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脂质体介导基因编辑载体质粒转染条件的优化 下载:81 浏览:511

白圣凯1 野庆松1 张芳婷2 盖厦梦1 李文娜1 张青峰1 高书颖1 《生物技术研究》 2019年8期

摘要:
探讨脂质体介导基因编辑载体质粒转染人食管癌Eca-109细胞的最佳条件。[方法]以基于Cre/Lox P系统的p GT-A1B1和基于CRISPR/Cas9系统的p X458-sgRNA8两种基因编辑载体质粒为实验材料,将环状和线性质粒以不同DNA用量(0. 2、0. 4、0. 6和0. 8μg)和不同DNA与脂质体比例(1∶1、1∶1. 5、1∶2、1∶2. 5和1∶3)转染Eca-109细胞,计算转染效率。[结果]不同DNA用量条件下,p GT-A1B1在0. 4μg和0. 6μg时转染效率较高,p X458-sgRNA8在0. 6μg时转染效率较高,与其它DNA用量比较均有显著性差异(P <0. 05)。不同DNA与脂质体比例条件下,p GT-A1B1在比例为1∶1. 5和1∶2时转染效率较高,p X458-sgRNA8在比例为1∶2. 5时转染效率较高,与其它比例比较均有显著性差异(P <0. 05)。同一种质粒的环状和线性结构形态,在DNA用量或DNA与脂质体比例相同时,转染效率差异不显著(P> 0. 05)。[结论]建立了脂质体介导基因编辑载体质粒转染Eca-109细胞的最佳转染条件,质粒p GT-A1B1和p X458-sgRNA8的DNA用量分别为0. 4~0. 6μg和0. 6μg,DNA与脂质体比例分别为1∶1. 5~1∶2和1∶2. 5。

ERα-36和STAT3协同促进乳腺癌细胞的迁移 下载:82 浏览:500

屈品均 杜庆 姚奥 项园 黄凤 张慧敏 戴周彤 张子健 李慧 廖兴华 《生物技术研究》 2019年4期

摘要:
探讨ERα-36和STAT3通过MMP2和MMP9对乳腺癌细胞迁移的影响。[方法]使用Transwell实验检测ERα-36和STAT3对乳腺癌细胞迁移能力的影响,荧光定量PCR和Western Blot检测在乳腺癌细胞中过表达ERα-36和STAT3对MMP2和MMP9表达的影响,Luciferase实验检测ERα-36和STAT3对MMP2和MMP9启动子转录活性的影响。[结果]与对照组相比,过表达STAT3组的乳腺癌细胞迁移能力明显升高(P <0. 05),两种与迁移相关蛋白MMP2和MMP9表达量均升高(P <0. 05);过表达STAT3增强了乳腺癌细胞中MMP2和MMP9的转录活性,而ERα-36过表达对MMP2和MMP9的转录活性具有较弱的影响。但是共表达ERα-36和STAT3显著增强了MMP2和MMP9的转录活性与表达。[结论]ERα-36和STAT3协同结合到MMP2和MMP9的启动子上,促进它们的转录与表达进而促进乳腺癌细胞迁移。

一种HER2阳性乳腺癌靶向药的制备优化及检测 下载:81 浏览:483

彭延杰1,2 丁艳3 曹强庚1,2 《生物技术研究》 2019年4期

摘要:
验证及提高乳腺癌靶向药物TP25粗制品活性,判断TP25杀伤癌细胞方式。[方法]配置含有精氨酸及还原型谷胱甘肽的复性液,并设置复性液p H为8. 5与9. 5,分别利用透析法与稀释法进行复性; MTT法验证TP25对乳腺癌细胞(SK-BR-3)的靶向性识别与杀伤作用;使用Casepase-1抑制剂z-YVAD-CHO确定TP25导致SKBR-3死亡的方式。[结果]优化制备工艺后粗制品的IC50(50%抑制浓度)由0. 051 0μg/m L提高至0. 029 9μg/m L;z-YVAD-CHO抑制实验中,4、19、22、25、28 h结果 P值均小于0. 01。[结论] TP25对乳腺癌细胞(SK-BR-3)杀伤作用具有明显的靶向性;采用稀释复性工艺后TP25粗制品的比活比初始值提高了41%; TP25可引起SK-BR-3发生细胞焦亡(Pyroptosis)。

