文章-世纪中文出版社

利妥昔单克隆抗体局部注射联合甲基强地松龙治疗甲状腺相关性眼病的临床疗效分析下载：53 浏览：363

王萍张少波张琼李养军《中国眼科杂志》 2020年6期

摘要:

目的探讨眶内局部注射利妥昔单克隆抗体联合全身应用甲基强地松龙治疗甲状腺相关性眼病(TAO)的临床效果。方法回顾性分析2017年3月至2019年4月就诊于我院的中、重度活动期TAO患者107例。入院后完善相关检查，并进行临床活动性(CAS)评分。给予全身甲基强地松龙静滴治疗，500 mg/周，共6周，后减量为250 mg/周，共6周；同时给予眼眶内注射利妥昔单克隆抗体注射液20 mg，1次/周，共8周。治疗期间及治疗后，详细记录CAS评分。随访3～25个月，平均13.2个月。结果完成全部疗程的患者共89例(男性45例，女性44例)，平均年龄34.7岁(17～76岁)。治疗前CAS平均7.4分(7～9分)；治疗第3周后平均CAS评分5.5分，有效率85%；治疗结束后，CAS评分平均2.9分，有效率90.3%。10%的患者在治疗结束后3个月内病情逐渐转为非活动期。其中3例(5只眼)行眶减压手术的患者，术后平均3.1个月病情复发，单独眶内注射利妥昔单克隆抗体8周，病情完全控制。55%的患者除首次注射后有轻度低热的不良反应外，其余患者均未见异常。随访至今，所有患者病情未见复发。结论利妥昔单克隆抗体抗局部注射联合全身应用甲基强地松龙更能提高中、重度TAO的治愈率，减少病情复发，甚至对眶减压术后复发的患者有良好的效果。

多发性骨髓瘤病情演变和早期诊断研究进展下载：70 浏览：445

魏宇君黄仲夏《肿瘤研究》 2020年3期

摘要:

多发性骨髓瘤(MM)是浆细胞恶性增殖性疾病，引起高钙血症、肾损害、贫血和骨损害等(CRAB症状)，又称为症状性MM或活动性MM(AMM)。MM的发病有三个阶段:由意义未明的单克隆丙种球蛋白血症(MGUS)可以演变为无症状骨髓瘤或冒烟型骨髓瘤(SMM)，进而进展为症状性MM。在确诊为MGUS前，大部分患者已经历了平均10年的免疫球蛋白升高的过程。目前，虽然靶向新药的应用使MM患者的生存期逐渐延长，但早期识别仍具有挑战性。通过文献学习，发现血清红细胞沉降率、血液黏滞度、血红蛋白水平减低和免疫球蛋白升高等可在MM病情阶段的早期升高，故联合应用一些检测手段对MM进行早期筛查、预防和管理其病情演变必要且可行。

肾意义单克隆免疫球蛋白血症的诊治进展下载：24 浏览：480

陈飞黄仲夏《肿瘤研究》 2020年3期

摘要:

肾意义单克隆免疫球蛋白血症(MGRS)是IKMG(国际肾病和单克隆免疫球蛋白病研究组)在2012年定义的一组单克隆免疫球蛋白相关肾损害的疾病，其克隆来源于低度增殖的B细胞或浆细胞克隆。研究发现其进展为多发性骨髓瘤(MM)的风险高于MGUS，经过针对其相应克隆化疗后肾功能可得到改善。MGRS不同于意义未明的单克隆免疫球蛋白血症(MGUS)，也不符合淋巴瘤或MM的诊断标准。2019年IKMG发表了关于MGRS的诊断共识，提出对小于50岁存在M蛋白血症和无法解释肾脏疾病的患者，建议进行肾活检，以明确MGRS的诊断。关于MGRS的治疗决策应遵循包括血液学家、肾病学家和病理学家参与的多学科合作模式来制定，通常采用可以清除引起肾损害的单克隆Ig的B细胞或浆细胞克隆的靶向药物基础的化疗，符合条件的患者造血干细胞移植治疗值得尝试。

人NR2F2基因的克隆及其生物信息学分析下载：73 浏览：495

海那尔·乌拉孜巴依1,2 叶尔那扎尔·努尔吐热1 陈小玲2 张富春1 张茂祥2 《生物技术研究》 2020年11期

摘要:

克隆人NR2F2(Nuclear Receptor subfamily 2,group F,member 2)基因并分析其生物学特性。[方法]根据NCBI数据库提供的人NR2F2基因序列设计其特异性引物,通过PCR扩增目的基因,并将其连接到p ET-28a载体上,然后进行酶切鉴定与DNA测序来确定人NR2F2基因克隆的正确性,再利用生物信息学在线工具分析人NR2F2蛋白的生物学特性。[结果]酶切鉴定与DNA测序结果表明人NR2F2基因开放阅读框为786 bp,编码261个氨基酸残基,分子量为29 162.79 Da,p I为5.96。NR2F2蛋白是主要位于细胞质和细胞核中的亲水性蛋白,不含跨膜结构域,无信号肽,其二级结构由α螺旋、无规则卷曲和延伸链构成,并且三级结构与二级结构预测结果一致。[结论]克隆获得人NR2F2基因,其编码的蛋白质属于类固醇/甲状腺激素受体超家族,α螺旋和无规则卷曲为二级结构中最主要的结构元件。GO注释分析表明,人NR2F2属于转录因子,参与序列特异性DNA结合、基因转录、RNA的生物合成、RNA代谢等过程。

萤火虫Luc基因的克隆及生物信息学分析下载：81 浏览：502

许勇张忠东李静王红萍王娟胡倩赵娜娜《生物技术研究》 2020年11期

摘要:

克隆野生型虫荧光素酶(luciferase)基因(Luc)全长序列并对其进行生物信息学分析。[方法]以虫荧光素酶报告栽体p XP2 DNA为模板,应用PCR技术,获得萤火虫Luc基因目标条带并克隆到p GEM-T-Easy载体,利用CD search、Prot Param、Prot Scale和SOMPA等11种预测软件对其保守区域、一级结构、理化性质、空间结构及活性区域等进行预测分析。[结果]该酶由551个氨基酸残基组成,属于可溶性亲水蛋白。其二级结构主要由无规卷曲和α-螺旋组成。三级结构以6q2m.1的A链为模板进行同源建模,其活性区域由125个氨基酸残基构成,面积和体积分别为2 483.879?2和1 834.454?3。在该蛋白质的活性区域之外,筛选出38个具备引入二硫键条件的潜在位点。[结论]成功克隆了Luc基因,并对野生型虫荧光素酶进行了生物信息学分析预测,为进一步过定点突变提高虫荧光素酶的热稳定性奠定了理论基础。

莲藕盐诱导基因CBL2的克隆与表达下载：467 浏览：496

韩玉燕杨健君程立宝《生物技术研究》 2020年9期

摘要:

CBL家族基因在植物耐盐过程中起到重要的作用。该实验从耐盐莲藕中克隆了CBL2基因的全长cDNA序列,对其表达进行分析。[方法]根据前期测序得到的转录组数据,发掘到莲藕CBL2的ESTs序列,并克隆到全长莲藕CBL2。在此基础上,对CBL2的表达进行分析。[结果]CBL2的cDNA序列长度645 bp,与其他物种CBL2的同源性分析对比结果表明,莲藕CBL2与山葡萄Va CBL2的相似率较高,同源性达90%以上。利用半定量和qRT-PCR对克隆到的莲藕基因CBL2的表达进行分析,结果表明CBL2受NaCl诱导,CBL2在NaCl处理后12 h表达量达到最大值。另外CBL2在ABA处理后表达量增加,处理6 h后达到最大值。[结论]CBL2在NaCl处理12 h与ABA处理6 h诱导表达,暗示CBL2基因在莲藕耐盐特性方面起重要的作用,并参与ABA信号转导途径。

铜绿假单胞菌黏附素蛋白的表达、纯化及多克隆抗体制备下载：71 浏览：478

宋静芳陈芬芳冯伟《生物技术研究》 2020年6期

摘要:

克隆铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)黏附素(adhesin)基因,表达纯化黏附素蛋白和获得多克隆抗体。[方法]设计特异性PCR引物,以铜绿假单胞菌DNA为模板,PCR法扩增铜绿假单胞菌黏附素基因,并将其进行双酶切后连接到表达载体pET28a,将重组质粒pET28a-adhesin转入大肠杆菌BL21,IPTG诱导目的蛋白表达,然后通过亲和层析进行纯化。再利用各种生物信息学软件分析该蛋白的生物学特性。将adhesin蛋白免疫小鼠,并获得了高浓度的多克隆抗体。[结果]显示成功得到了重组质粒pET28a-adhesin,并通过亲和层析得到重组adhesin蛋白。Adhesin的α-螺旋含量为46.37%,无规卷曲的含量为35.96%,β片层的含量为17.67%。模拟得到了adhesin蛋白的三级结构。该蛋白是一个跨膜蛋白,具有两个跨膜区。Adhesin蛋白具有良好的免疫原性,获得的抗血清效价高于1:5120。[结论]纯化得到了重组adhesin及其抗血清,为研究该蛋白的功能提供了实验基础。

