文章-世纪中文出版社

一种快速高效的DNA提取方法及其在qPCR检测金黄色葡萄球菌中的应用下载：48 浏览：440

田小兰1 冯俊丽1,2 汪艺1 《中国食品与营养》 2019年8期

摘要:

探究一种高效快速便捷地提取菌体DNA的方法,并将其应用于金黄色葡萄球菌的定量检测。运用热裂解过柱法和直接热裂解法提取菌体DNA,同时用试剂盒法提取DNA作为对比。用qPCR检测技术对样本DNA的提取效果进行验证,并将最优的提取方法应用于纯培养的和人工污染的鱼样品中金黄色葡萄球菌的检测。qPCR检测结果显示热裂解过柱法仅比试剂盒法低一个梯度,体现了热裂解过柱法良好的稳定性、高效性和实用性。热裂解过柱法可高效提取样品中金黄色葡萄球菌的DNA,结合qPCR技术,其检测灵敏度可达1.04×10～2 cfu/m L。

金黄色葡萄球菌前噬菌体PT1028ORF001基因的生物信息学分析及原核表达下载：76 浏览：495

何文迪1 陈新江1 吴立山2 盛佩群1 吴玲净1 陈逸璐1 羊晓敏1 吴佳艳1 李文通1 《生物技术研究》 2019年12期

摘要:

对金黄色葡萄球菌前噬菌体的PT1028ORF001基因进行生物信息学分析,并进行原核表达,为金黄色葡萄球菌前噬菌体基因的功能研究提供参考数据。[方法]将金黄色葡萄球菌ATCC 25923菌株功能未知的基因通过BLAST比对,从中发现了一个噬菌体PT1028的基因序列,将该基因命名为PT1028ORF001。使用Protparam、Prot Comp9. 0、NCBI保守结构域数据库、TMpred、Net Phos 3. 1 Server、PSIPRED、SWISS-MODEL等在线生物信息软件,分析PT1028ORF001蛋白的理化性质、亚细胞定位、保守结构域、跨膜区域、磷酸化修饰位点、二级结构和三维结构。用自行设计的引物扩增PT1028ORF001基因,扩增产物经酶切回收后与原核表达载体p ET-32a相连接,构建重组表达质粒,将该重组质粒转化E. coli TG1内,经菌落PCR鉴定后,增菌培养并提取质粒,再转化E. coli BL21 (DE3),经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE检测分析。[结果]PT1028ORF001蛋白由569个氨基酸组成,相对分子质量为64 671. 34 Da,等电点为8. 07,负电荷氨基酸残基总数为71个,正电荷氨基酸总数为73个,分子式:C2894H4530N762O885S16,原子总数9087个,是一种稳定的亲水蛋白质,定位于细胞膜上,与功能未知的DUF927蛋白超家族具有高度同源性,第202-223、240-258位氨基酸分别形成一个典型的跨膜区,潜在的磷酸化修饰位点共71个,二级结构中ɑ螺旋占比最高(40. 60%),其次是无规则卷曲(39. 89%),三维空间结构与二级结构预测结果相符。成功构建了表达载体p ET-32a(+)-PT1028ORF001,经IPTG诱导后重组蛋白获得了表达,蛋白相对分子质量为82. 4 k Da。[结论]PT1028ORF001基因的生物信息学分析结果以及该基因的成功克隆与表达,为深入研究该蛋白及其他金黄色葡萄球菌前噬菌体基因的功能奠定了一定基础。

金黄色葡萄球菌ymdB基因的克隆表达及生物信息学分析下载：71 浏览：491

夏佳音1 陈新江2 李文通2 吴佳艳2 羊晓敏2 《生物技术研究》 2019年9期

摘要:

