对于呼吸道感染病症本身来说，与人的身体素质和日常护理有直接关系，其中，急性上呼吸道感染的常见临床病症有咳嗽、恶心、头痛、发热、咽痛、鼻塞等，而下呼吸道感染的主要临床表现为剧烈咳嗽，甚至会出现支气管痉挛。导致呼吸道感染的主要原因，与细菌性感染和病毒性感染有关，但由于两者早期症状相似，需要通过病原体检查的方式对呼吸道感染病原体种类进行快速确定。基于此，本文共选择了400例在呼吸道感染患者作为研究对象，下面是详细资料及方法。
1 资料与方法
1.1 一般资料
本次研究共选择了400例在呼吸道疾病患者，都采取呼吸道病原体核酸检测，使用方法为深部疾液样本合采集咽拭子，分析呼吸道疾病病原体核酸检测结果。在400例患者中，主要的临床症状为咳嗽咳痰、咽喉痛、发热、呼吸不畅，所有患者均进行临床查体和影像学检查，确定呼吸道感染。其中，上呼吸道感染患者为123例，下呼吸道感染患者为277例。
1.2 方法
在为患者进行检测前，需要对其开展简单的知识宣教，提高患者的配合度。
1.2.1标本采集：在采集标本时，采用的是咽拭子，将无菌棉拭子对患者双咽扁桃体及咽后壁拭取。在采集的过程中，让患者发出“啊”音，对患者扁桃体、咽及两腭弓使用拭子迅速、轻柔擦拭。并对收集的标本时间进行标注。收集痰液时，于清晨漱口，将咳深部痰于无菌痰盒中，密闭送检。对于呼吸道病原菌核酸检测，采用了全自动核酸提取仪、实时定量PCR扩增仪等仪器。如果无法及时送检，需要在-20℃的环境下保存标本。对于呼吸道病原体核酸检测来说，需要严格按照说明书的要求进行操作，涉及到的病原体类型有肺炎支原体（MP）、腺病毒（AdV）、呼吸道合胞病毒（RSV）、乙型流感病毒（FluB）、甲型流感病毒（FluA）。
1.2.2PCR：在进行呼吸道病原体核酸检测时，采用的是多重荧光PCR法联检方式，使用荧光定量PCR仪和相关技术，快速检测样本中呼吸道病原体核酸。
1.2.3呼吸道病原体实验室检测项目：（1）炎性标志物检测。在发生呼吸道感染后，会在人体内释放一系列的炎性因子，这些因子会随着临床的变化而不断发生改变，为了对感染类型及时进行鉴别，可以通过炎性标志物检测方式进行区分，如：SAA和CRP。在感染呼吸道疾病后，无论是SAA还是CRP都会呈现升高的态势，但如果单纯是CRP升高，就可以判断为呼吸道细菌感染。但如果两者都呈现升高态势，SAA升高幅度更大，可以判断为下呼吸道病毒感染。（2）病原体抗原检测。在早期阶段，可以通过呼吸道病原体抗原检测方式，对病毒类型进行明确。（3）病原体核酸检测。在后疫情时代，我们对核酸检测已经非常熟悉，可以在早期进行呼吸道病原体核酸检测。（4）抗体检测。对于已经产生呼吸道病症7-10天的患者，可以进行抗体检测，有非常显著的临床应用价值。针对呼吸道疾病来说，如果是急性呼吸道感染，会产生较大的并发症，而且病程较长，需要采取多样化检测手段，尽早确定呼吸道感染病原体。
1.2.4结合症状进行判断：对患者的呼吸道病原体类型进行快速判断 ，可以采取照片检查、胸部透视等方式，再结合患者的咽鼻部发炎情况、流行情况、症状、病史等信息进行综合判断。比如，对于细菌性急性呼吸道感染患者来说，临床症状主要有怕冷、发热、咽喉痛、高烧（往往在39摄氏度以上）。在进行检查的过程中，可以看到患者扁桃体有明显的充血、肿大等情况，按压有一定的痛感，肺部无明显现象。
1.3 观察指标
对400例呼吸道感染病原体核酸检测结果类型进行统计，对差异进行观察和总结，分析对多重感染病原体的上下呼吸道疾病情况。
2 结果
通过监测得出，在400份样本中，检测到病原体的份数有354份，检出率为88.5%，其中，检测到两种及以上病原体的例数为72，占比为20.34%。
2.1 上呼吸道感染病原体结果
通过检测上呼吸道感染的病原体结果，感染病例共56例，共检测到的病原体样本为42例，检出率为75.0%。导致上呼吸道感染的病原体，占比最大的是乙型流感病毒，占比达到44.64%；其次是呼吸道合胞病毒，占比为28.5%，详情见表1所示。
表1 上呼吸道疾病病原体核酸检测结果
2.2 下呼吸道感染病原体结果
通过检测下呼吸道感染的病原体结果，感染病例共298例，共检测到的病原体样本为270例，检出率为90.60%。导致下呼吸道感染的病原体，占比最大的是肺炎链球菌，占比达到了34.44%；其次是呼吸道合胞病毒，占比为29.63%，详情见表2所示。
表2 下呼吸道疾病病原体核酸检测结果
2.3 多重病原体感染结果
通过实验检测结果得知，存在两种及以上病原体混合感染的例数共有72例，占比为20.34%。最为常见的多种感染有肺炎链球菌、呼吸道合胞病毒、肺炎支原体等混合感染，详情见表3所示。