甲状腺全切术后放射性碘治疗甲状腺癌患者临床疗效研究 下载:64 浏览:272

李冬扬 《诊断医学》 2018年10期

摘要:
目的探讨甲状腺全切术后采用放射性碘治疗甲状腺癌患者的疗效和对生活质量的影响。方法选取120例已确诊甲状腺癌患者,随机分为观察组和对照组各60例。两组患者均采用甲状腺全切术,对照组采用甲状腺全切术后常规治疗,观察组患者在手术切除甲状腺4w后联合放射性碘治疗。6个月后对两组患者随访,比较两组患者术后治疗效果和生活质量情况。结果观察组总有效率为91.67%,明显高于对照组的78.33%,差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者生活质量评分明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论对甲状腺癌患者行甲状腺全切联合放射性碘治疗治疗有助于提高治疗有效率和患者生活质量,效果满意,可在临床上推广。

根治性全胃切除后采用空肠间置代胃术与单纯Roux-en-Y吻合术对胃癌患者疗效的影响 下载:74 浏览:265

李磊 《诊断医学》 2018年10期

摘要:
目的研究胃癌患者根治性全胃切除后采用空肠间置代胃术与单纯Roux-en-Y吻合术的应用价值。方法选取我院2015年3月2016年8月收治的84例胃癌患者。按照随机数字法分为研究组和对照组各42例。两组均行根治性全胃切除术治疗。研究组采取空肠间置代胃术,对照组采取单纯Roux-en-Y吻合术,比较两组治疗效果。结果研究组患者总有效率为92.86%,显著高于对照组的80.95%,差异有统计学意义(P<0.05);两组不良反应发生率比较,无显著差异(P>0.05);治疗前两组患者营养状况、生存质量比较,无明显差异(P>0.05),术后1年,研究组营养状况以及生存质量均较对照组明显改善,差异有统计学意义(P<0.05)。结论胃癌患者采取根治性全胃切除后采用空肠间置代胃术治疗效果更好,明显提高患者生存质量,安全性较高,同时改善其营养状况。

保留乳头乳晕复合体乳腺皮下腺体全切术应用于早期乳腺癌患者中的效果探讨 下载:82 浏览:414

莫永泮 杨毅 《诊断医学》 2018年5期

摘要:
目的探讨保留乳头乳晕(NAC)复合体乳腺皮下腺体全切术应用于早期乳腺癌患者中的效果。方法选取2012年1月2014年1月我院收治的96例早期乳腺癌患者。根据患者的治疗意愿分为对照组和研究组各48例。对照组采用乳腺癌改良根治术治疗,研究组采用保留NAC复合体乳腺皮下腺体全切术。观察对比两组术后并发症、乳腺美观度,以及3年后生存率、复发率与远处转移率。结果研究组术后并发症发生率为4.17%,与对照组的8.33%,差异无统计学意义(P>0.05)。研究组术后乳腺美观度的优良率为100.00%,显著高于对照组的83.33%,差异有统计学意义(P<0.05)。两组3年内生存率、复发率与远处转移率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论保留NAC复合体乳腺皮下腺体全切术应用于早期乳腺癌患者中效果较佳,可以有效提高术后乳腺的美观度,适于临床应用。