克隆、表达金黄色葡萄球菌ymd B基因,并对其编码产物进行生物信息学分析。[方法]以金黄色葡萄球菌ATCC 25923菌株的基因组DNA为模板,用聚合酶链式反应扩增ymd B基因,将扩增基因酶切后与表达载体pET-32a(+)连接,构建重组质粒并转化大肠杆菌TG1,增菌培养后提取质粒,经PCR、基因测序鉴定后,再转化大肠杆菌BL21(DE3),对转化菌株进行诱导后,进行10%SDS-PAGE分析。使用Protparam、PSORT、CDD、Signal P 4. 1、TMpred、Net Phos 3. 1 Server、PSIPRED、SWISS-MODEL等软件,分析YmdB蛋白的氨基酸数目、相对分子质量、理论等电点、带电荷氨基酸总数、半衰期、稳定性、疏水性、亚细胞定位、保守结构域、信号肽、跨膜区、磷酸化位点、二级结构、三维结构等。[结果]构建了表达载体pET-32a(+)-ymd B,在37℃经异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后获得表达。YmdB蛋白由266个氨基酸组成,相对分子质量为30134. 53Da,等电点为6. 23,正电荷氨基酸总数为33个,负电荷氨基酸总数为35个,在大肠杆菌内的半衰期为10 h以上,是稳定的亲水蛋白质,定位于细胞质中,与YmdB蛋白家族具有相似的保守结构域,没有信号肽,有一个跨膜区和14个磷酸化位点,二级结构中ɑ螺旋、β折叠和无规则卷曲分别占42. 11%、9. 40%、48. 49%,三维空间结构与二级结构预测结果大致相同。[结论]成功克隆、表达了金黄色葡萄球菌ymdB基因,并对YmdB蛋白进行了生物信息学分析,为深入研究该蛋白的分子作用机理打下一定基础。

南京某医院成人耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检出情况及耐药基因分析下载：92 浏览：482

张利1 孙林春2 《国际检验医学》 2019年9期

摘要:

目的了解江苏省中西医结合医院2011—2017年成人耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)临床分离株的检出情况及其耐药基因，为临床合理用药提供参考依据。方法采用美国临床实验室标准化协会(CLSI)推荐方法鉴定MRSA。采用纸片扩散法对MRSA菌株进行药物敏感性试验。采用聚合酶链反应(PCR)检测β-内酰胺类耐药基因mecA，氨基糖苷修饰酶基因aac(6′)/aph(2″)、aph(3)-Ⅲ，大环内酯类23s rRNA甲基化酶基因ermA/C，四环素类核糖体保护蛋白基因tetM/K，喹诺酮类耐药基因qnrA/B和耐消毒剂基因qacA/B。结果 MRSA的总检出率为31.95%，主要分离自痰液和创口分泌物样本；检出率居前3位的科室依次为呼吸科、外科和重症监护病房。未检出对万古霉素、利奈唑胺和替加环素耐药的MRSA菌株；仅有0.49%的MRSA对奎奴普汀耐药，对复方磺胺甲噁唑、利福平、环丙沙星、四环素、庆大霉素、克林霉素、红霉素的耐药率分别为11.18%、11.57%、21.47%、63.63%、44.31%、59.41%、62.35%。多重耐药基因mecA阳性率为100%，aac(6′)/aph(2″)、aph(3)-Ⅲ、ermA/C、tetM/K、qnrA/B、qacA/B基因检出率分别为36.67%、27.94%、68.43%、57.35%、23.63%和52.45%。结论 2011—2017年江苏省中西医结合医院成人MRSA多重耐药基因检出率高。MRSA对多种抗菌药物都不同程度耐药，临床应以药物敏感性试验结果为合理用药的最主要依据。

单君1 吉云兰2 雷晓玲1 许惠芬3 王林华3 吴娟3 李静逸1 沈王琴1 2019年6期

摘要:

检索和分析预防耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)呼吸机相关性肺炎的证据,并对最佳证据进行总结。方法通过计算机检索PubMed、Embase、Cochrane循证医学数据库、BMJ-Clinical Evidence、BMJ-Best Practice、uptodate、JBI循证卫生保健国际合作中心图书馆、加拿大安大略护理学会网站、美国国立指南库、英国国家临床优化研究所、中国知网、维普、万方数据库、中国生物医学数据库等,包括所有指南、证据总结、最佳实践信息册、专家共识、系统评价及原始研究。检索时段为建库至2018年6月。由3名研究者对文献质量进行评价,对符合质量标准的文献进行证据提取。结果最终纳入文献9篇,其中1篇中文文献,8篇英文文献;实验研究1篇,队列研究1篇,系统评价5篇,专家共识1篇,指南1篇。总结的最佳证据如下:15 ml 2%氯己定进行口腔冲洗,2次/d,直至患者出院;每日氯己定擦浴;患者入住ICU时及24 h内采集鼻和咽拭子进行MRSA主动筛查;对于鼻腔有MRSA定植的患者,采用莫匹罗星软膏鼻内涂抹;手卫生依从性高及有规范的感染控制措施的医疗机构,可考虑终止保护性隔离;医院环境与医疗设备的清洁和消毒。结论建议临床医护人员对ICU患者进行MRSA的主动筛查,对早期定植患者进行去定植处理,机械通气早期进行氯己定口腔冲洗,保持环境清洁,预防MRSA呼吸机相关性肺炎的发生。

