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抗c-MET纳米抗体原核表达的优化研究
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摘要:
c-Met是酪氨酸激酶受体的一种,由MET基因编码产生。肝细胞生长因子(HGF)作为c-Met唯一的天然配体,与其结合后激活相关下游通路,参与肿瘤的增殖、迁移、侵袭等方面。
纳米抗体是骆驼科动物中发现的抗体的一个亚类,是由单个多肽链组成的多功能分子结合支架。纳米抗体优越的性能决定了其在生物医学、食品科学等领域的广泛应用。原核诱导表达是一种利用细菌表达系统来表达外源蛋白的技术。原核诱导纯化是一种高效、准确、可靠的蛋白质表达和纯化技术,可以广泛应用于生物技术、医药和农业等领域。本课题探究了不同温度和不同时间下诱导大肠杆菌表达c-Met纳米抗体蛋白的产量和纯化工艺问题。设置25℃和30℃两个大组,分别在0小时、6小时、12小时、18小时、24小时取样进行SDS蛋白电泳,考马斯亮蓝染色后观察确定在25℃下24h蛋白表达水平最高,通过初步纯化实现了实验室内的高纯度蛋白的获取。本课题通过将重要外源蛋白基因分子构建到质粒表达系统,然后再导入到大肠杆菌中,利用大肠杆菌的表达系统实现外源蛋白的表达和纯化,为其应用研究奠定坚实的基础。
纳米抗体是骆驼科动物中发现的抗体的一个亚类,是由单个多肽链组成的多功能分子结合支架。纳米抗体优越的性能决定了其在生物医学、食品科学等领域的广泛应用。原核诱导表达是一种利用细菌表达系统来表达外源蛋白的技术。原核诱导纯化是一种高效、准确、可靠的蛋白质表达和纯化技术,可以广泛应用于生物技术、医药和农业等领域。本课题探究了不同温度和不同时间下诱导大肠杆菌表达c-Met纳米抗体蛋白的产量和纯化工艺问题。设置25℃和30℃两个大组,分别在0小时、6小时、12小时、18小时、24小时取样进行SDS蛋白电泳,考马斯亮蓝染色后观察确定在25℃下24h蛋白表达水平最高,通过初步纯化实现了实验室内的高纯度蛋白的获取。本课题通过将重要外源蛋白基因分子构建到质粒表达系统,然后再导入到大肠杆菌中,利用大肠杆菌的表达系统实现外源蛋白的表达和纯化,为其应用研究奠定坚实的基础。
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