Dhori病毒核蛋白基因的重组表达及其抗体制备下载：82 浏览：483

刘振明1 沈姝2 阿布力米提·莫明1 史深3 刘希佳2 丁军涛1 邓菲2 张渝疆3 孙素荣1 《生物技术研究》 2020年6期

摘要:

表达和纯化Dhori病毒(DHOV)核蛋白(NP),并制备多克隆抗体。[方法]RT-PCR扩增NP基因,并克隆至原核表达载体pET-28a和真核表达载体pcDNA3.1中。将重组质粒pET-28a-NP转化至大肠杆菌BL21中诱导表达,SDS-PAGE分析重组蛋白NP(rNP)的表达并亲和层析纯化rNP,以抗DHOV阳性羊血清检测其抗原性,免疫新西兰兔制备抗血清,以ELISA法检测其效价。将pcDNA3.1-NP转染至Vero细胞,以间接免疫荧光法评估抗体的结合活性,Western Blotting检测抗体与重组蛋白的特异性反应能力。[结果]pET-28a-NP和pcDNA3.1-NP重组质粒构建正确,原核表达的rNP约为55.3 kDa,并能被阳性羊血清识别,制备的抗体效价为1:409 600,能特异性识别真核及原核表达产物。[结论]成功表达和纯化rNP,并制备了多克隆抗体,可用于深入研究DHOV核蛋白的生物学特性及其检测试剂。

非洲爪蛙prmt5.L基因的克隆及时空表达谱分析下载：72 浏览：486

曹青1 刘浩1 沈滟1 刘晨2 《生物技术研究》 2020年4期

摘要:

克隆非洲爪蛙prmt5. L基因并分析其在胚胎发育中的时空表达谱。[方法]收集胚胎,提取总RNA,反转录制备c DNA。设计特异引物,PCR扩增prmt5. L基因的ORF序列,连接到p CS2+载体构建p CS2+prmt5. L重组质粒,连接位点为EcoRⅠ和XhoⅠ。经双酶切和测序验证成功构建p CS2+prmt5. L重组质粒。将p CS2+prmt5. L重组质粒用EcoRⅠ酶切,T7 RNA聚合酶转录获得prmt5. L的反义探针。收集不同时期的爪蛙胚胎,固定并脱水后经原位杂交检测prmt5. L在胚胎发育中的表达情况。通过序列比对和进化树分析PRMT5在进化中的保守性。[结果]成功克隆非洲爪蛙prmt5. L基因,原位杂交检测了prmt5. L在早期胚胎中的时空表达谱。序列比对和进化树发现prmt5. L蛋白在进化中非常保守。[结论]成功构建了p CS2+prmt5. L重组质粒。prmt5. L基因在胚胎发育中呈现动态表达且prmt5. L蛋白在进化中非常保守。

大肠杆菌UvrB基因的克隆、表达与功能研究下载：72 浏览：491

方佳炜1 张梦2 杨一鸣1 叶依杨1 王中山3 《生物技术研究》 2020年4期

摘要:

在大肠杆菌表达系统表达UvrB蛋白,优化其表达和纯化的条件,并初步研究其对抗紫外线伤害的功能。[方法]克隆大肠杆菌MG1655菌株UvrB编码序列,采用酶切连接的方法构建表达载体p Waldo-GFP-UvrB,并转入BL21(DE3)表达菌株诱导蛋白质表达,采用Ni-NTA亲和层析以及分子筛层析的方法纯化蛋白质,采用紫外光刺激的方法研究其细胞内功能。[结果]成功构建UvrB表达载体,获得UvrB在BL21(DE3)中重组菌株,其表达条件为22℃,0. 2 mmol/L IPTG诱导20 h,UvrB以可溶蛋白的形式存在。SDS-PAGE结果显示UvrB蛋白质分子量约76 k Da与预期相符;经纯化后UvrB蛋白质得率约为0. 6 mg/L培养基,纯度> 85%,为其进一步研究奠定了基础。[结论]研究克隆并构建了大肠杆菌UvrB蛋白的原核表达体系,优化了其纯化方案,得到纯度> 85%的可溶UvrB蛋白质,为进一步研究UvrB蛋白质功能奠定了基础。