化脓性感染金黄色葡萄球菌耐药性及分子流行型别分析下载：86 浏览：496

周珊刘家云马越云周柯周磊郝晓柯徐修礼《国际检验医学》 2019年6期

摘要:

目的分析2017年上半年西京医院化脓性感染金黄色葡萄球菌的耐药性及分子流行型别，为临床合理用药提供依据。方法收集2017年1—6月分离自化脓性感染患者脓性分泌物样本的金黄色葡萄球菌，采用Vitek 2 Compact全自动微生物鉴定系统进行菌株鉴定及药物敏感性试验，采用多位点序列分型(MLST)联合spa分型方法进行分子流行病学分型。结果共分离金黄色葡萄球菌171株，其中社区感染113株，医院感染58株。医院感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)分离率(62.07%)明显高于社区感染(30.97%)。分子分型结果显示，医院感染和社区感染MRSA分别以ST239-t030和ST239-t037为主。结论 2017年上半年西京医院化脓性感染金黄葡萄球菌医院感染和社区感染在多个方面存在明显差异。MRSA克隆型别相对比较集中，医院感染存在院内播散现象。应加强医院感染控制力度，降低医院感染发生率。

苍南县革兰阳性菌监测状况与耐药性分析下载：91 浏览：504

杨绍佑1 黄孟启2 曾松芳3 林元爽1 方光辉1 《国际检验医学》 2019年5期

摘要:

目的探讨苍南县革兰阳性菌分布情况，并分析其耐药性，为临床积极预防与控制医院感染提供参考依据。方法对2016年1月—2017年12月苍南县第二人民医院分离的517株革兰阳性菌、苍南县第三人民医院分离的463株革兰阳性菌和苍南县人民医院分离的869株革兰阳性菌进行菌种鉴定和体外药物敏感性试验。结果 1 849株革兰阳性菌中，金黄色葡萄球菌718株(38.83%)、表皮葡萄球菌431株(23.31%)、溶血葡萄球菌240株(12.98%)、肺炎链球菌60株(3.24%)、无乳链球菌100株(5.41%)、粪肠球菌200株(10.82%)、屎肠球菌100株(5.41%)。718株金黄色葡萄球菌中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)为481株(66.99%)。所有葡萄球菌均对替加环素和利奈唑胺敏感。粪肠球菌对万古霉素和替加环素均敏感(100.0%)，对利奈唑胺的耐药率为2.0%。屎肠球菌对利奈唑胺及替加环素的耐药率均为1.0%。肺炎链球菌对替加环素和万古霉素均敏感(100.0%)。结论苍南县革兰阳性细菌中主要以金黄色葡萄球菌为主，其次为表皮葡萄球菌；且MRSA高达66.99%，肠球菌也存在不同程度的耐药性。

金黄色葡萄球菌β-内酰胺酶表型检测方法比较下载：85 浏览：517

陆瀚文周万青张之烽沈瀚《国际检验医学》 2019年4期

摘要:

目的评价几种金黄色葡萄球菌β-内酰胺酶表型检测方法的差异。方法收集自动化仪器检测青霉素最小抑菌浓度(MIC)≤0.12和≥0.25μg/mL的金黄色葡萄球菌38株和15株。分别采用青霉素抑菌圈边缘试验(P1、P10)、头孢硝噻吩显色试验和"四叶草"试验检测β-内酰胺酶。采用聚合酶链反应(PCR)扩增blaZ基因，并以基因检测方法为标准，评价几种检测方法的差异。结果 38株MIC≤0.12μg/mL的菌株中有2株抑菌圈直径(P10)为27 mm。检出blaZ基因阳性菌株15株，分别为2株青霉素MIC=0.12μg/mL和13株青霉素MIC≥0.25μg/mL的菌株。15株blaZ基因检测阳性菌株青霉素抑菌圈边缘试验均为阳性，敏感性为100%；头孢硝噻吩显色试验和"四叶草"试验阳性各14株，敏感性为93.3%。38株blaZ基因检测阴性的菌株中，"四叶草"试验阳性3株，特异性为92.1%；头孢硝噻吩显色试验和青霉素抑菌圈边缘试验阳性各为2株，特异性为94.7%。结论几种常见β-内酰胺酶表型检测方法均具有较高的敏感性和特异性，临床可根据实际需求进行选择。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌对莫匹罗星、夫西地酸和瑞他莫林的耐药性分析下载：101 浏览：515

陈雯静何春燕杨涵赵焕强崔泽林汤荣刘庆中《国际检验医学》 2019年3期

摘要:

