文章-世纪中文出版社

甲状腺乳头状癌右侧喉返神经深面淋巴结转移的临床病理因素分析下载：20 浏览：346

姜琳张艳郑伟慧王可敬韩春《肿瘤研究》 2020年11期

摘要:

[目的]探讨甲状腺乳头状癌患者右侧喉返神经深面淋巴结转移的临床病理因素及其对预后的影响。[方法]回顾性分析191例甲状腺乳头状癌患者资料，对所有患者的手术情况、临床病理参数、随访情况进行统计分析。[结果]接受手术治疗患者191例，其中病理学诊断确诊右侧中央区淋巴结转移率54.9%，右侧喉返神经深面淋巴结转移率23.6%，右侧侧颈部淋巴结转移率19.9%。单因素分析显示，右侧喉返神经深面淋巴结转移与性别(P=0.001)、肿瘤直径(1.0cm为界)(P<0.001)、是否包膜外侵犯(P<0.001)、是否喉返神经浅面淋巴结转移(P<0.001)、是否侧颈部淋巴结转移(P<0.001)相关。多因素分析显示，男性(P=0.005)、肿瘤包膜外侵犯(P=0.020)、喉返神经浅面淋巴结转移(P=0.007)、侧颈部淋巴结转移(P=0.047)是喉返神经深面淋巴结转移的独立危险因素。[结论]对于男性、肿瘤有包膜外侵犯、喉返神经浅面淋巴结有转移、侧颈部淋巴结有转移的患者，在有效保护喉返神经及下极甲状旁腺的同时，建议清扫右侧喉返神经深面淋巴结。

核转录因子E2相关因子2在肿瘤血管生成调控中的研究进展下载：38 浏览：385

李立文卜晓敏夏亮孙才兴《肿瘤研究》 2020年11期

摘要:

研究发现核转录因子E2相关因子2(Nrf2)在多种肿瘤中异常表达，并通过氧化应激、HO-1通路、缺氧及炎症介质等多种途径参与调控肿瘤血管生成过程。对Nrf2与肿瘤血管生成的相关性进行探究，有助于发现抗肿瘤血管生成治疗的新靶点。全文就近年来肿瘤血管生成与Nrf2信号通路相关研究进展作一综述。

中国科学院大学附属肿瘤医院(浙江省肿瘤医院)鼻咽癌诊治研究进展下载：24 浏览：389

金厅陈晓钟《肿瘤研究》 2020年9期

摘要:

中国科学院大学附属肿瘤医院近年来就鼻咽癌诊治开展了数十项研究，这些研究大部分是针对Ⅱ期、局部晚期、转移鼻咽癌的治疗干预性研究，其余的是针对预后因素、分期以及放疗毒副反应的研究。全文就这数十项研究作一综述，一方面是对浙江省鼻咽癌学科发展的宣传与肯定，另一方面为临床医师合理制定临床治疗策略提供一些参考，也为扩大国内外鼻咽癌学科的交流和发展提供契机。

长链非编码RNA调控肝癌干细胞的作用下载：25 浏览：348

马睿玲1 王新斌1 张秋菊2 伊琳1 《肿瘤研究》 2020年7期

摘要:

目前常规疗法对晚期、转移或复发肝癌患者疗效差。肝癌干细胞(LCSCs)参与肝癌的发展、侵袭、转移和耐药，与不良预后密切相关，被认为是肝癌治疗的重要靶点。长链非编码RNA(LncRNA)在肝癌中异常表达。最近的研究表明，lncRNAs可能在调控LCSCs的生物学功能中发挥重要作用。全文总结lncRNA调控LCSCs作用的研究现状。

血清鳞状细胞癌抗原在宫颈鳞状细胞癌临床管理中的进展下载：63 浏览：490

张雨馨1 吴诗妍1 楼寒梅2 《肿瘤研究》 2020年7期

摘要:

血清鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)是宫颈鳞状细胞癌(CSCC)最常用的肿瘤标志物，是CSCC的预后预测指标；SCC-Ag与早期CSCC的术后临床病理高危因素相关，与术后辅助治疗风险相关，SCC-Ag的补充有助于建立更完善的危险因素预测模型，指导术后辅助治疗；SCC-Ag水平在宫颈癌治疗过程中下降，逐渐正常化，可以籍以判断疗效、预测复发；在随访过程中，SCC-Ag的升高先于临床复发，结合PET-CT检查可有效地评估病情、判断复发。SCCAg在CSCC的全程管理中发挥重要作用，可以作为个体化和精细化风险预评估的指标。