肺癌中LncRNA的表达及其与预后的相关性 下载:82 浏览:506

王丹1 沙岩1 吴言1 朴雪1 胡俊峰2 《生物技术研究》 2018年11期

摘要:
筛选出在肺癌组织中特异性表达的长链非编码RNA(lncRNA),并探讨其在肺癌中的表达水平与患者预后的相关性。[方法]从癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)下载肺癌临床病理和基因表达谱信息。以|Fold Change|>2和校正后的P值(FDR)<0.05为标准筛选差异表达的lncRNA。对差异表达显著的FOXD3-AS1进行RNA结合蛋白(RBP)预测,并用关联矩阵法构建差异表达的lncRNA-RBP-mRNA共表达网络,继而对共表达mRNA进行Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)通路富集分析;通过Kaplan-Meier Plotter方法研究FOXD3-AS1与预后相关性。[结果]共筛选出1 362个在肺癌中差异表达的lncRNA,其中表达上调的1 184个,表达下调的178个。与FOXD3-AS1具有共表达关系的mRNA共有11个。KEGG分析这些共表达的mRNA主要富集在黏着连接、结肠直肠癌和松弛素信号通路,RBP预测发现FOXD3-AS1可以与人丝氨酸/精氨酸富有剪接因子SRSF1结合。FOXD3-AS1与肺癌患者生存曲线具有极显著相关性(P<0.01)。[结论]SRSF1居于lncRNA-RBP-mRNA共表达网络的核心位置,在肺癌的发生、发展中起到重要的调控作用,有望成为肺癌免疫治疗的分子靶标。差异表达的FOXD3-AS1可以很好地判断肺癌患者的预后,因此,可以作为潜在的肺癌检测分子标志物。

细胞增殖相关基因Nek2的表达与宫颈癌发生的相关性研究 下载:81 浏览:493

玛伊热·努尔艾合麦提1 宋丹1 彭瑞娟1阿木提喀日·马木提1 玛依努尔·尼牙孜2 马正海1 《生物技术研究》 2018年10期

摘要:
探究细胞增殖过程中中心体分离相关基因Nek2(NIMA-related kinase 2,Nek2)的表达水平以及抑制Nek2对宫颈癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力的影响。[方法]采集未经放疗或化疗的正常宫颈组织50例,宫颈癌组织40例,提取标本组织总RNA,实时荧光定量PCR检测Nek2在病样组织中的表达水平,以正常宫颈组织作为对照分析Nek2与宫颈癌发生的相关性。以Nek2 siRNA转染Si Ha、He La和293FT(对照)细胞,CCK-8细胞增殖检测法分析细胞数量和对细胞增殖的抑制率,Transwell小室侵袭和Transwell迁移实验检测细胞侵袭和迁移能力。[结果]Nek2 mRNA在宫颈癌的相对拷贝数(0.0119±0.00601)极显著高于(P<0.01)正常宫颈组织(0.00133±0.00216),上调8.94倍。抑制Nek2的活性可显著抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05),且抑制率显著高于非肿瘤细胞的抑制率。[结论]Nek2在宫颈癌组织中的表达水平显著提高,其通过促进癌细胞增殖、侵袭和迁移来促进肿瘤的发生,可作为宫颈癌治疗的候选靶标。

保乳手术与乳腺癌早期根治手术应用于早期乳腺癌中的疗效观察 下载:85 浏览:498

赵苗苗 周雪红 《诊断医学》 2018年2期

摘要:
目的分析保乳手术与乳腺癌早期根治手术应用于早期乳腺癌中的疗效。方法选取2012年12月2014年4月在我院收治的早期乳腺癌患者118例,随机分为观察组与对照组各59例,观察组给予保乳手术,对照组给予乳腺癌早期根治手术。对比两组患者的术中相关观察指标以及随访情况。结果观察组的手术时间(153.73±19.03)min、术中出血量(246.20±18.67)ml,低于对照组(185.94±18.03)min、(384.20±19.09)ml(P<0.05)。观察组的局部复发率(6.78%)、远处转移率(3.39%)与对照组(6.78%)、(6.78%)相比差异无统计学意义(P>0.05);观察组的3年生存率(96.61%)与对照组(93.22%)相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论对于早期乳腺癌患者来说,应用保乳手术治疗,可明显缩短手术时间,降低术中出血量,且具有手术范围小、恢复快、操作简便,美观度佳等优势,适于临床推广。

PKM2对乳腺癌细胞有氧糖酵解、增殖和凋亡的影响 下载:82 浏览:505

姚奥 范丽娟 黄凤 张慧敏 戴周彤 张子健 李慧 杜庆 项园 廖兴华 《生物技术研究》 2018年8期

摘要:
探讨siRNA介导的PKM2基因沉默对乳腺癌细胞中有氧糖酵解、细胞增殖和凋亡产生的影响。[方法]荧光定量PCR检测乳腺癌细胞转染siRNA-PKM2的效率,葡萄糖和乳酸试剂盒及Western Blot检测细胞的糖酵解能力,CCK-8法检测细胞增殖能力,Western Blot检测细胞的凋亡状况。[结果]与对照组相比,转染PKM2的siRNA 48h后,细胞摄取葡萄糖量及乳酸分泌量均明显降低(P<0.05),两种与糖酵解相关的蛋白Glut1和PFK-1表达量均降低;细胞增殖速率减慢(P<0.05);抗凋亡蛋白bcl-x L蛋白表达降低,促凋亡蛋白caspase-9蛋白表达增多。[结论]siRNA介导的PKM2基因沉默能抑制乳腺癌细胞的有氧糖酵解及增殖能力,并促进细胞凋亡。