表3 不同感染部位多重病原体感染
3 讨论
作为最常见的一种感染性疾病，呼吸道感染可以发生在呼吸道任何位置。作为全球的公共卫生难题，呼吸道感染治愈难度较大，感染群体庞大，严重者可直接威胁到患者的身体健康，而且预后不佳。基于此，需要对呼吸道病原体快速准确找出，近些年，在呼吸道病原体检测中应用核酸检测技术，可以为临床提供更加准确的实验室依据。
通过本次研究结果显示，在选择的400例呼吸道疾病患者中，上呼吸道患者为56例，共检测到的病原体样本为42例，检出率为75.0%。导致上呼吸道感染的病原体，占比最大的是乙型流感病毒，占比达到了44.64%；其次是呼吸道合胞病毒，占比为28.5%。下呼吸道患者为298例，共检测到的病原体样本为270例，检出率为90.60%。导致下呼吸道感染的病原体，占比最大的是肺炎链球菌，占比达到34.44%；其次是呼吸道合胞病毒，占比为29.63%。应用实时荧光多重PCR技术开展呼吸道病原体核酸检测，在病毒检测上有较高的检出率和敏感性，相比较传统的细菌培养法有更加突出的优势。但对一些呼吸道感染中的致病菌。在细菌检测种类上相对较少。
呼吸道感染的主要病原体为病毒，通过有效的检查手段，对抗生素进行合理运用，尽可能对细菌耐药的产生进行遏制。除此之外，还存在病原体混合感染的情况。本次研究结果显示，存在两种及以上病原体混合感染的例数共有72例，占比为20.34%。最为常见的多种感染有肺炎链球菌、呼吸道合胞病毒、肺炎支原体等。其中，呼吸道合胞病毒会导致患者出现下呼吸道微生态紊乱的情况，改变人体的菌落构成，导致临床症状越来越严重。比如，腺病毒血清型多样会导致肺部严重感染，在临床上的主要表现为肾病、肝大等，会引发呼吸衰竭。对于临床高度怀疑感染患者和临床症状不符患者，需要进行二次送检，尽可能提高核酸检测的准确性，结合影像学检查结果、实验室监测等减少漏诊率、误诊率的发生。为了确保本次研究结果的准确性，在开展实时荧光多重PCR检测时，首先确保操作人员有丰富的实践经验，提高引物的准确性，尽可能降低外界因素带来的感染，为呼吸道病原体感染情况提供更加周期内的实验室依据。
总而言之，针对感染呼吸道疾病的患者来说，想要快速准确确定呼吸道感染病原体的类型和感染证据，需要采取辅助临床诊断，如本文应用的实时荧光多重PCR技术，能够对医护人员的诊治提供更加准确的参考依据，为合理治疗提供重要支持。
4 综述
随着科学技术的快速发展，越来越多的诊疗技术和设备开始广泛应用，对病原体可以快速诊断，为医生对呼吸道病的治疗提供了更精准的参考。
4.1 病原微生物宏基因组检测
病原微生物宏基因组检测（mNGS）相比较传统的微生物培养技术来说，可以对标本中的核酸进行无偏倚性的高通量测序提取，对人源序列去除，采用生物信息分析对比病原数据和其余序列，对混合感染、疑难感染、急危重症上有非常显著的应用优势。将mNGS应用于呼吸系统感染诊断上，可以在早期发现呼吸道病原体。比如，应用mNGS可以针对支气管肺泡灌洗液样本提供更加准确的肺部感染信息，并将疾病中呼吸道微生物群的变化显示出来。对于mNGS技术来说 ，优势在于周转时间短、对未知病原确认快，有较高的可靠性和准确性，对呼吸道感染问题可以妥善解决。但缺陷在于检测费用高，实际在应用时会受到新耐受基因或突变等因素的影响，还需要结合药敏试验。
4.2 CRISPR核酸检测技术
对于CRISPR核酸检测技术来说，基于规律间隔成簇短回文重复序列，可以对高度特异的核酸序列进行识别，联合使用高灵敏小型生物传感器起到经济、灵敏和快速检测的效果。现阶段，CRISPR应用于结核病诊断中也起到了良好的效果，有相关研究显示，CRISPR的诊断性能更强，是目前新的肺外结核病和肺结核病的诊断技术。但CRISPR核酸检测技术会受到多方面因素的影响，比如，采集信息方法受到的限制较多，在进行检测的过程中可能出现交叉反应或互相干扰；另外，对系统中的Cas效应蛋白的切割活性，会受到pH值、温度、离子水平等相关因素的影响，从而对检测结果的可靠性造成较大影响。
4.3 基因芯片技术
被称为基因芯片技术的DNA微阵列，核心在于杂交测序，可以对微型磁珠、硅片、玻片等基质材料进行核酸探针固定，通过样品杂交和互补杂交，对样品的遗传信息获取，从而对样品核酸序列进行明确。作为多学科交叉产物，基因芯片技术可以在基层结核病实验室开展大规模评估，在特异性和敏感性上都较高。相比较传统的基因芯片技术来说，DNA微阵列的优势在于操作便捷、灵敏度高、无污染，并实现了可视化检测。
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