NDV-HN致人肺腺癌A549细胞凋亡的实验研究下载：73 浏览：440

田雯钰林宇宁梁莹黄娟娟李瑞樊晓晖《肿瘤研究》 2020年6期

摘要:

[目的]探讨NDV-HN诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的相关机制。[方法](1)构建包含绿色荧光素蛋白(GFP)及NDV-HN的慢病毒sfGFP-HN载体，用293V细胞包装慢病毒LvsfGFP-HN，用293V细胞进行空载质粒转染组(空载组)慢病毒包装，命名为Lv-sfGFP；(2)以空载组A549-sfGFP细胞和空白组A549为对照，用慢病毒转染方法建立稳定表达NDV-HN蛋白的A549细胞株，即A549-sfGFP-HN细胞株，RT-PCR、Western blot检测A549细胞NDVHN蛋白的表达；(3)分别在A549-sfGFP-HN和A549两组细胞中加入顺铂，流式细胞术检测细胞凋亡；(4)在基因水平和蛋白水平上分别用RT-PCR和Western blot检测各组细胞凋亡相关蛋白Bcl-2的表达。[结果](1)Lv-sfGFP-HN和Lv-sfGFP慢病毒分别转染A549细胞后，只在转染组A549-sfGFP-HN细胞检测到NDV-HN蛋白。(2)转染组A549-sfGFP-HN细胞凋亡率明显高于空白组A549细胞(P<0.01)，转染组A549-sfGFP-HN细胞加入顺铂后，其细胞凋亡率明显增加。(3)转染组A549-sfGFP-HN细胞与空载质粒转染组A549细胞和空白组A549细胞相比，凋亡相关蛋白Bcl-2表达量明显下调(P<0.01)。[结论]慢病毒转染NDV-HN到A549细胞后导致A549-sfGFP-HN细胞出现凋亡，且与Bcl-2下调有关。转染NDV-HN的肺癌细胞联合使用抗癌药物顺铂，增加了肺癌细胞凋亡率。

冰片逆转小细胞肺癌顺铂耐药的研究下载：47 浏览：360

姜志明王增覃晶李成辉卢红阳《肿瘤研究》 2020年6期

摘要:

[目的]评价冰片对小细胞肺癌(SCLC)顺铂(DDP)耐药的逆转作用及其对P糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)和小凹蛋白-1 (Caveolin-1)表达的影响。[方法]利用前期建立的SCLC DDP耐药细胞株LTEP-P/DDP，四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测冰片和/或DDP的抗肿瘤活性，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率，Western blotting检测P-gp和Caveolin-1的表达。[结果]冰片联合DDP对LTEP-P/DDP-0.75细胞的增殖抑制作用较单用DDP显著性增加(P<0.05)，耐药逆转指数为2.246。LTEP-P/DDP-0.75细胞经冰片联合DDP处理细胞后，较单用DDP处理组的G0/G1期和S期降低，G2/M期升高，差异有显著性(P<0.05)。冰片和DDP联合处理后，LTEP-P/DDP-0.75细胞凋亡显著性上升(P<0.05)，LTEP-P/DDP-0.75细胞Caveolin-1相比LTEP-P细胞显著性上升(P<0.05)，冰片或DDP单独用药组Caveolin-1显著性变化，冰片联合联合DDP组相比对照组能显著性降低LTEP-P/DDP-0.75细胞Caveolin-1表达(P<0.05)，而对P-gp无显著性抑制作用。[结论]冰片能在一定程度上逆转LTEP-P/DDP-0.75对DDP的耐药，其作用可能与抑制Caveolin-1表达有关。还原

68例甲状腺乳头状癌颈侧区淋巴结清扫分析下载：31 浏览：319

戴信深1 郭良2 赵佳正2 楼建林2 韩春2 谭向荣2 赵坚强2 梁忠2 《肿瘤研究》 2020年2期

摘要:

[目的]探讨甲状腺乳头状癌（PTC）颈侧区淋巴结转移的规律，为临床颈侧区淋巴结清扫提供依据。[方法]应用丝线定位法，精准划分颈淋巴结各分区，对收治的68例cN1bPTC患者，均行包含Ⅱa、Ⅱb、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴa、Ⅴb区和LNSS的颈侧区淋巴结清扫，共行侧颈部淋巴结清扫82侧。分析颈侧区淋巴结转移情况，探讨Ⅱb区、Ⅴa区、Ⅴb区、LNSS以及淋巴结跳跃性转移的规律。[结果] cN1b患者总颈淋巴结转移率92.6%（63/68），其中颈侧区转移率86.8%（59/68），中央区转移率79.4%（54/68）。侧颈清扫82侧，中央区清扫83侧，中央区淋巴结转移率为78.3%，Ⅲ区为62.2%，Ⅳ区为57.3%，Ⅱ区为47.6%（Ⅱa区43.8%，Ⅱb区7.3%），Ⅴ区为15.9%（Ⅴa区11.0%，Ⅴb区6.1%），LNSS转移率为9.8%。在Ⅱb区转移的患者中伴有Ⅱa区淋巴结转移或颈侧区多区域（2个以上区域）淋巴结同时转移情况多见；在Ⅴa区和Ⅴb区转移的患者中，伴有肿瘤被膜侵犯和颈侧区2个以上区域淋巴结同时转移情况较多；在LNSS转移的患者中，伴有Ⅳ区淋巴结转移和原发灶肿瘤位于甲状腺下极较多；在颈侧区淋巴结跳跃性转移患者中，原发灶肿瘤多位于甲状腺上极。[结论] cN1bPTC应常规清扫Ⅱa、Ⅲ、Ⅳ区淋巴结。保证副神经功能前提下，Ⅱa区或颈侧区≥2区域有淋巴结转移，需考虑清扫Ⅱb区淋巴结。有Ⅱ～Ⅳ区中多区同时转移或原发灶肿瘤明显被膜侵犯，需考虑清扫Ⅴ区淋巴结。当原发灶肿瘤位于甲状腺下极或Ⅳ区淋巴结有转移，清扫LNSS应更积极。原发灶肿瘤位于甲状腺上极患者，跳跃性淋巴结转移更常见。

MMP-3与αvβ6表达在口腔鳞癌中的临床意义下载：85 浏览：492

吕誉坤1 李海霞2 郑金华2 《肿瘤研究》 2018年1期

摘要:

[目的]探讨口腔鳞状细胞癌(OSCC)样本中MMP-3和αvβ6的表达情况及其临床意义。[方法]对80例临床诊断为口腔鳞状细胞癌患者的样本进行免疫组化和免疫荧光共定位检测MMP-3和αvβ6的表达。应用Fisher确切概率法评价临床病理参数与MMP-3和αvβ6的表达水平的关系。应用Spearman相关分析验证MMP-3和αvβ6之间的相关性。Kaplan-Meier曲线和Log-rank检测生存分析。[结果 ]与不典型增生组织相比，MMP-3和αvβ6在口腔鳞状细胞癌呈强表达，特别是在肿瘤侵袭的边缘。MMP-3阴性表达组(79.59%)和αvβ6阴性表达组(88.15%)的5年生存率明显优于MMP-3阳性表达组(31.45%)和αvβ6阳性表达组(42.82%)，且MMP-3和αvβ6表达之间存在相关性(r=0.5983)。[结论]MMP-3、αvβ6表达增加与口腔鳞状细胞癌不利的临床预后因素和生存率的降低相关。

基于模流分析技术的高光双色注塑件成型工艺研究下载：53 浏览：396

潘建新1 潘祎2 《装备技术研究》 2018年3期

摘要:

借助Moldflow Synergy分析软件对某双色底壳产品进行计算机辅助工程(CAE)模拟仿真。结合浇注系统的设计原则，确定了该产品模具浇注系统参数:模具型腔采用一模二腔布置；第一次成型外层选用聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)材料，采用点浇口进胶方式，浇口尺寸为1.3 mm；第二次成型内层选用丙烯腈-丁二烯-苯乙烯共聚物(ABS)材料，采用潜伏式点浇口进胶方式，浇口尺寸为1.8 mm。同时还通过成型窗口分析，得到了PMMA材料和ABS材料的最佳工艺参数范围:PMMA材料的最佳模具温度为100℃，熔体温度控制在300～340℃，注射时间控制在0.2～1.1 s；ABS材料的最佳模具温度为60℃，熔体温度控制在220～260℃，注射时间控制在0.1～1.2 s。

水解南珠液抑制细胞自噬减轻人微血管内皮细胞氧化损伤下载：67 浏览：500

刘鹏1 林江1 贾微1 兰太进1 岑妍慧1,2 《生物技术研究》 2020年10期

摘要:

以人微血管内皮细胞(human microvascular endothelial cell-1,HMEC-1)为研究对象,采用H2O2诱导内皮细胞氧化应激,探讨南珠水解液对HMEC-1细胞氧化损伤的保护作用及机制。[方法]采用生化检验法检测南珠水解液作用后,HMEC-1细胞内超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione Peroxidase,GSH-PX)活性及丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量变化;采用流式细胞仪检测细胞内活性氧(Reactive Oxygen,ROS)含量变化;采用透射电镜观察自噬体;采用免疫荧光实验检测细胞微管相关蛋白轻链3Ⅰ/Ⅱ(Microtubuleassociated protein light chainⅠ/Ⅱ,LC3Ⅰ/Ⅱ)表达变化。[结果]与氧化损伤组相比,不同浓度南珠水解处理组SOD活性显著增加,分别提高8.68%、24.99%和49.43%; GSH-PX活性无显著变化; MDA显著降低,分别降低36.99%、35.82%和60.25%;且给药组细胞内ROS含量相比氧化损伤模型组显著降低,分别降低5.18%、15.55%和32%;透射电镜结果显示对照组细胞内无明显自噬小体,氧化损伤组可见明显的双层膜结构的自噬小体,用不同浓度南珠水解液处理后,随着浓度的增加自噬小体含量显著减少;免疫荧光实验结果显示,与氧化损伤组相比,南珠水解液组LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ蛋白比值显著降低,分别降低19.21%、29.76%和33.71%。[结论]南珠水解液对氧化损伤的HMEC-1细胞有一定的修复作用,这种作用可能是通过抑制细胞自噬,并促进SOD活性水平提升,降低MDA和ROS含量,从而减轻H2O2诱导的HMEC-1细胞氧化损伤。

大肠杆菌异源合成甲羟戊酸的适配性优化下载：72 浏览：474

杨李阳1 苗莉云1 弓强1 彭晓夏1 郭建全2 《生物技术研究》 2020年9期

摘要:

对甲羟戊酸在大肠杆菌中的生物合成进行适配性优化。[方法]将来源于粪肠球菌的甲羟戊酸合成途径基因mvaE和mvaS引入大肠杆菌中,构建大肠杆菌甲羟戊酸合成体系。继而通过比较不同的表达系统和不同的RBS序列探究甲羟戊酸合成的最佳条件。接下来,考虑到乙酰辅酶A是连接大肠杆菌细胞代谢途径和外源甲羟戊酸合成途径的桥梁,通过加强乙酰CoA的代谢通量来继续提高甲羟戊酸的产量。[结果]采用pTrc99A载体,8 000 au的RBS强度下,大肠杆菌甲羟戊酸合成体系的效率最高,产量达到20.5 mmol/L;通过加强乙酰CoA的代谢通量,甲羟戊酸的产量继续提高到26 mmol/L。[结论]获得一株高产甲羟戊酸的大肠杆菌菌株,该菌株可用于合成甲羟戊酸,也可作为一平台菌株用于其他萜类化合物的生物合成。

胰岛素样生长因子结合蛋白4基因敲除小鼠的建立和鉴定下载：62 浏览：473

王涵菲勾荣彬张贺孙晓红徐群渊段德义《生物技术研究》 2020年5期

摘要:

用CRISPR/Cas9技术构建胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP-4)基因敲除(knock-out,KO)小鼠,以研究IGFBP-4对脑发育的影响。[方法]将IGFBP-4引导RNA和Cas9 mRNA显微注射于小鼠受精卵,繁育小鼠并观察体重和脑重改变。PCR和RT-PCR鉴定DNA和mRNA突变,Isotropic Fractionator测脑细胞总数和神经元数量,Western Blot观察NeuN表达,转棒实验测试动物行为学。[结果]KO造成了4种DNA缺失和插入突变,选择缺失GGGT致移码突变的动物进行繁育。与野生型小鼠相比,3月龄KO小鼠体重减轻了10.8%(P <0.05),整脑、皮层和小脑重量分别减轻了7.2%、6.9%和10.3%(P <0.05),小脑神经元比例和NeuN表达水平分别降低了14.3%和15.3%(P <0.05),Rotarod运动能力有所降低。[结论]用CRISPR/Cas9成功制备了IGFBP-4 KO小鼠,动物体重和部分脑区重量和神经元数量受到了影响。

β-catenin在小鼠雄性激素源性脱发模型毛囊分化发育中的作用下载：73 浏览：477

张俊霞1,2 王利3 《生物技术研究》 2020年4期

摘要:

旨在构建雄性激素源性脱发的小鼠毛囊分化发育及周期的模型,并研究雄性激素对雄性激素源性受体(AR)、β-catenin等毛囊发育周期中关键性调控因子在脱发模型小鼠毛囊分化发育中的作用机制的影响。[方法]小鼠皮下注射高浓度睾酮(5 mg/kg)后进行背部皮肤毛发脱毛的同步化处理,通过HE染色观察毛囊发育情况,并利用qPCR、免疫组化检测AR、β-catenin基因和蛋白的表达情况。[结果]睾酮组毛囊首个毛囊兴盛期的发育时间推迟5 d且提前进入休止期,休止期毛囊的毛干与真皮之间间隙增大。睾酮组与对照组相比,AR在毛囊发育早期减弱,第7 d对照组表达下降而睾酮组开始均匀分布于除毛乳头处的整个毛囊。22 d时,对照组毛囊已经进入休止期,AR基本不表达,而睾酮组在外根鞘和连接组织鞘仍可看到有少量表达。睾酮组第5 dβ-catenin在新生的内根鞘、皮质区与毛母质区有较高的表达,随后表达差异与对照组不明显。qPCR结果 AR基因表达与免疫组化趋势基本一致,但雄性激素对β-catenin基因表达的抑制一直持续到了兴盛期后期。[结论]通过建立雄性激素源性脱发的小鼠动物模型,发现雄性激素对毛囊发育分化的作用可能是通过影响AR和β-catenin等毛囊发育关键调控因子来实现的,其具体机制有待进一步研究。

魏雪玲尚方建石哲芳刘奇《生物技术研究》 2020年3期

摘要:

研究与白假丝念珠菌毒力相关的RAPD电泳条带的基因信息,明确这些条带是否来源于已知的毒力调控基因。[方法]通过对相关的白假丝酵母菌重新进行RAPD-PCR,切胶回收,以回收的DNA作为模板进行大量扩增,构建TA克隆,送测序。将获得的DNA信息登录Gen Bank数据库进行比对,寻找与包含这些条带信息的蛋白质。查阅文献,进行生物信息学分析,明确条带的基因信息与已发现的白假丝酵母菌调控基因之间的关系。[结果]白假丝酵母菌RAPD的450 bp条带为Abp1p(ABP1)蛋白的基因片段。[结论]Abp1p(ABP1)基因的过表达可能与下调磷脂酶表达有关,但具体机制有待进一步研究。

人TCF7L2基因启动子生物信息学分析下载：83 浏览：481

鲍思元《生物技术研究》 2020年2期

摘要:

探讨人TCF7L2基因启动子特征。[方法]从UCSC数据库获得人TCF7L2基因5'调控区2 000 bp序列,利用多种在线软件对启动子、转录因子结合位点、Cp G岛、SNP等进行分析。[结果]5'调控区2 000 bp序列正义链上至少存在5个潜在的启动子,其中-242～-192 bp、-853～-803 bp之间可能包含核心启动子。查找到1个TATA盒,存在1个长度为499 bp的Cp G岛。Ali Baba2. 1、PROMO和JASPAR软件分别预测到241、944、1 035(正义链)个转录因子结合位点。利用conreal程序在人和小鼠TCF7L2基因启动子保守区域内预测到207个共同的转录因子结合位点,涉及到66种转录因子。启动子区发现2个SNP位点。[结论]对人TCF7L2基因启动子进行了生物信息学分析,获得了启动子特征。

抗菌肽Cec4的结构改造及抗菌活性研究下载：71 浏览：477

彭建1,2,3 赵行行2 吴兆颖2 王涛3 尚小丽1,2 国果3,4 《生物技术研究》 2019年12期

摘要:

对抗菌肽Cec4进行结构改造,并评估优化小肽的稳定性及溶血性。[方法]采用序列截短、氨基酸替换的方式来改造Cec4。采用微量稀释法,检测改造后的Cec4对各类鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌的最小抑菌浓度(MIC)。绘制时间-杀菌曲线,并评估不同因素对抗菌肽抑菌活性的影响,最后通过溶血实验检测其安全性。[结果]①截短后的Cec4失去抑菌效果。②Cec4氨基酸替换后的Cec4-1、Cec4-2未能提升抑菌能力。Cec4-4的MIC值为Cec4的50%。③在24h,时间-杀菌曲线显示,Cec4-4的抑菌活性较Cec4高30%。④血清会影响抗菌肽活性,并且高浓度胰蛋白酶(1. 0 mg/m L)会抑制Cec4-4抗菌活性。⑤溶血实验表明Cec4-4在1 mg/m L浓度下无溶血反应。[结论]截短使Cec4失去抑菌活性,氨基酸替换后的Cec4-4对各测试菌的抑菌活性较母肽提升了1倍,且抗菌肽在1mg/m L浓度下对人体无溶血反应。

