人Ig E Fc的纯度达到98%;重组人Ig E Fc与CHO3D10细胞的亲和常数为1.40×109(mmol/L)-1是人Ig E的5倍;重组人Ig E Fc的剂量为NP-Ig E的5或6倍时可完全抑制体外细胞活化和体内过敏反应。[结论]重组人Ig E Fc可以抑制Ig E介导的过敏反应,具有新型抗过敏药物开发的前景。
