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艰难梭菌二元毒素A的原核表达及免疫原性分析 下载：91 浏览：508

黄颖凤 林雪霏 黄欢欢 吴爱武 《国际检验医学》 2020年6期

摘要:
目的构建艰难梭菌二元毒素(Cdt)A的原核表达载体，表达并纯化His-CdtA重组蛋白，分析其免疫原性。方法以RT 027型艰难梭菌为模板，采用聚合酶链反应(PCR)扩增cdtA的全长序列，导入大肠埃希菌BL21感受态细胞，诱导His-CdtA重组蛋白表达，并用纯化后的蛋白免疫小鼠，分析小鼠产生的抗体效价。结果成功构建pET-28b-cdtA原核表达载体，诱导并纯化出高浓度的His-CdtA重组蛋白，免疫小鼠后产生高效价的抗CdtA抗体。结论纯化的His-CdtA重组蛋白免疫小鼠产生了高效价的抗CdtA抗体，为后续制备抗CdtA单克隆抗体及建立CdtA的实验室检测方法学奠定了基础。

半滑舌鳎源哈维氏弧菌分泌蛋白HutZ的功能鉴定及免疫原性 下载：79 浏览：480

尚玉曼1 王恒1 刘静茹1 袁增智1，2 孙金生1，2 《水产研究进展》 2022年1期

摘要:
哈维氏弧菌为我国海水鱼类养殖过程中的常见病原，为了进一步探究哈维氏弧菌的致病机制，本实验分别从前期筛选到的哈维氏弧菌强毒株H2LB1和弱毒株H1SAI3中提取胞外产物(ECPs)，并通过蛋白质组学进行差异蛋白鉴定。从中选取了哈维氏弧菌强毒株特异性蛋白HutZ为研究对象，对其功能和免疫原性开展深入研究。首先利用qRT-PCR检测了哈维氏弧菌在不同铁源培养基培养条件下的HutZ基因表达量差异，进一步将克隆HutZ基因连接到原核表达载体上，并在大肠杆菌中成功表达出重组HutZ蛋白。将纯化的HutZ蛋白与血红素共孵育，检测发现该蛋白能够结合血红素并改变其光吸收峰。将HutZ蛋白乳化后免疫半滑舌鳎2次，以间接血凝法检测免疫后1—7周的血清效价，同时在免疫4周后进行攻毒检测其免疫保护率。研究表明，HutZ蛋白免疫后的半滑舌鳎抗体效价最高可达1∶128，攻毒免疫保护率达73.3%，说明HutZ蛋白可作为开发预防半滑舌鳎感染哈维氏弧菌的亚单位疫苗的有效候选抗原。

传染性胰脏坏死病毒VP3抗血清的制备及应用 下载：32 浏览：358

陈桂花1,2,3 贺文斌2 徐黎明2 赵景壮2 任广明2,4 邵轶智2 段凯越1,2,3 卢彤岩2,4 《中国水产学报》 2021年6期

摘要:
为丰富传染性胰脏坏死病毒(infectious pancreas necrosis virus, IPNV)的检测方法,以GenogroupⅠ型的IPNV ChRtm213分离株基因组RNA为模板,利用一步法RT-PCR扩增获得了编码IPNV VP3基因序列(711 bp),将其克隆至pET-32a原核表达载体,利用大肠杆菌Rosetta进行VP3蛋白表达,以纯化的VP3蛋白为免疫原制备鼠抗血清,利用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)对抗血清效价进行测定,并利用间接免疫荧光抗体法(indirect immunofluorescent antibody test, IFAT)和中国不同地区的IPNV分离株,对抗血清识别中国现行IPNV分离株的能力进行免疫学鉴定。结果表明:SDS-PAGE分析显示,表达纯化的VP3蛋白条带单一,相对分子质量约为45 000,与理论值相符;抗血清效价分析显示,所制备的鼠抗IPNV VP3血清与IPNV的反应效价为16 000,与纯化的IPNV VP3蛋白的反应效价为32 000;间接免疫荧光抗体

鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF4蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及其免疫原性分析 下载：62 浏览：371

孟少东1,2 姜新宇2 葛恒2 胡光耀2 杨大佐1 张家林2 李强2 《中国水产学报》 2021年4期

摘要:
为进一步研究鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirus 2, CyHV-2)ORF4蛋白的功能,通过PCR扩增CyHV-2 ORF4基因,并构建重组穿梭质粒pFastBac HTA-ORF4,将其转化至大肠杆菌DH10 Bac感受态细胞后获得重组杆粒Bacmid-ORF4;采用脂质体法转染Sf9细胞后,利用间接免疫荧光法(IFA)和Western blot鉴定重组蛋白,采用His亲和层析柱纯化重组蛋白,并通过小鼠免疫试验分析其免疫原性。结果表明:转染72h后Sf9细胞逐渐呈现出细胞变圆、细胞核明显增大的形态变化;间接免疫荧光结果显示,重组杆状病毒感染的Sf9细胞中出现了明显的绿色荧光;Western blot结果显示,纯化的CyHV-2 ORF4蛋白能够与抗His单抗发生特异性反应;小鼠免疫试验显示,纯化的CyHV-2 ORF4蛋白能诱导小鼠产生特异性免疫反应。研究表明,本研究中获得的CyHV-2 ORF4蛋白有较好的免疫原性,为CyHV-2 ORF4蛋白的功能解析提供了良好材料。

流行性感冒裂解疫苗临床安全性及免疫原性研究 下载：397 浏览：2152

陈一洋 《临床医学杂志》 2021年2期

摘要:
本文以随机方式从志愿者中选取试验组和对照组接种流感病毒裂解疫苗，从而进行观察接种该疫苗后的免疫效果以及临床安全性是否符合法定标准。实验结果发现，试验组和对照组各年龄层的志愿者整体反应和血清HI抗体阳转率无明显差别；而血清保护率和抗体增长倍数有明显不同，即实验组比对照组测量结果高。通过结果可看出疫苗具有良好的安全性，和良好的免疫原性。
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