应用pIRES2-EGFP表达载体快速建立Hela细胞稳转细胞系下载：76 浏览：473

徐宏1 罗思凡2 罗思琛2 周颖欣2谷夏斐2 康海仙2 《生物技术研究》 2019年11期

摘要:

探索应用pIRES2-EGFP表达载体快速建立Hela细胞稳转细胞系的筛选方法。[方法]EcoRⅠ和Bam HⅠ双酶切,T4 DNA连接酶连接构建目的基因p IRES2-EGFP表达载体并测序确定,Lipofectamine3000转染Hela细胞分为Mock组(未转染组)、NC组(p IRES2-EGFP空载对照组)、重组质粒转染组,转染后24 h消化细胞进行初步筛选(900μg/m LG418),转染后14～16 d将长至肉眼可见的细胞克隆全部重新消化进行二次筛选(方法同初步筛选),转染后28～32 d挑选3个肉眼可见的细胞克隆,实时荧光定量PCR和WB检测目的基因过表达效率。[结果]双酶切及测序确定重组质粒成功构建,与Mock组相比,NC组无明显变化,重组质粒转染组各克隆目的基因mRNA水平分别升高109±8. 3、127±10. 5、122±9. 1倍,P <0. 01,蛋白水平分别升高33±3. 3、45±4. 7、47±4. 9倍,P <0. 01。[结论]该筛选方法 28～32d左右可快速建立Hela细胞稳转细胞系,过表达效率高,可直接进行后续实验。

LncRNA FQ223609促进血管平滑肌细胞增殖下载：76 浏览：485

吴仙华1 陈伟1 尚丹2 林嘉杰1 许馨1 李芳芳1 孙绍光1 《生物技术研究》 2019年4期

摘要:

构建lncRNA FQ223609真核表达载体,并且探讨其促进血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖的调控机制。[方法]通过RT-PCR扩增得到735 bp的lncRNA FQ223609基因序列,以质粒p CMV-CHA为骨架构建FQ223609真核表达载体,通过HindⅢ/XhoⅠ酶切及测序进行鉴定;将FQ223609真核表达载体及其对照空载体p CMV-C-HA分别转染VSMCs,CCK-8分析细胞活力,Western Blot检测脂蛋白酯酶(lipoprotein lipase,LPL)和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达水平。[结果]双酶切及测序鉴定显示插入lncRNA FQ223609 c DNA序列正确; CCK-8结果表明过表达lncRNA FQ223609使VSMCs增殖活力提高22%; Western Blot结果表明LPL和PCNA的表达水平显著上调。[结论]lncRNA FQ223609真核表达载体成功构建; lncRNA FQ223609通过上调LPL的表达,促进VSMCs增殖。

小鼠Prune蛋白DHH结构域的原核表达及多克隆抗体的制备下载：75 浏览：489

陆翮1,2 高子昭1,2 康健1 许艳慧1 宁唤唤1 柏银兰1 《生物技术研究》 2018年10期

摘要:

表达、纯化小鼠Prune蛋白DHH结构域(m-Prune D),并制备多克隆抗体。[方法]生物信息学方法分析m-Prune D氨基酸序列;PCR扩增目的基因m-Prune D,克隆入原核表达载体p ET28a(+);IPTG诱导目的基因表达,SDS-PAGE和Western Blot鉴定蛋白表达,亲和层析法纯化蛋白;用纯化的重组m-Prune D免疫小鼠制备多克隆抗体;Western Blot检测多克隆抗体特异性。[结果]PCR成功扩增m-Prune D基因,双酶切及测序结果表明成功构建m-Prune D原核表达载体,SDS-PAGE和Western Blot鉴定表明成功表达约25 k Da的重组蛋白。纯化蛋白免疫小鼠后抗体滴度最高可达1∶25 600,所制备的多克隆抗体可特异性识别原核和真核细胞中DHH结构域蛋白。[结论]在E.coli中成功表达小鼠Prune蛋白DHH结构域,制备了多克隆抗体血清,可用于Prune蛋白生物学功能的进一步研究。

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