舌鳞状细胞癌相关长链非编码RNA的筛选与分析 下载:82 浏览:501

郭继平1 马光1 王志杰2 齐善厚2 郭美红1 《生物技术研究》 2018年6期

摘要:
获得舌鳞状细胞癌组织与正常舌组织中差异表达的长链非编码RNA,并进行功能注释和参与的生理过程进行初步分析。[方法]利用GEO数据库中GES13601的原始芯片数据,采用affymatrix软件套件对芯片数据进行重新均一化和标准化,并筛选差异表达的长链非编码RNA,查找其参与的生理过程。[结果]舌鳞状细胞癌组织与正常舌组织差异表达的基因个数为5 613个。其中在癌组织中上调的为2 951个,下调的共2 662个。从中筛选到长链非编码RNA 38个,上调19个,下调19个。其中的某些参与涉及肌肉、淋巴生长和癌细胞发送等生理过程,但是大部分的功能未知,尚需进一步研究。[结论]筛选到舌鳞状细胞癌相关的38个长链非编码RNA,为寻找早期舌鳞状细胞癌标志物提供了新的参考。

T2毒素的纯化及抗肝癌活性的研究 下载:84 浏览:515

董媛 李玉杰 王虹霞 潘娅楠 梁兰馨 刘月宁 文静 辛本凯 王会岩 《生物技术研究》 2018年5期

摘要:
纯化T2毒素并探讨其抗肝癌活性。[方法]采用萃取法、柱层析法和高效液相色谱法从污染的玉米粒中分离T2毒素,采用MTT法、结晶紫染色法、荧光染色法考察其对两种肝癌细胞数量和形态的影响,划痕实验考察对细胞迁移的影响。[结果]纯化后,T2毒素纯度达到98%;当T2毒素浓度为8μg/mL时,对肝癌细胞的抑制率分别为(95±1.34)%(Hep G2)和(97±2.59)%(SMMC-7721),IC50分别为0.003 77μg/mL和0.003 25μg/mL,且有剂量依赖性。给药24 h后,与对照组相比,贴壁细胞减少,细胞体积缩小,肿瘤细胞迁移能力减弱。[结论]T2毒素能够成为一种潜在的抗肝癌药物。

线粒体转录终止因子2对人子宫颈癌HeLa细胞线粒体基因表达的影响 下载:86 浏览:528

孙美涛1 梅雯1 王唯斯1 自加吉1 杨勇琴1 张晓娟2 余敏3 熊伟1 《生物技术研究》 2018年3期

摘要:
线粒体转录终止因子2(mitochondrial transcription termination factor 2,MTERF2)是通过比较血清饥饿与血清培养的人成纤维细胞基因表达谱差异发现的一个细胞增殖抑制基因。该研究旨在从复制、转录和翻译水平探讨线粒体转录终止因子2对人子宫颈癌He La细胞线粒体基因表达的影响。[方法]利用MTERF2过表达质粒和shRNA干扰表达质粒分别瞬时转染人子宫颈癌He La细胞,通过qRT-PCR检测目的基因MTERF2表达水平的变化。采用荧光定量PCR检测MTERF2对线粒体DNA拷贝量的影响,半定量RT-PCR检测MTERF2对线粒体基因转录水平的影响,Western Blot检测MTERF2线粒体DNA重链编码ND1、CO1蛋白和轻链编码ND6蛋白表达水平的影响。[结果]转染人子宫颈癌He La细胞48 h后,通过荧光定量PCR检测线粒体DNA拷贝量发现,过表达MTERF2基因对线粒体DNA的拷贝量具有显著抑制作用(P<0.05),而敲低MTERF2基因对线粒体DNA拷贝量的影响无显著差异(P>0.05);半定量RT-PCR和Western Blot检测发现,MTERF2基因的过表达会显著降低线粒体编码基因的mRNA水平和线粒体编码蛋白水平(P<0.05),而敲低MTERF2后线粒体转录和翻译水平略有下降,但无显著差异(P>0.05)。[结论]在人子宫颈癌He La细胞中过表达MTERF2显著抑制线粒体DNA的复制水平,并且显著下调线粒体编码基因的转录和翻译水平,而敲低MTERF2后线粒体基因的表达无显著变化。

