基于一种新的提取方法的竹黄活性成分对TNF-α介导的炎症反应的影响
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邱德稳
林蓉蓉
曾俊萍
《医学研究杂志》
2023年1期
摘要:
目的：通过一种新的提取方法获得竹黄活性组分，并检测其对相关炎症因子及NF-κB 的表达，探索竹黄对TNF-α介导炎症反应的影响。方法：称取干燥竹黄200g，使用微型植物粉碎机粉碎，过50目筛，获得竹黄粗粉，将其置于70℃纯水抽提2次，每次12小时。合并水提取液，减压回收至80ml，加乙醇至醇浓度为80%， 静置6小时，抽滤，得滤渣D，水提后药渣部分用80%乙醇回流提取2次(均为6倍量)，合并醇提取液，减压回收溶剂得流浸膏，聚酰胺柱层析，分别以水、40%乙醇、95乙醇洗脱，减压回收溶剂，分别得水洗部分C、40%醇洗部分A和95%醇洗部分B。精确称量A、B、C、D各28mg，50%乙醇溶解并定容至14ml，22μm滤器过滤，配制成2mg/ml储存液，4℃保存。根据实验要求梯度稀释。再通过体外细胞培养的方法，利用小鼠成纤维细胞L929筛选出具有细胞增殖抑制作用的组分并确定50%抑制率浓度(IC50)，Hoehest荧光染色观察细胞形态，流式细胞仪检测细胞凋亡；以人脐静脉内皮细胞(HUVECs)为模型，通过竹黄活性组分作用后，检测细胞内粘附分子-1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)、E-选择素及IKK-α和NF-κB p65的表达。结果：相比于实验组，空白组和对照组的IC50值显著更高，且抑制率显著更低，P＜0.05。表明竹黄提取物的细胞毒性较小，且对TNF-α诱导的L929细胞生长抑制具有显著作用。与正常培养组相比，TNF-α组和TNF-α+药物组的ICAM-1、VCAM-1、E选择素、NF-κB p65的表达水平均显著更高，而IKK-α和NF-κB mRNA的表达水平显著更低，P＜0.05；但与TNF-α组相比，TNF-α+药物组的ICAM-1、VCAM-1、E选择素、NF-κB p65的表达水平则显著更低，而IKK-α和NF-κB mRNA的表达水平显著更高，P＜0.05。表明竹黄提取物对TNF-α诱导炎症反应具有抑制作用。结论：竹黄活性成分对TNF-α介导的炎症反应具有一定的抑制作用，其可能的作用途径主要为降低NF-κB蛋白表达水平，阻断NF-κB通路，减少血清黏附分子产生，降低IKK活性等来减轻炎症反应。
