摘要:
探讨胶质瘤干细胞(GSC)与胶质瘤非干细胞(nGSC)在生物学特性及相关蛋白表达方面的差异。方法体外培养GSC1、GSC2及nGSC1、nGSC2, 培养2、4、6、8、10和12 d后采用CCK8法检测4种细胞的增殖能力;培养2 d后采用CCK8法检测细胞对替莫唑胺(TMZ)的敏感性;粘附实验检测细胞的粘附能力;Transwell实验检测细胞的迁移、侵袭能力;明胶酶谱实验检测细胞分泌基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的活性;Western blotting、免疫荧光染色检测细胞Notchl、表皮生长因子受体(EGFR)蛋白的表达。结果培养4、6、8、10和12 d时nGSC1细胞存活率均高于GSC1, nGSC2细胞存活率均高于GSC2, 差异均有统计学意义(P<0.05);TMZ对GSC1、nGSC1和GSC2、nGSC2的半数抑制浓度(IC50)分别为(1536.0±17.67) μmol/L、(514.5±13.44) μmol/L, (2543.0±39.87) μmol/L、(889.6±17.43) μmol/L;GSC1粘附于细胞外纤维链接蛋白、胶原蛋白I的细胞数均多于nGSC1, GSC2粘附于纤维链接蛋白、胶原蛋白I的细胞数均多于nGSC2, 差异均有统计学意义(P<0.05);GSC1迁移12、24 h的细胞数均多于nGSC1, GSC2迁移12、24 h的细胞数均多于nGSC2, 差异均有统计学意义(P<0.05);GSC1侵袭24、36 h的细胞数多于nGSC1, GSC2侵袭24、36 h的细胞数多于nGSC2, 差异均有统计学意义(P<0.05);GSC1分泌MMP-2的活性高于nGSC1, GSC2分泌MMP-2的活性高于nGSC2, 差异均有统计学意义(P<0.05);Western blotting检测显示GSC1中EGFR/Notch1蛋白相对表达量低于nGSC1, GSC2中EGFR/Notch1蛋白相对表达量低于nGSC2, 差异均有统计学意义(P<0.05);免疫荧光染色结果与Western blotting检测结果一致, EGFR蛋白在nGSC中强表达, 在GSC中弱表达。Notch1蛋白在GSC中强表达, 在nGSC中弱表达。结论相对于高表达EGFR并具有较强增殖能力的nGSC, 高表达Notch1的GSC分泌的MMP-2活性高, 具有更强的粘附、迁移、侵袭能力, 这可能是胶质瘤治疗抵抗和复发的重要原因。