BI-847325诱导甲状腺癌细胞BCPAP凋亡并促进钠/碘转运体的表达 下载:86 浏览:514

卢乔苗 邓鹏裔 代文莉 王朋田 金玲 崔邦平 《生物技术研究》 2018年2期

摘要:
研究新型MEK抑制剂BI-847325对BRAFV600E突变型甲状腺癌细胞BCPAP增殖的抑制作用以及对凋亡相关蛋白、摄碘蛋白钠/碘转运体(sodium/iodide symporter,NIS)的表达调控。[方法]不同浓度的BI-847325处理BCPAP细胞,CCK-8法测定存活率并计算半抑制浓度IC50;流式细胞术测定细胞凋亡;Western Blot测定MEK 1/2、ERK1/2的活化水平及其下游抗凋亡蛋白BCL-2、促凋亡蛋白BIM、BAX,以及NIS的表达。[结果]BI-847325浓度依赖性抑制BCPAP细胞的增殖,48 h IC50为0.46μmol/L。BI-847325浓度为0.4μmol/L时,BCPAP细胞凋亡率为(26.41±2.23)%,差异极显著(p<0.01);BI-847325可以抑制MEK 1/2、ERK1/2的活化,下调BCL-2、上调BIM和BAX的表达,并上调NIS的表达。[结论]BI-847325通过MEK信号通路诱导甲状腺癌细胞BCPAP细胞凋亡,并上调NIS的表达,有促进131I摄取的潜力。

携带荧光素酶基因肝癌细胞株的构建及在肝癌原位移植瘤模型中应用 下载:87 浏览:510

翟向明 雷川 梁芷冰 李红卫 杜红延 《生物技术研究》 2018年2期

摘要:
构建稳定表达荧光素酶基因的人肝癌细胞株,建立可实时观察的肝癌原位移植瘤模型。[方法]构建含有萤光素酶基因的慢病毒载体,利用慢病毒三质粒系统磷酸钙共转染HEK 293T细胞,收集纯化病毒感染肝癌细胞SMMC7721,嘌呤霉素(puromycin)结合有限稀释法筛选稳定转导细胞株,将细胞原位注射裸鼠肝组织,建立原位肝癌动物模型。[结果]包装纯化的慢病毒悬液的滴度为8.4×106TU/m L,感染肝癌细胞后成功筛选到稳定表达的肝癌细胞株。利用该细胞株成功建立原位注射肝癌裸鼠模型,经活体荧光成像系统观察到肝癌细胞在活体动物体内的分布情况。[结论]荧光素酶肝癌细胞株的成功构建及利用该细胞株建立的原位移植瘤肝癌动物模型为肝癌的治疗研究奠定了基础。

环境健康风险评估在某市河流型饮用水源中的应用 下载:55 浏览:416

王恒1,2 赵文艳1 《环境科学研究》 2020年3期

摘要:
根据某市连续5年生活饮用水的常规监测数据,应用EPA健康风险评价模型对饮用水中的污染物进行健康风险评价,定量评估饮水途径对某市不同人群健康产生的潜在危害。结果表明:致癌物中的砷和非致癌物中的硝酸盐分别为日均暴露剂量最大的化学物,致癌及非致癌化学物通过饮水途径对不同人群所致暴露剂量大小顺序均为:儿童>成年男性>成年女性;致癌物健康风险总值排序为:砷>四氯化碳>三氯甲烷,非致癌物健康风险总值排序为:硝酸盐>氨氮>氟化物>硒>锰>挥发酚>汞。某市河流型饮用水中化学物的人群健康总风险连续5年的风险值都低于最大可接受水平,不会对人体产生较大的健康危害。