魏雪玲尚方建石哲芳刘奇《生物技术研究》 2020年3期

摘要:

研究与白假丝念珠菌毒力相关的RAPD电泳条带的基因信息,明确这些条带是否来源于已知的毒力调控基因。[方法]通过对相关的白假丝酵母菌重新进行RAPD-PCR,切胶回收,以回收的DNA作为模板进行大量扩增,构建TA克隆,送测序。将获得的DNA信息登录Gen Bank数据库进行比对,寻找与包含这些条带信息的蛋白质。查阅文献,进行生物信息学分析,明确条带的基因信息与已发现的白假丝酵母菌调控基因之间的关系。[结果]白假丝酵母菌RAPD的450 bp条带为Abp1p(ABP1)蛋白的基因片段。[结论]Abp1p(ABP1)基因的过表达可能与下调磷脂酶表达有关,但具体机制有待进一步研究。

人肺炎链球菌快速检测胶体金试纸的研制下载：86 浏览：488

李杰1 程雨洁1 宋慧茹1 任萌1 王毅1,2,3 杨波1,2,3 胡征1,2,3 《生物技术研究》 2020年1期

摘要:

研制一种快速检测人肺炎链球菌(S. pneumoniae)的免疫胶体金层析试纸。[方法]对肺炎链球菌表面蛋白A(pneumococcal surface protein A,PspA)基因序列(Gen Bank:U89711)作生物信息学分析,选取抗原表位强、种内同源性高的片段克隆表达纯化重组蛋白rPspA,并免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体;以双抗夹心法制备胶体金免疫层析试纸,并对其特异性、灵敏度以及稳定性进行验证分析。[结果]制备的胶体金试纸对rPspA最低检测限达到0. 1pg/m L,可在15min内完成对肺炎链球菌的检测,与其他10种重要呼吸道病原菌无交叉反应;试纸条在25℃条件下保存6个月仍具有良好的重复性和稳定性。[结论]PspA蛋白具有高度的表面暴露性和较强的抗原性,可作为Sp的检测标志物,以其抗体为基础制备的胶体金免疫层析试纸,适用于Sp菌感染的临床快速检测。

人Smurf1基因真核表达质粒的构建和表达下载：65 浏览：488

李莎莎1 贺虹2 崔冠一1 欧丽娜1 邓博1 王梅林1 《生物技术研究》 2019年10期

摘要:

构建人Smurf1基因的真核表达载体并检测其表达和细胞亚定位。[方法]PCR法从人胚肾细胞HEK-293T中扩增Smurf1基因的ORF序列,将其插入到带Flag标签的p CMV5真核表达载体,插入位点为限制性内切酶SalⅠ和XbaⅠ之间。酶切并测序鉴定该质粒的正确性。将成功构建的质粒Flag-Smurf1转染HEK-293T细胞和Hela细胞,Western Blotting检测Smurf1蛋白的表达情况;转染Mv. 1. Lu细胞,免疫荧光检测Smurf1蛋白在细胞中的亚定位。[结果]成功扩增出Smurf1基因的ORF序列;连入p CMV5中获得了质粒Flag-Smurf1;酶切鉴定得到2. 2 kb大小的片段,测序结果显示连入的是Smurf1基因的c DNA序列正确。Western Blotting结果显示该质粒可在HEK-293T细胞和Hela细胞中表达,表达大小约为80 k Da,符合预期。免疫荧光实验结果显示过表达的Smurf1主要定位在细胞膜上。[结论]成功构建了带Flag标签的人Smurf1基因的真核表达质粒,该质粒可在细胞中顺利表达。

软枣猕猴桃ICE1基因克隆与生物信息学分析下载：79 浏览：490

张庆田1 范书田2 李昌禹2 艾军2 秦红艳2 《生物技术研究》 2019年5期

摘要:

为研究软枣猕猴桃ICE1基因的生物学功能及抗寒分子机制奠定基础。[方法]以4℃低温处理24 h的软枣猕猴桃(Actinidia arguta Planch) c DNA为模板,通过反转录PCR技术克隆ICE1基因。[结果]该基因c DNA长1524 bp,可编码507个氨基酸。生物信息学分析显示ICE1基因是编码MYC2型的b HLH转录因子,编码蛋白是定位于细胞核的非跨膜亲水蛋白。推导的氨基酸序列与中华猕猴桃(Actinidia chinensis var. chinensis)和山葡萄(Vitis amurensis) ICE1存在着较高的同源性。[结论]成功克隆到软枣猕猴桃抗寒转录因子命名为AaICE1。