目的分析耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)临床菌株对局部抗菌药物莫匹罗星、夫西地酸和瑞他莫林的耐药情况。方法收集临床分离的1 037株MRSA，用微量肉汤稀释法测定其对莫匹罗星、夫西地酸和瑞他莫林的最小抑菌浓度(MIC)，筛选对3种抗菌药物耐药的菌株，用Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统检测耐莫匹罗星、夫西地酸和瑞他莫林菌株对其他临床常用抗菌药物的耐药性。结果1037株MRSA中，有54株对莫匹罗星耐药(5.2%)，且以高水平耐药(MuH)为主(85.2%)；9株(0.9%)对夫西地酸耐药的MRSA菌株以低水平耐药(FAL)居多(77.8%)；仅2株(0.2%)对瑞他莫林耐药。对3种抗菌药物耐药的MRSA对氨基糖苷类、大环内酯类、林可酰胺类及氟喹诺酮类等临床常用抗菌药物也表现出较高的耐药率。结论临床分离的MRSA对莫匹罗星、夫西地酸、瑞他莫林等局部抗菌药物具有较低的耐药率，但少量耐药菌株的存在提示应加强金黄色葡萄球菌对该类药物的耐药性监测工作。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的SCCmec分型和耐药特点以及同源性分析下载：87 浏览：499

张宇琼1 张仪2 陆文香1 高晶晶1 张宇蔺1 朱琴芳1 袁垆1 徐卫东1 《预防医学杂志》 2018年3期

摘要:

目的对临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)进行葡萄球菌染色体mec盒(SCCmec)分型并了解其耐药性,同时结合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术对其进行同源性分析。方法收集2016年鉴定出的100株MRSA,同时加做K-B法验证耐药表型。普通PCR检测mec A基因,多重PCR进行SCCmec基因分型,MALDI-Biotyper软件进行同源性分析。结果 SCCmec分型为:SCCmecⅡ型38株(38%),SCCmecⅢ型9株(9%),SCCmecⅣ型12株(12%),SCCmec V型35株(35%),未分型6株(6%)。同源性分析结果将100株MRSA分为MS1和MS2两大群,其中MS1又分为MS1a和MS1b两个亚群。各型MRSA对替考拉宁、利奈唑胺和万古霉素的耐药率均为0,MS2群的MRSA对其他非β-内酰胺类抗生素的耐药率明显高于MS1群。结论临床分离MRSA以Ⅱ型和V型为主,多重耐药较为严重,MALDI-TOF MS技术可以准确鉴定金黄色葡萄球菌,结合SCCmec分型技术可以有效区分Ⅴ型社区感染菌株和Ⅱ型院内感染菌株。

探究食品中金黄色葡萄球菌定量检测的不确定度评定下载：95 浏览：1074

鄂楠楠《中国食品与营养》 2024年5期

摘要:

金黄色葡萄球菌是常见于食品的病菌之一，对人体危害极大，因此要基于产品采取针对性方式进行检测，了解病菌数量与分布情况。基于此，文章围绕食品中金黄色葡萄球菌定量检测的不确定度评定进行探讨。首先，对目前常用于金黄色葡萄球菌定量检测的方法加以概括，介绍分离培养法操作流程，阐述免疫学方法检测原理，深究选择增菌与PCR技术结合，分析不确定来源对检测结果造成的影响，最后详述不确定度评定方法与步骤。希望以下论述可以起到借鉴作用，为从业人员提供参考。

对多重耐药菌的重点细化分析对临床用药及预防感染的意义下载：51 浏览：688

王美光苏丹冯蕾杨艳东王愉涵《医学研究杂志》 2024年1期

摘要:

深入分析多重耐药菌的分布及其对不同抗菌药物的耐药性。方法：研究对象为2023年1月至12月间我院收集的703株多重耐药菌，涉及男女患者共703人，年龄范围7至89岁，研究方法包括细菌培养、鉴定及药敏试验，主要采用纸片扩散法，观察指标为多重耐药菌的分布模式及其对抗菌药物的耐药性反应。结果：在703株菌中，ESBL菌株数量最多，占比63%，其次为耐碳青霉烯鲍曼菌（17%）和CRE菌株（11%）；在多重耐药菌的分布上，革兰阴性菌（96%）占主导地位，主要包括大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和鲍曼不动杆菌；耐药性分析显示，大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对多数抗菌药物表现出较高耐药性，而金黄色葡萄球菌对苯唑西林和四环素耐药率最高。结论：多重耐药菌对于临床中大多数常用抗菌药物均存在耐药性，医院应加强细菌耐药监测工作，减少抗生素药物的滥用，在降低细菌耐药方面性做出更多努力，并重多重耐药菌的感染预防工作。

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