纳米载体包载锌酞菁及其衍生物用于光动力抗癌的研究进展 下载:34 浏览:386

卢小鸾1 张荣1 杨培昕1 彭黔荣2 汤陆扬1 杨敏1 《化学研究前沿》 2020年5期

摘要:
锌酞菁(ZnPc)是一种高效的第二代光敏剂,具有良好的光物理和光化学性质,可用于癌症的光动力治疗(PDT)。然而,由于共轭分子间的π-π作用力,锌酞菁溶解性差、结晶趋势强,阻碍了其直接用药。为了克服这个问题,大量纳米载体被研究开发。本文旨在对近五年纳米载体包载锌酞菁及其衍生物用于光动力抗癌的研究进行综述,根据其与锌酞菁及其衍生物的相互作用分为基于聚离子复合的纳米载体、基于物理包封以及化学键合的纳米载体。

基于金-铂纳米颗粒修饰的碳纳米管构建免标记电化学免疫传感器用于CEA检测 下载:42 浏览:442

郑慧雯1 唐典勇2 《化学研究前沿》 2019年4期

摘要:
本文将金-铂双金属纳米颗粒(Au-PtNPs)沉积在羧基化的单壁碳纳米管表面作为基底材料,用以固载癌胚抗原抗体(anti-CEA)。利用anti-CEA与癌胚抗原(CEA)间的特异性识别作用将CEA固载于电极表面,用于降低Au-PtNPs对底物对苯二酚的催化作用,以改变电化学响应信号。通过对比CEA作用前后的电化学信号变化强弱可实现CEA的定量检测。研究发现,在最优实验条件下,CEA的浓度与电化学响应信号呈良好的线性关系。在0.05~80ng·mL-1范围内其检测限为5 pg·mL-1。该免疫传感器不仅展现出良好的选择性、重现性和稳定性,同时能成功用于人体血清样本的分析检测,其结果与酶联免疫方法(ELISA)检测结果相吻合。

ICP-AES测定华蟾素和细胞银两种抗癌药物中的元素 下载:31 浏览:343

吕勇1 李文翠1 辛士刚2 赵震3 王莹1 《化学研究前沿》 2018年2期

摘要:
为了帮助人们对两种抗癌药品有更加清晰的认识和了解,采用微波消解技术对两种抗癌药品华蟾素胶囊和细胞银进行消解。以ICP-AES方法测定其中Na、Mg、Fe、Al、Sr、Ni、Cr、Au、Mo、Hg、Pb、Ag、Si、Ca、Zn、Se等元素的含量。该方法线性范围宽、操作简单、快速、灵敏度高、准确性好,且能够多元素同时测定。回收率在95.2%-106.1%之间,相对标准偏差小于4.99%。实验结果表明两种药品都含有丰富的多种人体所需元素,但是两种药品中也检测出了几种对人体不益的元素,且含量也较高。两种药物具有不同的成分和作用,在购买和使用产品时要慎重。

乳腺癌新辅助化疗后降期患者改良根治术后放射治疗的效果观察 下载:54 浏览:209

轩闻涛 《新闻传播研究》 2025年1期

摘要:
探究乳腺癌患者在实施乳腺癌新辅助化疗干预后处于降期再开展改良根治术后放射治疗价值。方法:项目研究划分30例对照组及30例观察组均来至2021.01至2022.01时间段(年龄31~54岁),治疗方式依次为新辅助化疗+改良根治术+术后辅助化疗、新辅助化疗+改良根治术+术后辅助化疗+放射治疗,就临床资料差异分析。结果:与对照组治疗后比较,观察组生存质量评分显著偏高,治疗总有效率高,血清学指标水平显著偏低,安全性与生存率均显著偏高,(p<0.05)。结论:新辅助化疗+改良根治术+术后辅助化疗+放射治疗对于乳腺癌患者而言至关重要,经治疗后不仅能够保障患者生存质量,同时还能强化最终治疗效果,提升患者治疗安全性与生存率,预防恶心呕吐、脱发或者是心脏毒性等并发症出现,保障患者个人良好权益。
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