金黄色葡萄球菌ymdB基因的克隆表达及生物信息学分析下载：71 浏览：491

夏佳音1 陈新江2 李文通2 吴佳艳2 羊晓敏2 《生物技术研究》 2019年9期

摘要:

克隆、表达金黄色葡萄球菌ymd B基因,并对其编码产物进行生物信息学分析。[方法]以金黄色葡萄球菌ATCC 25923菌株的基因组DNA为模板,用聚合酶链式反应扩增ymd B基因,将扩增基因酶切后与表达载体pET-32a(+)连接,构建重组质粒并转化大肠杆菌TG1,增菌培养后提取质粒,经PCR、基因测序鉴定后,再转化大肠杆菌BL21(DE3),对转化菌株进行诱导后,进行10%SDS-PAGE分析。使用Protparam、PSORT、CDD、Signal P 4. 1、TMpred、Net Phos 3. 1 Server、PSIPRED、SWISS-MODEL等软件,分析YmdB蛋白的氨基酸数目、相对分子质量、理论等电点、带电荷氨基酸总数、半衰期、稳定性、疏水性、亚细胞定位、保守结构域、信号肽、跨膜区、磷酸化位点、二级结构、三维结构等。[结果]构建了表达载体pET-32a(+)-ymd B,在37℃经异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后获得表达。YmdB蛋白由266个氨基酸组成,相对分子质量为30134. 53Da,等电点为6. 23,正电荷氨基酸总数为33个,负电荷氨基酸总数为35个,在大肠杆菌内的半衰期为10 h以上,是稳定的亲水蛋白质,定位于细胞质中,与YmdB蛋白家族具有相似的保守结构域,没有信号肽,有一个跨膜区和14个磷酸化位点,二级结构中ɑ螺旋、β折叠和无规则卷曲分别占42. 11%、9. 40%、48. 49%,三维空间结构与二级结构预测结果大致相同。[结论]成功克隆、表达了金黄色葡萄球菌ymdB基因,并对YmdB蛋白进行了生物信息学分析,为深入研究该蛋白的分子作用机理打下一定基础。

黄瓜Cu/Zn-SOD基因克隆及可溶性表达和纯化下载：83 浏览：500

陈梦瑶冯超越南天豪陈星辉冯雨彤朱振洪《生物技术研究》 2019年6期

摘要:

克隆黄瓜Cu/Zn-SOD基因,并利用大肠杆菌进行可溶性表达、纯化及活性测定。[方法]采用Trizol法提取黄瓜表皮的总RNA,然后设计特异性引物,通过RT-PCR技术克隆获得黄瓜Cu/Zn-SOD基因。该基因与p GEX2T载体相连后,转化大肠杆菌BL21(DE3),摸索可溶性表达方法。利用GST亲和层析方法纯化目标蛋白,SOD酶活性测定采用邻苯三酚法。[结果]成功地克隆了全长为459 bp的黄瓜Cu/Zn-SOD基因,编码152个氨基酸。Protein Blast分析表明其结构域中分别包含Cu2+、Zn2+结合位点,为典型的Cu/Zn-SOD酶。目标蛋白可溶性表达条件是16℃、0. 1 mmol/L IPTG诱导20 h。SDS-PAGE分析表明GST亲和层析成功地获得重组黄瓜Cu/Zn-SOD。活性测定表明两次纯化的蛋白样品SOD酶活力分别为2 328. 9 U/m L、2 144. 7 U/m L。[结论]从黄瓜表皮中克隆获得Cu/Zn-SOD基因,该基因在大肠杆菌系统中获得可溶性表达,纯化后的重组蛋白具有较高的SOD酶活力。

小叶章PPDK基因的克隆和生物信息学分析下载：81 浏览：489

王丽媛张玉徐明怡伍一宁冷海楠许楠倪红伟《生物技术研究》 2019年5期

摘要:

获得小叶章PPDK的cDNA序列,推测蛋白氨基酸理化性质及二三级结构等,以及已知物种PPDK氨基酸系统进化分析。[方法]利用RT-PCR技术扩增PPDK序列,通过ProtParam、Blast、THMHMM、SOPMA等生物信息软件分析序列。[结果]获得了小叶章PPDK的c DNA序列,长1 035 bp,相对分子量41. 910 kDa,等电点为9. 70,氨基酸中含量最高的是丝氨酸,72个;蛋白二级结构中无规卷曲占48. 83%,不含信号肽和跨膜结构,氨基酸系统进化树结果分析发现小叶章PPDK与二穗短柄草、水稻亲缘关系最近。[结论]小叶章PPDK含有385个氨基酸,含1个PDRP活性调控位点,72个参与信号传导的磷酸化位点。

单增李斯特菌lmo2192基因克隆与表达下载：81 浏览：489

李红欢马勋钱凌霄李庆辉刘扬扬《生物技术研究》 2019年3期

摘要:

对单增李斯特菌新疆绵羊脑炎临床分离株LM90SB2的lmo2192基因进行克隆及原核表达。[方法]利用PCR方法扩增lmo2192基因,连接p MD19-T载体进行克隆,筛选阳性菌进行测序比对。构建重组表达质粒p ET32a-2192,将其转入大肠杆菌感受态细胞,经诱导表达,利用SDS-PAGE与Western Blotting鉴定重组蛋白。[结果]扩增lmo2192基因序列长度为969 bp,与预期一致。该基因在大肠杆菌中大量表达,经SDS-PAGE和Western Blotting鉴定分析该产物为56 k Da左右的融合重组蛋白,与预期大小一致。[结论]成功克隆lmo2192基因,并获得大量表达,为进一步研究该基因功能奠定理论基础。

尼罗罗非鱼ZAP-70蛋白的原核表达、纯化及其多抗制备下载：84 浏览：489

潘传燕1 冯鹏霏1 林勇1 罗洪林1张永德1 苏乾莲2 《生物技术研究》 2019年3期

摘要:

构建尼罗罗非鱼ZAP-70原核表达载体,纯化其重组蛋白并制备多克隆抗体。[方法]采用无缝克隆技术构建尼罗罗非鱼ZAP-70重组表达载体,并转入大肠杆菌B21中诱导表达,将表达的ZAP-70蛋白免疫日本大耳兔得到多克隆抗体,采用Western Blotting和ELISA技术鉴定抗体的特异性和效价。[结果]成功构建原核表达重组质粒p ET-B2m-ZAP-70,诱导表达的重组蛋白分子量约为39 k Da,主要以包涵体的形式表达;获得效价为1∶512 000的多克隆抗血清,WB检测显示该抗体能够特异性的识别所表达的ZAP-70重组蛋白。[结论]尼罗罗非鱼ZAP-70重组质粒在大肠杆菌B21中高效表达,分子量约为39 k Da,该蛋白具有良好的免疫原性,为进一步探索ZAP-70在尼罗罗非鱼免疫系统中的功能奠定了基础。

拟南芥肌醇半乳糖苷合成酶与棉子糖合成酶的体外催化活性比较下载：82 浏览：26

郑小芬李晓霞黄金兰余方回刘妙玲范芳黄迎娣张玲周英彪《生物技术研究》 2019年1期

摘要:

基因克隆及原核表达纯化后比较拟南芥的2个肌醇半乳糖苷合成酶及2个棉子糖合成酶的体外催化活性,为微生物法或酶法合成棉子糖尊定基础。[方法]RT-PCR克隆拟南芥的肌醇半乳糖苷合成酶(GolS1及GolS3)与棉子糖合成酶(RafS1及RafS5)的基因,分别构建原核表达菌株,诱导表达纯化获得酶,电泳检测及蛋白定量后进行体外酶催化反应,HPLC分析产物。[结果]克隆到GolS1与GolS3及RafS1与RafS5的基因,原核表纯化获得纯酶,以反应体系中目标产物生成速率衡量,GolS1与GolS3催化速率分别为0.51和0.28mmol/(mg·min),RafS1与RafS5的催化速率分别为0.45和0.21mmol/(mg·min)。[结论]拟南芥的肌醇半乳糖苷合成酶(GolS1及GolS3)与棉子糖合成酶(RafS1及RafS5)基因经异源表达后具有良好酶活,其中GolS1酶活是GolS3的1.82倍,RafS1酶活是RafS5的2.14倍。

	在线客服
	客服电话：400-188-5008
	客服邮箱：service@ccnpub.com
	投诉举报：feedback@ccnpub.com

	在线客服：：点击联系客服
	联系电话：：400-188-5008
	客服邮箱：：service@ccnpub.com
	投诉举报：：feedback@ccnpub.com